检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒病杂志 2012年第5期2卷 341-346页

作者：王文波聂建辉宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室北京100050

目的对1株人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF_07BC亚型的膜蛋白进行突变,以暴露保守的中和表位,从而增强其中和活性。方法通过PCR定点突变获得突变克隆。以假病毒系统评价病毒感染力和改造效果。结果获得了FE、FE-2G12、FE-S365A、FE-22L、... 详细信息

目的对1株人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF_07BC亚型的膜蛋白进行突变,以暴露保守的中和表位,从而增强其中和活性。方法通过PCR定点突变获得突变克隆。以假病毒系统评价病毒感染力和改造效果。结果获得了FE、FE-2G12、FE-S365A、FE-22L、FE-N197D、FE-N197Q和FE-N301Q突变体,与其改造前的病毒株S939比较,在感染能力方面:FE-S365A增强约45%,而FE-N301Q下降约90%,N197Q失去了感染能力,其他突变体无明显变化;在中和活性方面:FE对2F5敏感性提高11倍以上;FE-N197D对单克隆抗体(单抗)2F5敏感性增强了63倍,对单抗4E10增强了3倍,对单抗b12增强了17倍,而且对5份阳性血浆的中和敏感性增强了2倍以上;FE-N301Q对单抗2F5的敏感性增强了119倍,对单抗4E10和b12的敏感性有一定增强,而且对6份阳性血浆的中和敏感性增强了2倍以上。FE-S365A和FE-F22L对病毒中和活性基本无影响。结论对HIV-1膜蛋白关键位点的改造能够显著增强病毒的中和敏感性。对改造后膜抗原的免疫原性需要进一步评价。

关键词： HIV膜蛋白定点突变假病毒

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基于HIV中和单抗4E10表位的免疫原设计和效果评价的初步研究

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中国病毒病杂志 2012年第5期2卷 335-340页

作者：聂建辉王文波宋爱京王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室北京100050

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白... 详细信息

目的构建基于4E10表位的免疫原,评价其在豚鼠体内诱导中和抗体的能力。方法构建3种免疫原,将3个4E10表位基因串联后连接至GST基因上融合表达蛋白GST-3EP;将4E10表位基因连接柔性连接子GGSGG,再将4个该肽串联后连接至CKS基因融合表达蛋白CKS-4EP;将合成的4E10表位多肽通过Sulfo-SMCC连接至P64K载体蛋白构建结合型免疫原PKEP。用SDS-PAGE电泳的方法检测各种免疫原的分子质量和纯度。用假病毒中和试验评价豚鼠体内中和抗体水平。结果蛋白电泳显示所有免疫原的分子量大小正确,纯度在95%以上。GST-3EP能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体,3次免疫后5只豚鼠4只阳转,阳转的豚鼠中2只中和抗体水平IC50>200,另外两只抗体水平在100左右。对各组血清50倍稀释后中和抑制率进行统计分析,3EP组与佐剂对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的融合蛋白GST-3EP 3次免疫后能在豚鼠体内诱导一定水平的中和抗体。

关键词：人类免疫缺陷病毒中和抗体融合蛋白偶联蛋白 4E10

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百日咳杆菌分子分型方法研究进展

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国际检验医学杂志 2012年第21期33卷 2621-2623页

作者：徐颖华张华捷侯启明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见。百日咳疫苗是预防百日咳最有效也是最经济的手段，然而，尽管世界上大多数国家自上世纪五十年代起就开始实施百日咳疫苗的免疫接种，使百日咳感染... 详细信息

百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病，人群普遍易感，其中尤以婴幼儿多见。百日咳疫苗是预防百日咳最有效也是最经济的手段，然而，尽管世界上大多数国家自上世纪五十年代起就开始实施百日咳疫苗的免疫接种，使百日咳感染率和病死率大大下降，但据WHO统计报道，2008年全世界仍有高达i9．5万的儿童死于百日咳及其并发症，且90％的病例来自不发达国家和发展中国家。即便是发达欧美国家或百日咳疫苗接种率很高的国家，百日咳发病率也有上升的趋势，即所谓的“百日咳再现”[1]。

关键词：百日咳杆菌分子分型诊断流行病学

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G亚属猴腺病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

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中国病毒病杂志 2012年第6期2卷 432-435页

作者：张荣建贺争鸣中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立G亚属猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)特异的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法根据G亚属SAdV基因保守区,设计特异性引物和TaqMan探针。制备重组质粒pGEM-TEasy-SAdVpo... 详细信息

目的建立G亚属猴腺病毒(simian adenovirus,SAdV)特异的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并研究实验猴群和猴源性生物制品中SAdV感染或污染情况。方法根据G亚属SAdV基因保守区,设计特异性引物和TaqMan探针。制备重组质粒pGEM-TEasy-SAdVpol标准品,建立标准曲线。经灵敏度、特异性、准确性和重复性评价后,检测33份猴粪便样本和4批次脊髓灰质炎疫苗。结果建立的FQ-PCR检测方法特异检测G亚属,与A、F亚属无交叉反应,准确性及重复性较好。标准曲线相关系数0.999,线性范围6lg(60～6×106拷贝),最低检出限可达6拷贝/μl。33份猴粪便样本中15份为阳性(45.5%),4批脊髓灰质炎疫苗均为阴性。结论建立的FQ-PCR检测方法可定量检测G亚属SAdV拷贝数,初步应用表明我国实验猴群中G亚属SAdV流行率较高,应加强监测避免人类感染的潜在风险。

关键词：猴腺病毒荧光定量PCR 检测方法

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猴腺病毒Ⅰ型间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用

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实验动物科学 2012年第4期29卷 1-4页

作者：张荣建贺争鸣中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的建立检测血清中猴腺病毒Ⅰ型(SAdV-1)抗体的间接免疫荧光方法(IFA),为检测实验猴群中SAdV-1的感染情况提供参考依据。方法用SAdV-1病毒感染BSC-1细胞,待50%细胞出现病变时,用胰蛋白酶消化以20μL 1×107个/mL浓度的细胞液滴到2... 详细信息

目的建立检测血清中猴腺病毒Ⅰ型(SAdV-1)抗体的间接免疫荧光方法(IFA),为检测实验猴群中SAdV-1的感染情况提供参考依据。方法用SAdV-1病毒感染BSC-1细胞,待50%细胞出现病变时,用胰蛋白酶消化以20μL 1×107个/mL浓度的细胞液滴到24孔镀膜玻片上,丙酮固定。利用制备的抗原片通过浓度滴定确定猴血清、羊抗猴二抗最佳工作条件。对IFA进行特异性、敏感性、重复性验证并初步检测猴血清样本。结果建立了SAdV-1抗体的间接免疫荧光检测方法。在采集的21份猴血清样本中,检出SAdV-1抗体阳性9例,12例血清检测为阴性。结论方法具有良好的特异性和稳定性,可作为SAdV-1检测的可靠方法。

关键词：猴腺病毒Ⅰ型间接免疫荧光

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针对诱导HIV-1中和抗体的膜蛋白抗原的优化研究进展

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中国病毒病杂志 2012年第5期2卷 321-325页

作者：王文波王佑春中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室细胞室北京100050

自1981年人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）被发现以来,尽管科研工作者在HIV感染的阻断及AIDS病毒治疗方面都取得了一些成绩,但尚未从疫苗角度解决HIV感染的问题,其瓶颈是没有一种有效的疫苗能调动机体产生强大的抗病毒感染能力。解决这一... 详细信息

自1981年人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）被发现以来,尽管科研工作者在HIV感染的阻断及AIDS病毒治疗方面都取得了一些成绩,但尚未从疫苗角度解决HIV感染的问题,其瓶颈是没有一种有效的疫苗能调动机体产生强大的抗病毒感染能力。解决这一问题的希望之一是设计优良的疫苗抗原,以诱导出针对HIV流行株的广谱中和抗体。

关键词： HIV膜蛋白中和抗体抗原改造

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登革病毒及登革热疫苗研究进展

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国际生物制品学杂志 2012年第6期35卷 292-297页

作者：李玉华(综述) 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室和虫媒病毒疫苗室北京100050

登革病毒是引起人类疾病最重要的虫媒病毒，其感染可导致登革热、登革出血热、登革休克综合征，甚至危及患者生命。近年来，登革病毒的感染地域不断扩大，越来越多的国家和地区出现登革热流行或暴发，给公共卫生事业造成了很大的经济负... 详细信息

登革病毒是引起人类疾病最重要的虫媒病毒，其感染可导致登革热、登革出血热、登革休克综合征，甚至危及患者生命。近年来，登革病毒的感染地域不断扩大，越来越多的国家和地区出现登革热流行或暴发，给公共卫生事业造成了很大的经济负担，对全球人类健康构成了极大威胁。为了加快安全有效的登革热疫苗的研发，此文就登革病毒结构、流行病学、致病机制、动物模型及疫苗的研究进展进行综述。

关键词：登革热病毒登革热疫苗登革热登革出血热登革休克综合征

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蛇毒血凝酶纯度分析方法研究

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药物分析杂志 2012年第8期32卷 1398-1401页

作者：程速远王超众李晶梁成罡王凤山山东大学药学院生化与生物技术药物研究所济南250012 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 齐齐哈尔市药品检验所齐齐哈尔161006 沈阳药科大学沈阳110016

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠... 详细信息

目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 ***-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 ***-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。

关键词：蛇毒血凝酶纯度测定非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等点聚焦体积排阻高效液相色谱

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肿瘤干细胞研究的问题和进展

肿瘤干细胞研究的问题和进展

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：谭亚军侯启明张庶民中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

近年来,肿瘤干细胞理论研究得到迅猛发展,它为我们重新认识肿瘤的起源和本质提供了新的方向和视角,但同时也存在争议。该文就肿瘤干细胞理论发展历程,目前该研究领域存在的一些问题,面临的挑战和最新研究进展作一综述。

关键词：肿瘤肿瘤干细胞肿瘤治疗

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阪崎肠杆菌ibpA基因的克隆、表达和纯化

阪崎肠杆菌ibpA基因的克隆、表达和纯化

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2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周

作者：赵志晶曾明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室

对阪崎肠杆菌CMCC45401和45402菌株的ibpA基因进行了克隆和测序,构建了原核表达载体pET30a(+)-ibpA(45401)和pET30a(+)-ibpA(45402),表达并纯化获得His-IbpA融合目的蛋白,以纯化蛋白免疫小鼠获得的抗血清印证了热休克条件下该蛋白的高... 详细信息

对阪崎肠杆菌CMCC45401和45402菌株的ibpA基因进行了克隆和测序,构建了原核表达载体pET30a(+)-ibpA(45401)和pET30a(+)-ibpA(45402),表达并纯化获得His-IbpA融合目的蛋白,以纯化蛋白免疫小鼠获得的抗血清印证了热休克条件下该蛋白的高水平表达。提取阪崎肠杆菌CMCC45401和45402菌株的基因组,经PCR获得ibpA基因。基因测序后定向重组连入pET30a(+),经酶切鉴定证实为阳性克隆,即pET30a(+)-ibpA(45401)和pET30a(+)-ibpA(45402)。重组质粒转化*** BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达,并对表达条件优化,以及通过SDSA-PAGE和Western blotting分析均表明IbpA蛋白得到了正确的表达,且表达产物以可溶性形式存在,优化条件下蛋白表达量约占菌体总蛋白70%。表达产物经Ni凝胶亲和层析,两种融合蛋白His-IbpA(45401)和His-IbpA(45402)纯度可分别达到98%和96%。纯化蛋白免疫小鼠,得到了高效价免疫血清。以小鼠抗血清检测到热休克状态下阪崎肠杆菌IbpA蛋白的表达水平增高。阪崎肠杆菌ibpA基因的克隆、表达和纯化,为进行后续研究奠定了物质基础。

关键词：阪崎肠杆菌 ibpA基因克隆原核表达纯化

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