检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2020年第6期33卷 671-675页

作者：刘兰史新昌韩春梅秦玺陶磊杨婧清范文红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的分析评价国内12家生产企业重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)理化对照品的质量情况。方法对rhG-CSF理化对照品进行常规检测(包括生物学活性、蛋白质含量、比活性、非还原SDS-... 详细信息

目的分析评价国内12家生产企业重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)理化对照品的质量情况。方法对rhG-CSF理化对照品进行常规检测(包括生物学活性、蛋白质含量、比活性、非还原SDS-PAGE纯度、反相高效液相纯度、等电点、N-端氨基酸序列)和结构确证(包括质谱分子量、液质肽图、二硫键分析)。结果12家生产企业的rhG-CSF理化对照品比活性大致范围在(6.0~12.0)×10~7IU/mg;纯度均大于96.0%;等电点主区带均在5.8~6.6区间内;N-端氨基酸序列为MTPLGPASSLPQSFL或TPLGPASSLPQSFLL;经结构确证,其主体结构相同。结论国内各生产企业自行控制的rhG-CSF理化对照品总体质量良好,可对制品进行质量控制。

关键词：重组人粒细胞刺激因子理化对照品质量控制结构确证质量评价

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重组人粒细胞刺激因子注射液比活性的对比分析

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中国生物制品学杂志 2020年第3期33卷 271-274页

作者：刘兰韩春梅范文红史新昌饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的评估国产重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)注射液比活性的总体水平。方法收集2009及2017年国家抽验性评价部分批次rhG-CSF样品的比活性数据,并与近5年进口注册检验部分批次r... 详细信息

目的评估国产重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)注射液比活性的总体水平。方法收集2009及2017年国家抽验性评价部分批次rhG-CSF样品的比活性数据,并与近5年进口注册检验部分批次rhG-CSF样品进行比较分析。结果 2009部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 74×10^8IU/mg,标准差为0. 10×10^8IU/mg;2017部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 83×10^8IU/mg,标准差为0. 15×10^8IU/mg;进口注册批次比活性数据的均值为0. 93×10^8IU/mg,标准差为0. 17×10^8IU/mg。结论国产rhG-CSF注射液质量不断提升,与进口制品间的差距在逐渐缩小,部分企业制品的质量已达到进口药品水平。

关键词：重组人粒细胞刺激因子注射液比活性

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重组人促红素等电点异构体分子体内活性强度分析

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中国生物制品学杂志 2020年第5期33卷 549-553页

作者：史新昌李响于雷周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的分析重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)各等电点异构体分子体内活性强度(单位时间单位摩尔量下产生体内活性量),找出最适作用分子。方法根据rhEPO等电点异构体体内比活性数据变化,构建等电点异构体分子与其体... 详细信息

目的分析重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)各等电点异构体分子体内活性强度(单位时间单位摩尔量下产生体内活性量),找出最适作用分子。方法根据rhEPO等电点异构体体内比活性数据变化,构建等电点异构体分子与其体内活性之间关系的数学模型,并进行解析。结果得到rhEPO等电点异构体分子体内活性与唾液酸数量关系:Si=0.628·e^(i-10)·(|i-10|+1)^-2+0.492,R^2>0.9880(i为正整数且16>i>8,表示rhEPO分子上唾液酸数量;Si表示某等电点异构体体内比活性,体内比活性单位10^5 IU/mg),在此基础上,进而提出rhEPO与其受体相互作用模型假说(电荷识别-分子内氢键重排-构象变化-排斥解离假说)。结论通过对rhEPO等电点异质性与体内比活性关系的进一步分析,阐述了rhEPO与其受体相互作用存在最适作用分子,并依据上述实验和数据分析提出了rhEPO与其受体相互作用的模型假说,为rhEPO体内和体外活性的研究提供了思路。

关键词：重组人促红素等电点异构体体内比活性最适作用分子电荷识别-分子内氢键重排-构象变化-排斥解离假说

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A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量HPLC检测方法的验证及应用

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中国生物制品学杂志 2020年第2期33卷 189-193页

作者：李亚南毛琦琦李茂光叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的验证A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量的检测方法。方法采用色谱柱XBridge Amide(4. 6 mm×150 cm,3. 5μm),流动相为乙腈、水、三乙胺(75∶25∶0. 1)的混合液,流速为1 mL/min,柱温为40℃,示差检测器温度为40℃,进样量为50μ... 详细信息

目的验证A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量的检测方法。方法采用色谱柱XBridge Amide(4. 6 mm×150 cm,3. 5μm),流动相为乙腈、水、三乙胺(75∶25∶0. 1)的混合液,流速为1 mL/min,柱温为40℃,示差检测器温度为40℃,进样量为50μL。同时验证该方法的系统适用性、特异性、线性范围、精密度、稳定性、准确度及定量限。采用该方法对3个厂家生产的30批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量进行检测。结果乳糖对照品色谱峰的理论塔板数为8 123,与其他色谱峰的分离度> 1. 5;乳糖对照品及供试品溶液图谱于相应保留时间处可见乳糖峰,阴性对照溶液未见该色谱峰;乳糖浓度在0. 050 03~0. 650 4 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为Y=3. 484 3×10^5X-7. 378 4×10^2,R^2=0. 999 97。批号为Y201409089-1、Y201501002和201410050的3批供试品溶液分别测定6次结果的RSD分别为0. 71%、1. 01%和1. 69%;分别于12个时间点测定结果的RSD分别为0. 25%、0. 38%和0. 58%;乳糖回收率分别为101. 67%、101. 93%、99. 43%,RSD分别为1. 37%、1. 20%、1. 37%。乳糖定量限为0. 4μg。30批A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖含量为8. 29~11. 05 mg/mL。结论该方法具有良好的精密度、稳定性及准确度,可作为A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中乳糖的检测方法。

关键词： A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗乳糖高效液相色谱法

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应用CE-LIF方法分析重组人1型单纯疱疹病毒的DNA限制酶酶切片段

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 37-42页

作者：李响胡金盼李永红任挺钧陈泓序周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 CE&Biopharma Sciex 北京100026

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧... 详细信息

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测方法,对重组人1型单纯疱疹病毒(rHSV-1)的DNA限制性酶切片段进行分析。方法:以rHSV-1为研究对象,用核酸提取仪提取其DNA,以DNA限制性内切酶NdeⅠ酶切,以SYBR^TM Gold nucleic acid作为荧光标记物,利用CE-LIF实现分离检测,通过DNA ladder计算片段大小。CE-LIF条件:采用涂层毛细管(有效长度30 cm,总长度40 cm,内径100μm),3.45 kPa压力进样3 s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-7 kV,分离时间40 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm。结果:新建方法可以对8个目标酶切片段分离检测,各片段峰迁移时间的RSD(n=6)均小于0.35%,片段峰1~7校正峰面积百分比的RSD(n=6)均小于5.6%,方法精密度良好。通过DNA ladder回归方程,对DNA酶切产物进行片段大小的计算,各片段大小计算结果RSD(n=6)均小于5.8%,且与琼脂糖凝胶电泳法测得结果相一致。结论:本研究建立的rHSV-1的DNA限制酶酶切片段CELIF分析法自动化程度高,灵敏度高,重复性好,试剂消耗及环境污染小,适用于rHSV-1的鉴别分析。

关键词：重组人1型单纯疱疹病毒 DNA限制酶酶切荧光标记激光诱导荧光检测毛细管电泳

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无细胞百日咳疫苗中百日咳毒素活性测定分析

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中国医药生物技术 2021年第4期16卷 343-347,377页

作者：谭亚军卫辰董国霞李喆王丽婵马霄中国食品药品检定研究院百白破疫苗和毒素室/卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)是鲍特氏菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,如淋巴细胞增多促进活性、组胺致敏活性、中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)簇集作用、胰岛激活作用、T细胞有丝分... 详细信息

百日咳毒素(pertussis toxin,PTx)是鲍特氏菌属百日咳杆菌产生的一种主要毒力因子,具有多种生物学活性,如淋巴细胞增多促进活性、组胺致敏活性、中华仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)簇集作用、胰岛激活作用、T细胞有丝分裂促进作用、红细胞凝集活性等[1-4],是引起百日咳众多临床症状的原因,同时也是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,APV)的主要保护性抗原组分[5]。

关键词：淋巴细胞增多百日咳杆菌无细胞百日咳疫苗百日咳毒素保护性抗原毒力因子促进作用临床症状

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改构溶瘤腺病毒DNA序列分析研究

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 43-47页

作者：刘兰史新昌黄永兴李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 赛默飞北京环贸实验室北京100013

目的:以改构的溶瘤腺病毒制品为研究对象,探讨DNA测序技术在基因治疗制品质量控制和质量标准制定中的作用。方法:提取并纯化一种改构溶瘤腺病毒制品的基因组DNA,对其基因组关键区段、非关键区段进行测序分析,发现变异体后应用第一代和... 详细信息

目的:以改构的溶瘤腺病毒制品为研究对象,探讨DNA测序技术在基因治疗制品质量控制和质量标准制定中的作用。方法:提取并纯化一种改构溶瘤腺病毒制品的基因组DNA,对其基因组关键区段、非关键区段进行测序分析,发现变异体后应用第一代和第二代DNA测序技术进行进一步分析和检测。结果:关键区段DNA序列与理论序列一致;非关键区段DNA序列与理论序列相似度大于99.9%;发现1个高变异区段,进一步分析结果显示:缺失1个胞嘧啶(C)的变异体占比5/9(克隆/克隆);缺失2个胞嘧啶(C)的变异体占比1/9(克隆/克隆);插入1个胞嘧啶(C)的变异体占比1/9(克隆/克隆)。结论:第一代和第二代DNA测序技术虽然各有优缺点,但只要相互组合使用得当,仍然可较好地用于基因治疗制品基因组的分析和质量控制。

关键词：改构溶瘤腺病毒制品基因治疗制品 DNA序列变异体第一代测序第二代测序

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食品来源粪肠球菌的全基因组分析

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食品安全质量检测学报 2021年第19期12卷 7572-7577页

作者：孙淑玥王珊珊崔生辉徐颖华卢雪梅广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006 中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的了解食品来源粪肠球菌的全基因组分子特征,并与临床分离菌株进行比较基因组学分析。方法对收集的食品来源粪肠球菌进行全基因组测序和生物信息学分析,比较分析3株食品来源粪肠球菌和7株已发表的临床分离粪肠球菌基因组,对比粪肠球... 详细信息

目的了解食品来源粪肠球菌的全基因组分子特征,并与临床分离菌株进行比较基因组学分析。方法对收集的食品来源粪肠球菌进行全基因组测序和生物信息学分析,比较分析3株食品来源粪肠球菌和7株已发表的临床分离粪肠球菌基因组,对比粪肠球菌基因组中携带的耐药基因、毒力基因和移动元件,筛选核心基因,构建系统进化树。结果 3株食品来源粪肠球菌染色体全基因组序列全长分别为2816436、3005875和2818728 bp,共含有2733、2853和2756个基因,基因平均鸟嘌呤和胞嘧啶(guanine and cytosine,GC)含量为38.0%。在全基因组核酸水平上,食品与临床分离的粪肠球菌线性关系良好,基因组结构高度相似。3株食品来源菌株基因组中含有3-7种耐药基因、8-19种毒力基因和42-67个移动元件,与临床分离菌株比较,无显著性差异(P>0.05)。系统进化树分析发现食品来源和临床分离粪肠球菌分布在一个进化分枝,分子遗传关系距离较近。结论本研究获得了食品来源粪肠球菌全基因组基本特征的背景材料,证实了食品来源和临床分离粪肠球菌进化溯源关系相近,基因组无显著差异(P>0.05),为后续食品工业界实际应用粪肠球菌的安全性评价奠定了基础。

关键词：粪肠球菌全基因组测序系统发育分析比较基因组学

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重组人1型单纯疱疹病毒样品的活性检测研究

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药物分析杂志 2020年第1期40卷 20-30页

作者：秦玺贾继宗毕华姚文荣段茂芹贾春翠李永红饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 北京万泰生物药业股份有限公司北京102206

目的:建立分析重组人1型单纯疱疹病毒(r HSV-1)样品感染滴度和生物学活性的方法。方法:采用噬斑法检测重组人1型单纯疱疹病毒的感染滴度,采用选择性增殖活性检测法和肿瘤细胞杀伤活性检测法检测样品的生物学活性,分别对上述方法进行重... 详细信息

目的:建立分析重组人1型单纯疱疹病毒(r HSV-1)样品感染滴度和生物学活性的方法。方法:采用噬斑法检测重组人1型单纯疱疹病毒的感染滴度,采用选择性增殖活性检测法和肿瘤细胞杀伤活性检测法检测样品的生物学活性,分别对上述方法进行重复性和精密度性能验证,并用上述方法对6批样品中的感染滴度和生物学活性进行检测。结果:经验证,上述3种方法均有较好的重复性和精密度,精密度RSD分别为5.3%、3.9%和19.4%;6批测试样品中,感染滴度为(3.06±0.37)×10^7 PFU·mL^-1,选择性增殖活性为(1.58±0.63)×10^5,肿瘤细胞杀伤活性为0.0278±0.0159。结论:经方法学验证,噬斑法、选择性增殖活性检测法和肿瘤细胞杀伤活性检测法可分别用于重组人1型单纯疱疹病毒的感染滴度和生物学活性的检测。

关键词： 1型单纯疱疹病毒溶瘤病毒滴度选择性增殖活性肿瘤细胞杀伤活性

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以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中气管细胞毒素定量分析液相色谱串联质谱联用方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2020年第12期33卷 1421-1425,1430页

作者：卫辰吴燕龙珍黄元礼王丽婵马霄中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629 岛津企业管理(中国)有限公司北京100020

目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:... 详细信息

目的建立定量分析以组分百白破疫苗为基础的联合疫苗中百日咳鲍特氏菌气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)的液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法,并进行验证及初步应用。方法HPLC条件:色谱柱BioC18,流动相A为0.1%甲酸水溶液(V/V),流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液(V/V),进样量为5μL,柱温为30℃,流速为0.3 mL/min;MS条件:电喷雾离子源正电子模式,电压为3.0 KV,离子源温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,雾化器流速为3 L/min,干燥气流速为10 L/min,采用多反应监测模式(multi reaction monitoring mode,MRM)检测TCT。验证方法的线性范围、灵敏度、精密度及准确度。采用该方法对国内外公司生产的组分百白破联合疫苗33批成品、63批原液、80批纯化蛋白进行TCT筛查及定量分析。结果TCT标准溶液在20.66~661 ng/L范围内,与TCT的定量高子通道922.3>719.3峰面积线性良好,线性方程为Y=3555.9 X-3368,R2=0.996;检出限为2.58 ng/L,定量限为10.33 ng/L;20.65、82.625及330.5 ng/L TCT标准溶液重复检测5次TCT峰面积的RSD分别为2.23%、4.61%和4.40%;66.1及33.05 ng/L的加标样品回收率分别为104.1%和94.4%。所有组分百日咳联合疫苗成品及原液样品均无TCT检出,纯化蛋白样品仅有一家公司的1批黏附素(pertactin,PRN)蛋白的裂解菌体浓缩液检出65.5 ng/L TCT,其后序工艺样品均未检出。结论成功建立了定量分析组分百白破联合疫苗中TCT的LC-MS/MS方法,该方法灵敏度高,准确度、精密度及线性良好,可用于我国组分百白破联合疫苗的TCT定量定性检测。

关键词：组分百白破疫苗气管细胞毒素液相色谱串联质谱定量分析

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