检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2013年第2期26卷 166-170页

作者：毛群颖高帆郝春生董承红高强王超姚昕吴星邵杰朱凤才梁争论王军志中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京生物制品研究所有限责任公司第二研究室北京100024 中国医学科学院医学生物学研究所病毒免疫室云南昆明650118 北京科兴生物制品有限公司研发中心北京100085 华兰生物工程股份有限公司研发中心河南新乡453003 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009

目的通过检测乳鼠模型、健康婴幼儿和疫苗免疫后目标人群的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体效价,为确定EV71疫苗保护水平提供基础数据。方法 6份不同EV71病毒株免疫血清经中和抗体准确定量后,分别通过两个EV71乳鼠攻毒模型,... 详细信息

目的通过检测乳鼠模型、健康婴幼儿和疫苗免疫后目标人群的肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)中和抗体效价,为确定EV71疫苗保护水平提供基础数据。方法 6份不同EV71病毒株免疫血清经中和抗体准确定量后,分别通过两个EV71乳鼠攻毒模型,检测EV71中和抗体保护水平。采用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,分别对健康婴幼儿及疫苗免疫后血清进行中和抗体准确定量。结果在2个乳鼠攻毒模型中,6份免疫血清的中和抗体保护水平接近,ED50分别为10～50 U和6.1～54.2 U;婴幼儿人群7、12和24月龄抗体阳性率分别为45.0%、48.8%和56.8%,阳性人群的抗体效价分别为113.8、120.3和330.6U/m(l均值为173.2 U/m)l,母亲抗体阳性率和效价分别为86.7%和114.3 U/ml;中、高剂量疫苗2针免疫后,婴幼儿抗体阳性率均为100%,效价为356.0和1 136.2 U/ml,较婴幼儿人群自然感染水平高2.1～6.6倍。结论应用标准化的中和抗体检测法和EV71中和抗体定值标准品,确定了以U/ml为单位的乳鼠攻毒抗体保护水平及婴幼儿人群抗体水平和疫苗免疫后抗体水平,为EV71疫苗免疫人群中和抗体保护水平的确定提供了依据。

关键词：手足口病肠道病毒A型,人中和抗体

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重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究

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药物分析杂志 2012年第1期32卷 107-110页

作者：高凯王兰陶磊于雷李响史新昌刘兰饶春明中国食品药品检定研究院重组技术产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部... 详细信息

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。

关键词：重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 反相高效液相色谱酶标记免疫吸附测定(ELISA) 等电聚焦电泳肽图分析质量控制生物学活性

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百日咳攻击菌液氮保存毒力稳定性的动态监测

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中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 909-910页

作者：王丽婵卫辰张路民徐颖华骆鹏张庶民侯启明中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的动态监测百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的毒力稳定性。方法百日咳菌种复苏、培养3代后收集菌苔,比浊稀释后冻存。2008～2011年,每年采用改良脑腔攻击试验进行菌毒力的动态监测,分析其毒力稳定性。结果2008～2011年,制备... 详细信息

目的动态监测百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的毒力稳定性。方法百日咳菌种复苏、培养3代后收集菌苔,比浊稀释后冻存。2008～2011年,每年采用改良脑腔攻击试验进行菌毒力的动态监测,分析其毒力稳定性。结果2008～2011年,制备的百日咳攻击菌于液氮中保存,4年中毒力无明显变化(P>0.05),稳定性良好。结论百日咳攻击菌液氮保存毒力稳定,可用于百日咳疫苗效力试验攻击菌的保存。

关键词：百日咳攻击菌液氮稳定性

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我国病毒性肝炎疫苗的研发进展

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中国药学杂志 2012年第18期47卷 1425-1429页

作者：方鑫梁争论中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的总结我国病毒性肝炎疫苗的研发进展。方法在查阅国内外文献的基础上,对国内已应用的病毒性肝炎疫苗及正在研发的疫苗(包括预防性和治疗性)进行总结和分析。结果与结论病毒性肝炎是由不同肝炎病毒引起的全球性传染病,为我国的重要公... 详细信息

目的总结我国病毒性肝炎疫苗的研发进展。方法在查阅国内外文献的基础上,对国内已应用的病毒性肝炎疫苗及正在研发的疫苗(包括预防性和治疗性)进行总结和分析。结果与结论病毒性肝炎是由不同肝炎病毒引起的全球性传染病,为我国的重要公共卫生问题之一。接种疫苗是预防肝炎病毒感染最有效的手段。目前我国正在开发多个新型预防性和治疗性疫苗。笔者综述国内病毒性肝炎预防性及治疗性疫苗的研究进展,分析疫苗研发中存在的问题及应用策略,并对病毒性肝炎疫苗的发展趋势进行了展望。

关键词：病毒性肝炎疫苗保护效果

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甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因功能的初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第1期32卷 6-11页

作者：陈沁李娜梁吴宇王斌魏华曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室 330047

目的利用λRed重组系统敲除甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因构建突变株，并且制备相应的回复株，进而初步研究该基因的功能。方法PCR扩增得到上、下游同源臂，与卡那霉素抗性基因片段共同构建打靶片段，将其浓缩后转化含bRed重组系统的甲型... 详细信息

目的利用λRed重组系统敲除甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因构建突变株，并且制备相应的回复株，进而初步研究该基因的功能。方法PCR扩增得到上、下游同源臂，与卡那霉素抗性基因片段共同构建打靶片段，将其浓缩后转化含bRed重组系统的甲型副伤寒沙门氏菌（50973株），经PCR鉴定后得到突变株；将重组酶表达质粒pACUl84与ompW基因的调控区和编码区序列连接后电转入突变株中，双酶切鉴定得到相应的回复株；***及Western blot鉴定野生株、突变株与回复株中OmpW蛋白的表达情况；生化鉴定野生株、突变株与回复株，并观察野生株与突变株生长曲线的差异；测定野生株、突变株与回复株活菌半数致死量（LD50），以此来观察ompW基因与细菌毒力的相关性。结果在甲型副伤寒沙门氏菌50973株中成功敲除了ompW基因，并构建了相应回复株；野生株与回复株均可表达出OmpW蛋白，突变株没有出现该蛋白的表达；野生株、突变株与回复株生化鉴定结果均为甲型副伤寒沙门氏菌，且野生株和突变株生长无明显差异；三者LD50均不存在显著差异。结论甲型副伤寒沙门氏菌的ompW基因与该菌致病毒力无相关性，但突变株的构建为后续研究该基因具体功能提供了基础。

关键词：甲型副伤寒沙门氏菌 ompW 基因敲除功能研究

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HIV中和抗体评价方法研究进展

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药物分析杂志 2012年第8期32卷 1498-1502页

作者：聂建辉王佑春卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室中国食品药品检定研究院细胞室北京100068

诱导广谱有效的中和抗体被认为是预防性疫苗成功的关键,HIV中和抗体检测方法的建立和标准化为HIV疫苗评价和设计提供指导,也为不同HIV疫苗的比较提供了平台。本文从方法的建立、假病毒株的选择、评价标准的制定、评价策略的确定、该方法... 详细信息

诱导广谱有效的中和抗体被认为是预防性疫苗成功的关键,HIV中和抗体检测方法的建立和标准化为HIV疫苗评价和设计提供指导,也为不同HIV疫苗的比较提供了平台。本文从方法的建立、假病毒株的选择、评价标准的制定、评价策略的确定、该方法在HIV其它研究领域的应用等方面,对目前应用最广泛的以假病毒为基础的中和抗体评价方法进行了综述。

关键词：人类免疫缺陷病毒中和抗体艾滋病疫苗 Tzm-bl细胞评价标准制定假病毒株选择

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酶联免疫吸附法测定破伤风人免疫球蛋白效价的试验研究

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药物分析杂志 2012年第10期32卷 1722-1725,1717页

作者：张华捷顾磊赵建荣吕慧贤侯启明张庶民中国食品药品检定研究院血清室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的:为建立破伤风人免疫球蛋白(HTIG)效价测定的动物替代方法奠定基础。方法:选取7家企业生产的9批HTIG待检品,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和小鼠毒素中和试验法(TNT)测定其效价,并对2种方法检测结果的一致性进行评价。结果:ELISA法... 详细信息

目的:为建立破伤风人免疫球蛋白(HTIG)效价测定的动物替代方法奠定基础。方法:选取7家企业生产的9批HTIG待检品,分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和小鼠毒素中和试验法(TNT)测定其效价,并对2种方法检测结果的一致性进行评价。结果:ELISA法测定结果的回收率达到95%～105%,RSD在10%以内,配对t检验、直线回归和Bland-Altman分析表明ELISA法与TNT法的检测结果具有良好的一致性和相关性。结论:为ELISA法替代TNT法用于HTIG效价测定提供了数据支持。

关键词：破伤风人免疫球蛋白被动免疫制剂效价测定酶联免疫吸附毒素中和试验 ELISA法与TNT法一致性

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百日咳黏附素的原核表达及其单克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1344-1348页

作者：徐颖华张华捷谭亚军吴丽洁王丽婵侯启明张庶民中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳... 详细信息

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化*** M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性。以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单抗进行鉴定。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达;纯化的重组Prn蛋白的纯度达95%以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合。获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应。结论原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料。

关键词：百日咳黏附素原核细胞基因表达单克隆抗体

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戊型肝炎病毒ORF3蛋白研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第9期32卷 825-830页

作者：周艳耿彦生杨军王佑春中国食品药品检定研究院细胞室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 美国圣祖德儿童研究医院外科

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）是戊型肝炎的病原体，是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员，无包膜、正义、单链RNA病毒，病毒基因组全长约7．2kb，由3个开放阅读框ORFl、ORF2和ORF3组成，其中ORFl编码与病毒复制、转录相关... 详细信息

戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）是戊型肝炎的病原体，是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的惟一成员，无包膜、正义、单链RNA病毒，病毒基因组全长约7．2kb，由3个开放阅读框ORFl、ORF2和ORF3组成，其中ORFl编码与病毒复制、转录相关的酶等非结构蛋白，ORF2编码660aa的病毒衣壳蛋白，ORF3编码小分子的磷蛋白。

关键词：戊型肝炎病毒 ORF3蛋白单链RNA病毒 ORF2 肝炎病毒属病毒基因组开放阅读框非结构蛋白

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LC-MS／MS法对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定

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药学学报 2012年第2期47卷 216-222页

作者：李响高向东陶磊裴德宁郭莹饶春明王军志中国食品药品检定研究院重组技术产品室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子... 详细信息

运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子阱两种串联质谱测定各个肽段的b,y碎片离子,分析测定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。通过LC-ESI-Q-TOF完成了融合蛋白FP3的76%氨基酸序列测定,通过LC-ESI-Trap完成余下24%氨基酸序列测定。液质联用、串联质谱法测定蛋白质氨基酸序列快速、灵敏、准确,是对重组蛋白结构分析和确证的重要手段。

关键词：液质联用融合蛋白氨基酸序列

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