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2006第六届中国药学会学术年会

作者：王丽伟刘凤芝陆景坤刘有昌杨宝峰哈尔滨医科大学药化与天然药化教研室哈尔滨医科大学药化与天然药化教研室哈尔滨医科大学药化与天然药化教研室哈尔滨医科大学物理化学教研室哈尔滨医科大学药理学教研室

目的研究黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入四种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H2O2诱导细胞凋亡。加... 详细信息

目的研究黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入四种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H2O2诱导细胞凋亡。加入不同浓度的药物后,采用MTT法观察细胞存活情况,来进行药物有效浓度的筛选。采用TUNEL、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果四种黄酮醇类化合物与损伤组比较,杨梅素槲皮素、桑色素的心肌细胞凋亡率降低、Caspase-3蛋白表达降低、Bcl-2/Bax比值增大。结论黄酮醇类化合物对心肌细胞凋亡有保护作用,可以通过上调Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白的表达或是降低Bax的表达来发挥作用。

关键词：心肌细胞黄酮醇类凋亡

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Telethonin与MSTN在进行性肌营养不良患者肌肉中的表达

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基础医学与临床 2006年第5期26卷 456-460页

作者：李艳凤张勇陈大志朱大海哈尔滨工业大学分子与细胞发育生物学实验室黑龙江哈尔滨150001 中国协和医科大学中国医学科学院基础医学研究所北京100005 首都医科大学朝阳医院普外科北京100020

目的Telethon in是一种重要的肌节蛋白,肌肉抑制素(myostatin,MSTN)是骨骼肌生长发育抑制因子,本文主要目的是探讨Telethon in和MSTN基因与进行性肌营养不良病理发生的相关性。方法采用W estern b lot方法分析肌营养不良患者中Telethon... 详细信息

目的Telethon in是一种重要的肌节蛋白,肌肉抑制素(myostatin,MSTN)是骨骼肌生长发育抑制因子,本文主要目的是探讨Telethon in和MSTN基因与进行性肌营养不良病理发生的相关性。方法采用W estern b lot方法分析肌营养不良患者中Telethon in和MSTN蛋白的表达水平;为进一步分析Telethon in蛋白对肌营养不良病理发生的作用,构建了Telethon in的反义表达载体,转染肌原性细胞系C2C12,研究阻断Telethon in基因表达(Knockdown)对成肌细胞增殖分化的影响。结果发现在一些肌营养不良患者中Telethon in蛋白表达缺失,而在这些患者的肌肉组织中MSTN蛋白表达正常但存在加工障碍;此结果提示,Telethon in蛋白可能参与MSTN蛋白的加工成熟过程。采用反义技术阻断Telethon in基因表达后,C2C12细胞增殖受到明显抑制。结论Telethon in和MSTN可能与一些类型肌营养不良的病理发生密切相关。

关键词：进行性肌营养不良 Telethonin MSTN 蛋白加工

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黄芩和粘毛黄芩种子的PAGE及RAPD鉴定研究

黄芩和粘毛黄芩种子的PAGE及RAPD鉴定研究

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中国药理学会制药工业专业委员会第十二届学术会议、中国药学会应用药理专业委员会第二届学术会议、2006年国际生物医药及生物技术论坛（香港）

作者：赵丽丽聂凤禔河北医科大学药学院生药教研室河北医科大学药学院生药教研室

目的建立黄芩、粘毛黄芩种子的蛋白质电泳及DNA图谱,作为黄芩种子及混淆品鉴定的指征。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和随机引物扩增的DNA分析(RAPD)方法对黄芩、粘毛黄芩蛋白质电泳图谱及DNA图谱进行分析比较。结果两种黄芩种子的... 详细信息

目的建立黄芩、粘毛黄芩种子的蛋白质电泳及DNA图谱,作为黄芩种子及混淆品鉴定的指征。方法采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和随机引物扩增的DNA分析(RAPD)方法对黄芩、粘毛黄芩蛋白质电泳图谱及DNA图谱进行分析比较。结果两种黄芩种子的蛋白质电泳图谱具有明显差异;得到了可对两种黄芩种子进行有效鉴别的引物。结论PAGE图谱及DNA图谱可作为两种黄芩种子鉴别的指征。

关键词：黄芩粘毛黄芩种子 PAGE RAPD 鉴定

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微囊化人肝细胞移植对小鼠急性肝衰竭的治疗作用

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中国临床康复 2006年第37期10卷 54-56,i0003页

作者：王秋艳李双月刘婧杨静娴王为马小军袁权中国科学院大连化学物理研究所生物医用材料工程组大连医科大学药理学教研室辽宁省大连市116011

目的:评价微囊化人源性肝细胞腹腔内移植对四氯化碳诱导的小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用,为微囊化异种肝细胞在肝细胞移植的临床应用提供实验依据。方法:实验于2005-02/2006-01在中国科学院大连化学物理研究所,生物技术部生物医学材料... 详细信息

目的:评价微囊化人源性肝细胞腹腔内移植对四氯化碳诱导的小鼠急性肝功能衰竭的治疗作用,为微囊化异种肝细胞在肝细胞移植的临床应用提供实验依据。方法:实验于2005-02/2006-01在中国科学院大连化学物理研究所,生物技术部生物医学材料工程实验室完成。①采用自制静电液滴发生器制备海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠胶囊,应用四氯化碳腹腔注射建立急性肝功能衰竭动物模型,以谷草转氨酶、谷丙转氨酶高出正常值10倍以上作为判定肝功能衰竭的具体标准。②取造模成功的急性肝衰竭小鼠90只,随机分为空囊组、微囊化细胞组、游离细胞组,30只/组。各组均于注射四氯化碳24h后进行移植实验:空囊组腹腔注射含有空囊的生理盐水,微囊化细胞组腹腔注射微囊化肝细胞悬液,游离肝细胞组腹腔注射游离肝细胞悬液,均1mL/只。③每组随机取出10只用于观察8d存活率,其余小鼠分别于移植后1,2,4,8d经眼球后静脉丛采血,进行肝功能检测谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平,每组5只/次。并回收微胶囊观察其形态,对回收的微囊化细胞进行组织切片细胞活性观察。结果:成功建立急性肝衰竭模型的90只小鼠全部进入结果分析。①移植后不同时间点各组小鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平的变化:移植后第1,2天,微囊化细胞组的两种转氨酶水平均显著低于游离细胞组和空囊组(P<0.05)。到移植后第8天各组间转氨酶水平基本相似(P>0.05)。②各组小鼠移植8d存活率的比较:微囊化细胞组小鼠的存活率显著高于空囊组、游离细胞组(90.0%,50.0%,60.0%,P<0.05)。③腹腔移植微胶囊的形态及囊内细胞活性观察结果:回收的微胶囊形态完整光滑,未见明显的纤维包裹,囊内细胞呈圆形,细胞膜完整光滑,胞浆饱满,仍有90%以上肝细胞存活。结论:微囊化人源性肝细胞腹腔内移植可以提高药物诱导急性肝衰竭小鼠的存活率,改善急性肝衰小鼠的肝脏功能。提示生物微胶囊可以有效阻断免疫排斥作用,保护移植的肝细胞,有利于其发挥生物功能。

关键词：细胞移植肝功能衰竭,急性肝/细胞学四氯化碳

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以番鸭呼肠孤病毒σC表达蛋白为抗原的ELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2006年第3期36卷 171-176页

作者：耿宏伟郭东春张云胡奇林刘明张序王立群中国农业科学院哈尔滨兽医研究所生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350003 哈尔滨市兽医卫生防疫站黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学院黑龙江哈尔滨150030

将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,获得了重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞后,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病... 详细信息

将鸭呼肠孤病毒小外壳σC蛋白编码基因克隆于原核表达载体pET32a上,经EcoRⅠ和SacⅠ双酶切鉴定及序列分析,获得了重组质粒pET32a-σC,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞后,经SDS-PAGE和Western-blotting分析,融合蛋白能够与番鸭呼肠孤病毒感染康复鸭血清发生特异反应;以0.15 mmol/L IPTG诱导,5 h后融合蛋白σC表达量可达高峰,分子质量为50ku;融合蛋白纯化后被用作包被抗原,建立了检测鸭血清中呼肠孤病毒抗体的间接ELISA,经对检测条件优化,最佳包被浓度为5μg/mL,标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶40。用该方法对50份鸭血清样品进行了检测,与琼脂扩散抗体检测法相比,ELISA具有良好的特异性和敏感性。

关键词：番鸭呼肠孤病毒 σC编码基因原核表达酶联免疫吸附试验

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

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中国兽医科学 2006年第11期36卷 880-884页

作者：谭斌刘长明危艳武张超范刘永刚冉多良中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比... 详细信息

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒免疫过氧化物酶单层细胞试验

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利用基因芯片观察抑郁症大鼠模型基因表达的变化

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中国临床康复 2006年第22期10卷 73-76页

作者：王栋李强杨达郝晓峰李崇前吕莹丽钟国才王海敏郭政哈尔滨医科大学生物信息学系系统生物学教研室成都康弘集团研发部生物信息筛选中心同济大学生命科学与技术学院上海市200092

目的:采用高通量基因芯片观察大鼠抑郁症模型基因表达的变化,结合基因功能分类体系探讨抑郁症的发病机制。方法:实验于2004-04/2005-10在成都康弘集团实验动物中心和哈尔滨医科大学完成。采用Willner法对32只雄性SD大鼠构造大鼠抑郁症模... 详细信息

目的:采用高通量基因芯片观察大鼠抑郁症模型基因表达的变化,结合基因功能分类体系探讨抑郁症的发病机制。方法:实验于2004-04/2005-10在成都康弘集团实验动物中心和哈尔滨医科大学完成。采用Willner法对32只雄性SD大鼠构造大鼠抑郁症模型,应激刺激造模结束后将大鼠分为模型组和正常组,每组各8只。由基因芯片检测8只模型组和8只正常组大鼠的基因表达谱,识别差异表达基因并注释于GO基因功能分类体系,分析差异表达基因与疾病的相关性。结果:实验纳入大鼠数量为16只,实验中无意外死亡、丢失及补充,进入结果分析大鼠数量为16只。对模型组和正常组,通过t检验筛选得到207个差异表达基因,涉及神经肽激素活性、信号传导通路、核糖体生成以及蛋白质转运与降解。具有钙调蛋白依赖的蛋白激酶活性基因钙调蛋白依赖的蛋白激酶1、钙调蛋白依赖的蛋白激酶2G、钙调蛋白依赖的蛋白激酶2抑制物α、具有囊泡介导转运功能的基因突触蛋白表达下调也表明这些通路在大鼠抑郁症模型中可能被抑制;有神经肽激素活性的精氨酸加压素表达下调,验证了情感性精神障碍的精氨酸加压素的假说,即抑郁症患者精氨酸加压素功能降低,在躁狂症患者则升高。进一步验证了抑郁症的病理机制所涉及的可能是神经传递功能的多个环节。结论:单胺递质的释放、信号传导以及神经肽调节的表达变化涉及抑郁症的发病机制,提示多种功能通路与抑郁症的发病机制相关。

关键词：抑郁症基因表达基因

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复方中药透皮软膏剂的药理与毒理作用研究

复方中药透皮软膏剂的药理与毒理作用研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第九次学术讨论会

作者：梁运霞郑海洪庞淑华宋德花刘广文任平黑龙江畜牧兽医职业学院哈尔滨医科大学实验动物部

研究复方中药透皮软膏剂的药理与毒理作用。将薄公英、金银花、连翘、赤芍、黄芩等9 味中药组成方剂,以水提醇沉法制得干浸膏,再与油相、水相与促渗剂制成O／W型透皮软膏剂, 采用局部全封闭斑贴法,进行皮肤刺激试验与皮肤致敏试验。将... 详细信息

研究复方中药透皮软膏剂的药理与毒理作用。将薄公英、金银花、连翘、赤芍、黄芩等9 味中药组成方剂,以水提醇沉法制得干浸膏,再与油相、水相与促渗剂制成O／W型透皮软膏剂, 采用局部全封闭斑贴法,进行皮肤刺激试验与皮肤致敏试验。将干浸膏加纯化水稀释含生药量分别为5 g·mL1和1 g·mL1两种浓度的提取液。前者为急性毒性试验供试药品,选用昆明系小白鼠,经口染毒后,观察7 d小鼠的中毒死亡情况,Karber法计算LD50。;后者用G3垂熔玻璃漏斗过滤,流通蒸汽灭菌20 min,为抗菌试验供试药品。以我院微生物实验室从双城地区奶牛场和养牛户分离的6种病原菌作为试验菌种,采用试管二倍稀释法,测定提取液体外抗菌活

关键词：复方中药毒理作用供试药品

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抗心律失常药物作用的新靶点——M_3-R/IK_(M_3)(英文)

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药学学报 2005年第1期40卷 8-12页

作者：刘艳许超千焦军东王慧珍董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 ... 详细信息

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 diphenylacetoxy N methylpiperidine methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常,而M3受体激动剂胆碱能明显对抗其作用。其他亚型受体阻断剂,M1受体阻断剂 (prienzepine)、M2受体阻断剂(methotramine)和M4受体阻断剂 (tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响。在膜片钳实验中发现,胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IKM3 ),此电流可被M3受体阻断剂 4DAMP明显抑制。而M1,M2和M4受体阻断剂对胆碱介导的电流无作用。结论　胆碱通过激动心肌M3受体诱发一外向钾电流 (IKM3 ),并在维持心脏离子通道平衡中起重要作用。M3受体 /IKM 可能是抗心律失常新靶点。

关键词：心肌缺血心律失常 M3受体延迟整流电流

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一种新心律失常大鼠模型的建立

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药学学报 2005年第7期40卷 659-662页

作者：潘振伟王志勇杜智敏焦军东董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江生物医药工程重点实验室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学临床药理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药理学教研室

目的建立一种新的心律失常动物模型。方法大鼠脂肪乳剂灌胃建立大鼠高脂血症模型后进行冠状动脉结扎,观察术后1h 心律失常发生情况,并进行心律失常评分。结果高脂血症大鼠冠脉结扎组同正常大鼠冠脉结扎组相比,室性早博二联律、室性心动... 详细信息

目的建立一种新的心律失常动物模型。方法大鼠脂肪乳剂灌胃建立大鼠高脂血症模型后进行冠状动脉结扎,观察术后1h 心律失常发生情况,并进行心律失常评分。结果高脂血症大鼠冠脉结扎组同正常大鼠冠脉结扎组相比,室性早博二联律、室性心动过速持续时间均明显延长。胺碘酮、维拉帕米对单纯冠脉结扎诱发的心律失常个数及持续时间无明显作用。维拉帕米对高脂血症大鼠冠脉结扎诱发的心律失常个数及持续时间也无明显影响,而胺碘酮明显减少高脂血症大鼠冠脉结扎诱发的心律失常个数及持续时间。结论通过高脂血症大鼠冠脉结扎可以建立一种接近临床的心律失常动物模型。

关键词：心律失常高脂血症冠状动脉结扎心律失常模型

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