检索结果-内蒙古大学图书馆

2006第六届中国药学会学术年会

作者：吕昌莲张家宁李一经朱大岭东北农业大学哈尔滨医科大学药学院哈尔滨医科大学药学院东北农业大学哈尔滨医科大学药学院黑龙江省生物医药工程重点实验室－省部共建国家重点实验培育基地哈尔滨150081

目的为揭示缺氧性肺血管收缩机制探讨细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase-1/2,ERK1/2)是否参与15-羟基二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)收缩缺氧大鼠肺动脉的过程以及15-HETE对 ERK1/2活性的影响.方法将大鼠置于氧气分数为12.0％的低氧箱中连续9天形成缺氧模型.完整取出心肺,在显微镜下分离直径0.8-1.0 mm肺动脉剪为3mm长的动脉环在组织浴槽内进行张力研究.比较15-HETE给药前后肺动脉环张力变化;用ERK1/2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环,比较U0126孵育前后15-HETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用;机械法去除动脉环内皮,再比较U0126孵育前后15-HETE的收缩作用.酶法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞.Western blot方法检测15-HETE 及U0126对 ERK1/2 的活性的影响.结果 15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用,呈浓度--效应关系,与正常对照组比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05);内皮完整和内皮去除的肺动脉环,U0126孵育前后,15-HETE的缩血管作用都受到抑制,差异均有统计学意义(均为P ＜ 0.05).Western blot结果显示15-HETE明显增强肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性,U0126 0.1和1 μmol/L.结论 15-HETE能上调大鼠肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性,提示ERK1/2的活化是15-HETE收缩慢性缺氧大鼠肺动脉的一个重要环节.

关键词：缺氧花生四烯酸类肺动脉血管收缩 MAP激酶系统大鼠

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利用TaqMan探针检测大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因表达方法的建立

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中国地方病学杂志 2006年第4期25卷 447-449页

作者：栾颖李学奇曹威尹新华童光志附属第二医院心内科 150081 哈尔滨医科大学附属第四医院心内科哈尔滨医科大学附属第二医院心内科 150081 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家重点实验室

目的利用TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR方法检测大鼠心肌细胞内钙调磷酸酶A (calcineurin A,CaN A)β基因表达水平的方法,为进一步研究钙调磷酸酶在钙-钙调素-钙调磷酸酶信号转导途径中的分子生物学作用打下基础。方法根据GeneBank提... 详细信息

目的利用TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR方法检测大鼠心肌细胞内钙调磷酸酶A (calcineurin A,CaN A)β基因表达水平的方法,为进一步研究钙调磷酸酶在钙-钙调素-钙调磷酸酶信号转导途径中的分子生物学作用打下基础。方法根据GeneBank提供的大鼠CaN Aβ和β-肌动蛋白(β-actin)基因序列,分别设计并合成特异的引物和TaqMan探针。将:PCR扩增的CaN Aβ和β-actin基因片段克隆入pMD18-T载体,重组质粒pMDT-CaN Aβ和pMDT-β-actin,经筛选、鉴定和测序后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;ROX和FAM标记的TaqMan探针对CaN Aβ和β-actin基因表达进行定量,用β-actin基因表达结果校正CaN Aβ;取培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR方法测定细胞内CaN Aβ基因表达。结果应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0．99;与定量对照曲线比较,大鼠心肌细胞内CaN Aβ表达量是β-actin的90％。结论成功建立了利用TaqMan探针检测CaN Aβ和β-actin基因的多重荧光定量PCR方法及标准曲线。

关键词： TaqMan探针荧光定量PCR 钙调磷酸酶基因表达

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猪链球菌对红霉素耐药性的研究

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中国预防兽医学报 2006年第3期28卷 359-362页

作者：李艳华姜成刚蔡雪辉童光志刘娣佟恒敏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江省农业科学院博士后工作站东北农业大学博士后流动站黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学院药理教研室哈尔滨黑龙江150030

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌,采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌,用双纸片法确定耐药株的耐药表型,通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型,即同时对克... 详细信息

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌,采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌,用双纸片法确定耐药株的耐药表型,通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型,即同时对克林霉素耐药。在3株红霉素耐药株中扩增到ermb基因,其余未能检测到ermb或mefA基因。

关键词：猪链球菌红霉素耐药表型耐药基因

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猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果的评价及其免疫机制的研究

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中国兽医科学 2006年第12期36卷 955-960页

作者：王勇刘思国王春来邵美丽宫强刘建东迟磊赵昆郭设平李广兴中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、... 详细信息

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、细胞免疫水平及对APP1和APP7型菌的保护效果均显著高于其他各试验组及对照组;试验Ⅰ组(灭活疫苗)、Ⅲ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApxⅣ)、Ⅳ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfa)与对照组差异显著,但均显著低于试验Ⅱ组;APXⅠ抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率呈正相关。证实rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP组免疫效果最好,可对2个血清型APP的攻击提供有效保护。

关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果免疫机制

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缓激肽开放血瘤屏障过程中诱发快速耐受性的机制探讨

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中国药理学通报 2006年第12期22卷 1466-1470页

作者：秦丽娟谷艳婷薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨缓激肽(bradykinin,BK)开放血瘤屏障过程中,HSF1和HSP70对BK诱发快速耐受性的影响。方法首先通过立体定向法接种C6细胞制备恶性胶质瘤大鼠模型。模型制备成功后,经颈内动脉缓慢小剂量给予缓激肽(或生理盐水)10μ***-1,动态观察... 详细信息

目的探讨缓激肽(bradykinin,BK)开放血瘤屏障过程中,HSF1和HSP70对BK诱发快速耐受性的影响。方法首先通过立体定向法接种C6细胞制备恶性胶质瘤大鼠模型。模型制备成功后,经颈内动脉缓慢小剂量给予缓激肽(或生理盐水)10μ***-1,动态观察肿瘤组织内热休克因子1(heatshockfactor1,HSF1)蛋白单体和三聚体的活性及热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)的表达(Westernblot法)。免疫组织化学技术检测血瘤屏障上紧密连接蛋白occludin的变化。利用伊文思蓝连续监测缓激肽处理后的C6恶性胶质瘤大鼠血瘤屏障的通透性,同时电镜观察血瘤屏障的病理学改变。结果缓激肽作用于C6大鼠后,紧密连接增宽,血瘤屏障通透性增加,伊文思蓝渗出量分别较对照组增加了5.19μg.g-1(0min),5.06μg.g-1(5min),11.35μg.g-1(10min,P<0.05),21.54μg.g-1(15min,P<0.01),12.81μg.g-1(30min,P<0.05),7.28μg.g-1(60min)。肿瘤组织内HSF1蛋白三聚体活性和HSP70蛋白的表达逐渐增加,且分别于处理后的5min和30min时达高峰(P<0.01,与对照组相比),最大值为对照组的2～3倍。免疫组化检测结果发现,处理后的C6动物,其血瘤屏障的紧密连接蛋白occludin表达减少,15min后逐渐增加。结论缓激肽作用于血瘤屏障后,激活了HSF1并促进了hsp70蛋白的表达。增加的hsp70可能通过发挥分子伴侣作用来修复紧密连接蛋白,进而诱发快速耐受性。

关键词：缓激肽血瘤屏障热休克蛋白70 热休克因子1

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禽流感病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 701-706页

作者：包红梅王秀荣刘丽玲王昱李一经陈化兰中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进... 详细信息

为了能快速准确地对禽流感进行病原学诊断，根据流感病毒的M基因序列，在保守区内用Olig04．0软件设计了1对引物，建立了一步法RT—PCR诊断方法，其目的片段大小为229bp。通过对不同稀释倍数的H5亚型禽流感病毒尿囊液和棉拭子浸出液进行检测，结果显示，病毒尿囊液的最低检出稀释度为1：10^4；阳性棉拭子的最低检出稀释度为1：2^3。用病毒分离法和一步法RT—PCR同时检测人工感染鸡不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品，二者符合率为100％，但前者的检测灵敏度比后者高10～100倍。用该方法检测H1～H15亚型禽流感病毒和鸡新城疫病毒等其他14种禽病病原，所有禽流感病毒均有229bp的目的条带出现，而其他14种禽病病原均无目的条带出现，表明该方法的特异性好。

关键词：禽流感病毒一步法RT—PCR 快速诊断

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肝癌的细胞凋亡和治疗

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中国临床药理学与治疗学 2006年第8期11卷 851-856页

作者：单长民李娟李璞山东省滨州医学院细胞生物学教研室山东省滨州医学院附属医院药剂科哈尔滨医科大学生物学教研室

细胞凋亡作为生物细胞对内外信号刺激的一种反应,在正常细胞的发育过程中精确调控细胞的死亡过程,凋亡的产生可能由不同的生理、生化或/和有毒物质诱发。细胞增殖和细胞凋亡之间的平衡在器官发育及其大小维持方面起重要作用;肿瘤的发生... 详细信息

细胞凋亡作为生物细胞对内外信号刺激的一种反应,在正常细胞的发育过程中精确调控细胞的死亡过程,凋亡的产生可能由不同的生理、生化或/和有毒物质诱发。细胞增殖和细胞凋亡之间的平衡在器官发育及其大小维持方面起重要作用;肿瘤的发生与正常的细胞凋亡过程被抑制,破坏了细胞增殖与凋亡之间的平衡有一定关系。用药物(如阿蒂霉素)诱导肝癌细胞凋亡,可达到抑制肝癌细胞分裂的效果,治疗肿瘤。联合用药可以大大提高疗效。肝癌的基因治疗是一项新技术,已有报道多个基因诱导肝癌细胞凋亡。

关键词：细胞凋亡肝癌治疗

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新城疫病毒F48E9株V基因的表达及其抗血清的制备

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中国兽医科学 2006年第5期36卷 357-361页

作者：韩放闫丽辉曹殿军刘培欣李景鹏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为p... 详细信息

采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET-30c-V。将 pET-30c-V转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol／L IPTG 37℃过夜诱导表达,SDS-PAGE 及Western-blotting分析结果表明,所表达的NDV V重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子质量约28 ku,与理论值大小相符。将包涵体用8 mol／L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的V蛋白。用复性后的V蛋白免疫21日龄SPF鸡(300 μg／只),成功制备了抗鸡NDV V蛋白的抗血清。

关键词：新城疫病毒 V基因原核表达

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同一代谢通路上基因表达相关性分析

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中国卫生统计 2006年第1期23卷 83-85页

作者：杜磊李霞郭政宫滨生闻凤霞哈尔滨医科大学生物信息学系 150086 包头医学院数学教研室 014010

基因芯片技术是近年来发展起来的一种可以快速、高通量的探测基因在同一时刻表达水平的新技术。可用于研究生命体系中不同部位、不同生长发育阶段的基因表达,研究比较正常和疾病状态下基因表达及其表达的差异等。人们已经发展多种方法,... 详细信息

基因芯片技术是近年来发展起来的一种可以快速、高通量的探测基因在同一时刻表达水平的新技术。可用于研究生命体系中不同部位、不同生长发育阶段的基因表达,研究比较正常和疾病状态下基因表达及其表达的差异等。人们已经发展多种方法,包括多元统计分析、机器学习方法和模式识别方法等研究分析基因表达谱数据,探测基因表达调控网络及与疾病发生发展的关系等。[第一段]

关键词：基因表达谱相关性分析代谢通路基因芯片技术多元统计分析模式识别方法疾病状态不同部位生命体系发育阶段

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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定

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中国地方病学杂志 2006年第4期25卷 453-456页

作者：张唯哲李妍周海舟服部俊夫凌虹哈尔滨医科大学微生物学和寄生虫学教研室 150081 日本东北大学大学院医学系研究科感染症呼吸病态学分野

目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修... 详细信息

目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。

关键词： HIV-1 HIV包膜蛋白质gp120 修饰重叠延伸剪接法

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