检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2021年第5期16卷 444-452页

作者：黄明柳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室/热带病防治研究教育部重点实验室/结核病研究所/海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室/广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080

目的筛选及初步验证新型冠状病毒(SARS-CoV-2)棘突蛋白(S蛋白)的特异性多肽。方法用多种生物信息学软件对SARS-CoV-2 S蛋白区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV S蛋白氨基酸序列的特异性序列进行筛... 详细信息

目的筛选及初步验证新型冠状病毒(SARS-CoV-2)棘突蛋白(S蛋白)的特异性多肽。方法用多种生物信息学软件对SARS-CoV-2 S蛋白区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV S蛋白氨基酸序列的特异性序列进行筛选并预测其理化性质、空间结构。根据筛选、预测结果,将SARS-CoV-2 S蛋白特异性序列进行化学合成或人工表达。运用酶联免疫吸附(ELISA)实验验证这些基于生物信息学筛选出的特异性多肽的抗原性、免疫原性以及证明抗原性最强的特异性多肽在实际应用中检测COVID-19抗体阳性患者血清的可行性和特异性。结果选出5条具有抗原性与免疫原性的多肽,S2、S3、S6、S7,以及S6与S7用linker连接大肠埃希菌表达的小分子融合蛋白(S6-Linker-S7);S6-Linker-S7与SARS-CoV-2 S蛋白对比检测同一批普通呼吸系统疾病患者血清IgG抗体平均检测值OD_(450)nm分别为(0.70±0.34)、(1.33±0.54),检测值差异具有统计学意义(P<0.001),对比检测COVID-19抗体阳性患者血清IgG抗体检测值OD_(450)nm分别为(2.20±1.95)、(2.35±0.57),检测值差异不具有统计学意义(P>0.05);S6-Linker-S7在检测COVID-19抗体阳性患者时,血清IgG抗体检测值OD_(450)nm均值比检测普通呼吸疾病患者OD_(450)nm均值高3倍,差异具有统计学意义(P<0.001);SARS-CoV-2 S蛋白与HCoV-HKU1、HCoV-OC43、SARS-CoV S蛋白兔多抗发生免疫反应;S6-Linker-S7与抗HCoV-OC43、SARS-CoV S蛋白兔多抗发生免疫反应。结论实验证明了针对SARS-CoV-2 S蛋白,基于生物信息学技术设计合成的区别于HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、HCoV-OC43、SARS-CoV、MERS-CoV的特异性多肽具有抗原性和免疫原性,S6-Linker-S7能在实际应用中检测COVID-19抗体阳性患者血清,并且相较于SARS-CoV-2 S蛋白具有更高的特异性。

关键词：新型冠状病毒棘突蛋白特异性多肽抗原性免疫原性 ELISA

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HMBPP/多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌IL-6的影响

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中华临床医师杂志（电子版） 2020年第8期14卷 592-598页

作者：常铸梅志雄方毅敏王姣黄明柳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 中山大学第三附属医院岭南院区妇产科广州510530 广州市胸科医院国家呼吸疾病重点实验室广州510095

目的研究4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸(HMBPP)和多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌白介素6(IL-6)的影响和机制。方法收集自广州市胸科医院临床诊断结核性胸膜炎患者胸水标本18例,自中山大学附属第三医院正常健康产妇脐带血标... 详细信息

目的研究4-羟基-3-甲基-2-烯基焦磷酸(HMBPP)和多肽E7对结核患者胸水及脐带血中γδT细胞分泌白介素6(IL-6)的影响和机制。方法收集自广州市胸科医院临床诊断结核性胸膜炎患者胸水标本18例,自中山大学附属第三医院正常健康产妇脐带血标本17例。使用流式分选技术分选出结核性胸水和脐带血中的γδT细胞与CD277+CD14+单核-巨噬细胞混合培养,分别用HMBPP或E7刺激后,运用流式细胞术检测分泌IL-6的γδT细胞百分率及表达程序性死亡配体1(PD-L1)的CD277+CD14+单核-巨噬细胞百分率;利用RT-PCR技术检测细胞中IL-6、PD-L1的mRNA表达水平;用ELISA方法检测细胞培养上清中IL-6的含量;用PD-L1特异性小分子干扰RNA(siRNA)沉默PD-L1的表达以检测PD-L1是否参与分泌IL-6;在分选于结核性胸水和脐带血的共培养细胞中,HMBPP或E7刺激后上述指标在每一时间点对照组和实验组间分别采用独立样本t检验比较其差异,分析其统计学意义。结果在结核性胸水和脐带血中,给予HMBPP或E7刺激24 h之后,与对照组相比IL-6+γδ+T细胞占比显著升高,给予HMBPP或E7刺激12 h之后γδT细胞中IL-6在mRNA水平的相对表达量显著上调,以及在蛋白质水平的表达显著上调;在分选于脐带血的共培养细胞中,给予HMBPP或E7刺激,CD277+CD14+单核-巨噬细胞中PD-L1在mRNA水平的相对表达量显著上调[(3.70±0.33)vs(4.20±0.34)vs 1.00];在沉默PD-L1的表达后,γδT细胞中IL-6的表达显著降低[(0.53±0.03)vs(0.55±0.01)vs 1.00],差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论HMBPP和多肽E7能够促进CD277+CD14+单核-巨噬细胞PD-L1表达上调,后者参与刺激与其共培养的γδT细胞分泌更多的IL-6,这为γδT细胞的抗结核免疫机制的研究以及结核患者的免疫治疗提供依据。

关键词： γδT细胞 CD277^+CD14^+单核-巨噬细胞白介素-6 程序性死亡配体1

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不同等位基因E7/HLA-DR四聚体结合的结核患者CD4＋T细胞CDR3区序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第2期37卷 91-96页

作者：甘一川王聪方毅敏姚亚男涂晓欣申雁鸣赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 国家呼吸疾病重点实验室广州市胸科医院510095

目的探讨机体抗结核免疫过程中CD4＋T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4＋T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR... 详细信息

目的探讨机体抗结核免疫过程中CD4＋T细胞TCR与多肽/MHC之间的识别和结合规律.方法从9例结核患者胸水中用等位基因不同的结核多肽E7/HLA-DR四聚体磁珠分选出E7结合阳性CD4＋T细胞,提取其RNA逆转录成cDNA作为模板扩增TCRα链和β链CDR3区核酸片段,并比较其长度和序列特征.结果等位基因不同的E7/HLA-DR四聚体能够识别同一患者CDR3区序列相同或结构功能相似的CD4＋T细胞克隆.结论结核患者体内CD4＋T细胞识别和结合抗原多肽时有一定的HLA-DR限制性,但是主要以多肽特异性为主,这为进一步探讨机体抗结核免疫中CD4＋T细胞和MHC之间的抗原提呈机制提供了数据.

关键词：结核 E7 HLA-DR四聚体 CDR3区 CD4+T细胞 E7 CDR3

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结核特异性多肽E6、E7和C14对单核-巨噬细胞亚型极化的影响

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中国医药生物技术 2016年第3期11卷 216-223页

作者：申东梅方毅敏申雁鸣刘国标姚亚男赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室结核病防治研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 广州市胸科医院 510095

目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14^+CD16^+)及M2(CD14^+CD163^+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核... 详细信息

目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14^+CD16^+)及M2(CD14^+CD163^+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核病患者胸水单个核细胞及外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术检测刺激物不同时间点对单核-巨噬细胞极化表面标记表达的影响。结果结核特异性多肽E6刺激THP-1 24+0 h、24+24 h、24+48 h、24+72 h后,CD16/CD163阳性率分别为16.85%/13.78%、19.59%/15.68%、18.14%/14.19%、13.61%/11.47%。E7刺激效果与E6相似,C14对THP-1的CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结核特异性多肽E6刺激结核患者胸水或血标本单核细胞19 h后,CD14+CD16+阳性率(1#患者:1.66%,2#患者:4.37%)与CD14^+CD163^+阳性率(1#患者:1.76%,2#患者:2.82%)差异不大,但CD14^+CD16^+CD86^+阳性率(1#患者:2.20%,2#患者:6.16%)大于CD14^+CD163^+CD206^+阳性率(1#患者:1.37%,2#患者:0.92%)。E7刺激效果与E6相似,C14对结核患者胸水或血标本单核细胞CD14/CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结论 3种结核特异性多肽特别是E6、E7体外刺激单核细胞株THP-1、结核患者胸水或血标本单核细胞主要向M1型单核-巨噬细胞极化。

关键词：肽类白血病,单核细胞,急性单核-巨噬细胞系统极化分型

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表达结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体的果蝇 S2恒定细胞系的构建和鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第1期35卷 23-26页

作者：涂晓欣张洁孟繁荣方毅敏杨芳芳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 广州市胸科医院

目的：转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌Vγ9Vδ2 T细胞受体（TCR）双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT／V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT／V5-His A质粒、pMT／Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S... 详细信息

目的：转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌Vγ9Vδ2 T细胞受体（TCR）双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT／V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT／V5-His A质粒、pMT／Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S2细胞中，用潮霉素B筛选恒定细胞系后表达生物素化的结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体，并加以鉴定。结果斑点印迹试验、SDS-PAGE和Western blot表明细胞培养上清中有Vγ9Vδ2 TCR单体，且已被成功生物素化。结论成功筛选出能稳定分泌表达Vγ9Vδ2 TCR的果蝇S2恒定细胞系，为研究γδ T细胞的免疫识别提供实验资料。

关键词： γδT细胞受体双链单体 S2细胞

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结核特异性CD4^+ α/β TCR四聚体细胞株筛选技术的建立和应用

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中国医药生物技术 2014年第2期9卷 88-94页

作者：姚亚男黄宇虹王娟陈伊任亮亮赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室/热带病防治研究教育部重点实验室/海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室/广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080

目的应用不同的MTB多肽以及不同的HLA-DR基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR复合物的S2恒定细胞株,即人工APC筛选、鉴定结核特异性CD4+α/βTCR四聚体。方法以PE标记的CD4+α/βTCR四聚体、FITC标记的抗HLA-DR抗体(L243),分别与未... 详细信息

目的应用不同的MTB多肽以及不同的HLA-DR基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR复合物的S2恒定细胞株,即人工APC筛选、鉴定结核特异性CD4+α/βTCR四聚体。方法以PE标记的CD4+α/βTCR四聚体、FITC标记的抗HLA-DR抗体(L243),分别与未诱导表达或CuSO4诱导表达后的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR的果蝇S2恒定细胞株,以及与无多肽或结合有结核多肽的、表达HLA-DR的S2细胞株共孵育,流式细胞技术检测分析TCR四聚体与各种细胞株结合率的差异。结果 TCR四聚体6M、6N均与2#细胞株,即C5/HLA-DRB1*0404(1.73%、5.93%)等具有较高的阳性结合率;结核抗原肽孵育后,一些人工APC的四聚体阳性结合率有所提高;所筛选的9个TCR四聚体均与2#细胞株有较高的结合率。结论膜表达结核抗原肽/HLA-DR的S2细胞株,可以应用于结核特异性CD4+α/βTCR四聚体的筛选、鉴定;构建的9个CD4+α/βTCR四聚体均为结核特异性。

关键词：结核多肽人工抗原递呈细胞 CD4+T 细胞 TCR四聚体

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不同E7多肽/HLA-DRB四聚体分析检测结核患者外周血及胸水标本中多肽特异性CD4+T细胞

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中华临床医师杂志(电子版) 2013年第23期7卷 10704-10708页

作者：王楠黄利荣方毅敏李研赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州市胸科医院结核内科

目的应用流式细胞检测技术,探讨不同E7/HLA-DRB四聚体检测结核患者外周血及胸水标本中E7多肽特异性CD4+T细胞百分率之间的差异。方法复苏培养能稳定表达E7/HLA-DRB1*090102、E7/HLA-DRB1*130201、E7/HLA-DRB1*150101和E7/HLA-DRB1*130201的果蝇S2细胞株,表达、纯化、制备成相应四聚体。以37例脐带血作为研究对照组,150例肺结核患者外周血和23例结核性胸膜炎患者胸水标本为实验研究组,Ficoll法分离单个核细胞,用PE-E7/HLA-DRB四聚体和鼠抗人CD4-FTIC共染细胞,流式细胞分析检测标本中E7多肽特异性CD4+T细胞百分率,并作统计学分析。结果结核患者外周血和胸水中,各四聚体E7多肽特异性CD4+T细胞百分率检测结果均显著高于脐带血标本相应四聚体检测结果;胸水标本与血标本各自做4种四聚体任意2种四聚体检测结果间比较,结果显示均无统计学差异。此外,在外周血和胸水标本间,任一四聚体的检测结果也无统计学差异。结论不同HLA-DRB来源的E7/HLA-DRB四聚体对于结核检测具有相当的意义,4种四聚体的结核检测特异性无明显差异。并未发现因CD4+T细胞迁移到局部病灶而引发的胸水标本检测结果高于相应四聚体外周血检测结果。

关键词：结核 E7多肽 HLA-DRB CD4+T细胞四聚体

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肺结核患者治疗期外周血及病理切片多肽特异性CD4^+T细胞的检测

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热带医学杂志 2012年第5期12卷 518-522,F0004页

作者：黄利荣李研方毅敏任亮亮朱艳赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广东广州510080 广州市胸科医院广东广州510095

目的应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布。方法培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋... 详细信息

目的应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布。方法培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成PE标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞。制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布。结果肺结核患者治疗前组及治疗1～60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前组与治疗1～60 d组之间、治疗61 d后各组之间及分别与脐带血之间、2个四聚体检测组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞。结论制备的2种E7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布。

关键词：结核 E7多肽 HLA-DR 四聚体 CD4+T细胞

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萎蔫酸铜离子络合物、镉离子络合物的抗结核活性及对结核分枝杆菌基因表达的影响

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中国防痨杂志 2012年第4期34卷 224-228页

作者：王娟黄宇虹陈伊李研彭毅潘嘉慧王军林永成赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心广州510080 中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室中山大学药学院海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室

目的研究海洋微生物代谢产物萎蔫酸金属铜离子络合物与镉离子络合物体外抗结核活性,以及对Mtb H37Rv基因表达的影响。方法应用纸片扩散法(Kind-Bauer,K-B法)初步鉴定萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物的抗结核活性,重复实验3次;... 详细信息

目的研究海洋微生物代谢产物萎蔫酸金属铜离子络合物与镉离子络合物体外抗结核活性,以及对Mtb H37Rv基因表达的影响。方法应用纸片扩散法(Kind-Bauer,K-B法)初步鉴定萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物的抗结核活性,重复实验3次;绝对浓度间接法测定萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),重复实验确定更准确的MIC;Mtb cDNA芯片检测萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物处理Mtb组与溶剂对照处理Mtb组表达差异的基因,重复实验一次。结果萎蔫酸铜离子络合物、萎蔫酸镉离子络合物在卡介苗(BCG)平板抑菌圈直径分别为(30.4±0.6)mm、(30.0±0.8)mm。萎蔫酸铜离子络合物抗Mtb H37Rv的MIC为10μg/ml;对耐多药结核分枝杆菌,萎蔫酸镉离子络合物MIC为7.5μg/ml,低于S(MIC=25μg/ml)和RFP(MIC=25μg/ml);对Mtb临床分离株(0907961,耐S和EMB),萎蔫酸铜离子络合物的MIC(10μg/ml)低于S(S的MIC为20μg/ml),萎蔫酸镉离子络合物的MIC(5μg/ml)均低于S(MIC=20μg/ml)、EMB(MIC=6.4μg/ml)。Mtb cDNA芯片检测发现萎蔫酸铜离子络合物处理组与溶剂对照组比较,有差异表达的基因总数为23条,其中已知功能基因有10条;萎蔫酸镉离子络合物处理组与溶剂对照组比较,有差异表达的基因总数为28条,其中已知功能基因有11条。这些存在差异的基因功能涉及核苷酸、脂质、能量、辅酶、氨基酸代谢,DNA的复制、转录、翻译、翻译后修饰以及细胞膜的生物合成等。结论萎蔫酸铜离子络合物与萎蔫酸镉离子络合物具有较好的体外抗结核活性,尤其对部分耐药菌株的抑制作用甚至优于抗结核一线用药,可作为抗结核药物的前导化合物;运用基因芯片所探究出的差异表达的基因为进一步深入研究其抗菌作用机制提供了一定的实验依据。

关键词：镰刀菌酸配合物抗结核药寡核苷酸序列分析基因表达

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bostrycin的抗结核菌活性及对细菌基因表达的影响

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中国新药杂志 2011年第6期20卷 535-539页

作者：黄宇虹王娟陈洪许国蓉李嘉李研彭毅林永成佘志刚赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室

目的:探讨bostrycin的抗结核菌活性及其对细菌基因表达的影响。方法:利用纸片扩散法初步鉴定海洋微生物代谢产物的抗结核菌活性。针对有潜在抗结核活性的化合物用绝对浓度间接法测定该化合物抗结核菌的最低抑菌浓度。应用结核cDNA芯片... 详细信息

目的:探讨bostrycin的抗结核菌活性及其对细菌基因表达的影响。方法:利用纸片扩散法初步鉴定海洋微生物代谢产物的抗结核菌活性。针对有潜在抗结核活性的化合物用绝对浓度间接法测定该化合物抗结核菌的最低抑菌浓度。应用结核cDNA芯片检测化合物处理组与对照组的基因表达谱的变化。结果:初步鉴定发现bostrycin在卡介苗平板上有明显抑菌圈,绝对浓度间接法测定显示醌类化合物bostrycin对卡介苗、结核分枝杆菌H37Rv、结核分枝杆菌临床分离株(包括敏感株和耐药株)均有抑制作用,尤其对耐多药结核分支杆菌有较好抗菌效果。结核cDNA芯片检测提示,在检测的3 875条结核分枝杆菌基因中,bostrycin处理组与对照组比较,有44条差异表达基因,其中18条上调,26条下调;这些差异表达的基因功能涉及核苷酸、脂类、能量、辅酶、碳水化合物的代谢,DNA复制、转录、翻译、氨基酸转运和代谢,细胞膜合成等。结论:本研究为抗结核新药的开发和新的抗结核菌作用靶点的研究提供了有价值的实验基础。

关键词：抗结核 bostrycin 基因芯片差异表达

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