检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2021年第5期16卷 444-452页

作者：黄明柳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室/热带病防治研究教育部重点实验室/结核病研究所/海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室/广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080

目的筛选及初步验证新型冠状病毒(SARS-CoV-2)棘突蛋白(S蛋白)的特异性多肽。方法用多种生物信息学软件对SARS-CoV-2 S蛋白区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV S蛋白氨基酸序列的特异性序列进行筛... 详细信息

目的筛选及初步验证新型冠状病毒(SARS-CoV-2)棘突蛋白(S蛋白)的特异性多肽。方法用多种生物信息学软件对SARS-CoV-2 S蛋白区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV S蛋白氨基酸序列的特异性序列进行筛选并预测其理化性质、空间结构。根据筛选、预测结果,将SARS-CoV-2 S蛋白特异性序列进行化学合成或人工表达。运用酶联免疫吸附(ELISA)实验验证这些基于生物信息学筛选出的特异性多肽的抗原性、免疫原性以及证明抗原性最强的特异性多肽在实际应用中检测COVID-19抗体阳性患者血清的可行性和特异性。结果选出5条具有抗原性与免疫原性的多肽,S2、S3、S6、S7,以及S6与S7用linker连接大肠埃希菌表达的小分子融合蛋白(S6-Linker-S7);S6-Linker-S7与SARS-CoV-2 S蛋白对比检测同一批普通呼吸系统疾病患者血清IgG抗体平均检测值OD_(450)nm分别为(0.70±0.34)、(1.33±0.54),检测值差异具有统计学意义(P<0.001),对比检测COVID-19抗体阳性患者血清IgG抗体检测值OD_(450)nm分别为(2.20±1.95)、(2.35±0.57),检测值差异不具有统计学意义(P>0.05);S6-Linker-S7在检测COVID-19抗体阳性患者时,血清IgG抗体检测值OD_(450)nm均值比检测普通呼吸疾病患者OD_(450)nm均值高3倍,差异具有统计学意义(P<0.001);SARS-CoV-2 S蛋白与HCoV-HKU1、HCoV-OC43、SARS-CoV S蛋白兔多抗发生免疫反应;S6-Linker-S7与抗HCoV-OC43、SARS-CoV S蛋白兔多抗发生免疫反应。结论实验证明了针对SARS-CoV-2 S蛋白,基于生物信息学技术设计合成的区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV的特异性多肽具有抗原性和免疫原性,S6-Linker-S7能在实际应用中检测COVID-19抗体阳性患者血清,并且相较于SARS-CoV-2 S蛋白具有更高的特异性。

关键词：新型冠状病毒棘突蛋白特异性多肽抗原性免疫原性 ELISA

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HMBPP/多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌IL-6的影响

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中华临床医师杂志（电子版） 2020年第8期14卷 592-598页

作者：常铸梅志雄方毅敏王姣黄明柳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 中山大学第三附属医院岭南院区妇产科广州510530 广州市胸科医院国家呼吸疾病重点实验室广州510095

目的研究4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸(HMBPP)和多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌白介素6(IL-6)的影响和机制。方法收集自广州市胸科医院临床诊断结核性胸膜炎患者胸水标本18例,自中山大学附属第三医院正常健康产妇脐带血标... 详细信息

目的研究4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸(HMBPP)和多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌白介素6(IL-6)的影响和机制。方法收集自广州市胸科医院临床诊断结核性胸膜炎患者胸水标本18例,自中山大学附属第三医院正常健康产妇脐带血标本17例。使用流式分选技术分选出结核性胸水和脐带血中的γδT细胞与CD277+CD14+单核-巨噬细胞混合培养,分别用HMBPP或E7刺激后,运用流式细胞术检测分泌IL-6的γδT细胞百分率及表达程序性死亡配体1(PD-L1)的CD277+CD14+单核-巨噬细胞百分率;利用RT-PCR技术检测细胞中IL-6、PD-L1的mRNA表达水平;用ELISA方法检测细胞培养上清中IL-6的含量;用PD-L1特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默PD-L1的表达以检测PD-L1是否参与分泌IL-6;在分选于结核性胸水和脐带血的共培养细胞中,HMBPP或E7刺激后上述指标在每一时间点对照组和实验组间分别采用独立样本t检验比较其差异,分析其统计学意义。结果在结核性胸水和脐带血中,给予HMBPP或E7刺激24 h之后,与对照组相比IL-6+γδ+T细胞占比显著升高,给予HMBPP或E7刺激12 h之后γδT细胞中IL-6在mRNA水平的相对表达量显著上调,以及在蛋白质水平的表达显著上调;在分选于脐带血的共培养细胞中,给予HMBPP或E7刺激,CD277+CD14+单核-巨噬细胞中PD-L1在mRNA水平的相对表达量显著上调[(3.70±0.33)vs(4.20±0.34)vs 1.00];在沉默PD-L1的表达后,γδT细胞中IL-6的表达显著降低[(0.53±0.03)vs(0.55±0.01)vs 1.00],差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论HMBPP和多肽E7能够促进CD277+CD14+单核-巨噬细胞PD-L1表达上调,后者参与刺激与其共培养的γδT细胞分泌更多的IL-6,这为γδT细胞的抗结核免疫机制的研究以及结核患者的免疫治疗提供依据。

关键词： γδT细胞 CD277^+CD14^+单核-巨噬细胞白介素-6 程序性死亡配体1

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不同等位基因E7/HLA-DR四聚体结合的结核患者CD4＋T细胞CDR3区序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第2期37卷 91-96页

作者：甘一川王聪方毅敏姚亚男涂晓欣申雁鸣赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 国家呼吸疾病重点实验室广州市胸科医院510095

目的探讨机体抗结核免疫过程中CD4＋T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4＋T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR... 详细信息

目的探讨机体抗结核免疫过程中CD4＋T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4＋T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR3区核酸片段,并比较其长度和序列特征.结果等位基因不同的E7/HLA-DR四聚体能够识别同一患者CDR3区序列相同或结构功能相似的CD4＋T细胞克隆.结论结核患者体内CD4＋T细胞识别和结合抗原多肽时有一定的HLA-DR限制性,但是主要以多肽特异性为主,这为进一步探讨机体抗结核免疫中CD4＋T细胞和MHC之间的抗原提呈机制提供了数据.

关键词：结核 E7 HLA-DR四聚体 CDR3区 CD4+T细胞 E7 CDR3

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结核特异性多肽E6、E7和C14对单核-巨噬细胞亚型极化的影响

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中国医药生物技术 2016年第3期11卷 216-223页

作者：申东梅方毅敏申雁鸣刘国标姚亚男赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病防治研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 广州市胸科医院 510095

目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14^+CD16^+)及M2(CD14^+CD163^+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核... 详细信息

目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14^+CD16^+)及M2(CD14^+CD163^+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核病患者胸水单个核细胞及外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术检测刺激物不同时间点对单核-巨噬细胞极化表面标记表达的影响。结果结核特异性多肽E6刺激THP-1 24+0 h、24+24 h、24+48 h、24+72 h后,CD16/CD163阳性率分别为16.85%/13.78%、19.59%/15.68%、18.14%/14.19%、13.61%/11.47%。E7刺激效果与E6相似,C14对THP-1的CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结核特异性多肽E6刺激结核患者胸水或血标本单核细胞19 h后,CD14+CD16+阳性率(1#患者:1.66%,2#患者:4.37%)与CD14^+CD163^+阳性率(1#患者:1.76%,2#患者:2.82%)差异不大,但CD14^+CD16^+CD86^+阳性率(1#患者:2.20%,2#患者:6.16%)大于CD14^+CD163^+CD206^+阳性率(1#患者:1.37%,2#患者:0.92%)。E7刺激效果与E6相似,C14对结核患者胸水或血标本单核细胞CD14/CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结论 3种结核特异性多肽特别是E6、E7体外刺激单核细胞株THP-1、结核患者胸水或血标本单核细胞主要向M1型单核-巨噬细胞极化。

关键词：肽类白血病,单核细胞,急性单核-巨噬细胞系统极化分型

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