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应用E7多肽/HLA-DR8四聚体监测治疗前后肺结核患者外周血多肽特异性CD4^+ T细胞的变化

中国防痨杂志 2011年第7期33卷 400-406页

作者：黎意芬黄利荣刘国标方毅敏李研彭毅赖小敏广州市胸科医院广州510095 中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州510080

目的监测治疗前及治疗6个月内各时间点肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4+T细胞及总CD4+T细胞的变化。方法应用已有的果蝇S2恒定细胞株,分别表达、纯化获得2种生物素化E7/HLA-DR8(E7/HLA-DRB1*08032和E7/HLA-DRB1*0818)复合物单体,进而... 详细信息

目的监测治疗前及治疗6个月内各时间点肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4+T细胞及总CD4+T细胞的变化。方法应用已有的果蝇S2恒定细胞株,分别表达、纯化获得2种生物素化E7/HLA-DR8(E7/HLA-DRB1*08032和E7/HLA-DRB1*0818)复合物单体,进而制备成相应四聚体,分别用2种四聚体与抗人CD4-FITC共染色,流式细胞分析检测治疗前以及规律抗结核治疗15、30、45、60、90、120、150、180 d肺结核患者外周血四聚体阳性(E7多肽特异性)CD4+ T细胞及总CD4+ T细胞,同时以健康成人对照者、非结核呼吸道感染患者外周血及脐带血作为研究对照。结果多数病例的外周血总CD4+ T细胞在治疗前略低于正常水平,随着治疗开始很快升高并在短期内恢复至正常水平;但除治疗前组与脐带血差异有统计学意义(P<0.05)外,治疗前后各组之间,以及治疗前组与健康成人、非结核呼吸道感染者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前以及规律抗结核治疗15、30、456、0 d内肺结核患者组外周血可检出高水平的四聚体阳性CD4+ T细胞,与60 d后各组及3个对照组差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05),2种四聚体之间的检测结果无统计学意义(P>0.05);肺结核患者外周血四聚体阳性CD4+ T细胞在治疗前即有较高水平,治疗15~60 d后达到最高,一些患者中间有波动,以后开始逐渐降低甚至降至正常水平。结论多肽/HLA-DR四聚体可以用于监测治疗前后结核患者外周血多肽特异性CD4+ T细胞的变化,配合总CD4+ T细胞的检测,对于治疗期结核患者疾病发展和恢复的监测具有指导意义。

关键词：结核,肺/免疫学 CD4阳性T淋巴细胞 HLA-DR抗原

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结核分枝杆菌特异性多肽-IFN-γ-ELISPOT技术的建立及其对结核分枝杆菌感染的诊断意义

结核分枝杆菌特异性多肽-IFN-γ-ELISPOT技术的建立及其对结核分...

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中华医学会结核病学分会2011年学术会议

作者：杨芳芳方毅敏董涛涂志全赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州市胸科医院

目的建立结核分枝杆菌特异性(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多肽酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测MTB感染情况的方法,评价其临床诊断价值。方法通过比较不同的多肽组确定ELISPOT检测MTB感染方法,建立I... 详细信息

目的建立结核分枝杆菌特异性(Mycobacterium tuberculosis,MTB)多肽酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunospot assay,ELISPOT)检测MTB感染情况的方法,评价其临床诊断价值。方法通过比较不同的多肽组确定ELISPOT检测MTB感染方法,建立IFN-γ-ELISPOT方法。以PPD皮肤试验作对照。同时检测部分健康人群做对照。结果用ELISPOT方法检测结核患者标本,E6、E7、C14、E6+E7、E6+E7+C14五个多肽实验组检测阳性率依次为52.32%、76.89%、73.89%、91.23%、91.30%。五个组患者对应的PPD试验检测阳性率都高于95%。用E6+E7+C14混合多肽ELISPOT检测两个社区的健康人群其检测阳性率分别为9%和3%,而PPD试验的阳性检出率为45%和60%。结论应用混合多肽建立的IFN-γ-ELISPOT方法可初步应用于诊断MTB感染、辅助结核病诊断。

关键词：酶联免疫斑点试验(ELISPOT) 多肽结核分枝杆菌感染诊断

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E7多肽/HLA-DRB1*0404与E7多肽/HLA-DRB1*1602四聚体对肺结核患者外周血多肽特异性CD4+T细胞治疗前后的变化的监测

E7多肽/HLA-DRB1*0404与E7多肽/HLA-DRB1*1602四聚体对肺结核患者...

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中华医学会结核病学分会2011年学术会议

作者：黄利荣李研方毅敏任亮亮朱艳唐文正赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州市胸科医院

目的监测肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4 T细胞的比例及治疗前后各时间点肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4 T细胞的变化。方法培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,获得2种可生物素化复合物单体,进... 详细信息

目的监测肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4 T细胞的比例及治疗前后各时间点肺结核患者外周血E7多肽特异性CD4 T细胞的变化。方法培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,获得2种可生物素化复合物单体,进而制备成相应四聚体,分别用2种四聚体与抗人CD4-FITC共染色,流式细胞分析检测治疗前后肺结核患者外周血四聚体阳性（E7多肽特异性）CD4 T细胞,同时以脐带血作为研究对照。结果肺结核患者外周血多肽特异性CD4T细胞的比例明显高于脐带血（p<0.05）,2种四聚体之间的检测结果无显著性差别（p>0.05）;多数病例的外周血E7多肽特异性CD4 T细胞在治疗后均有降低趋势。结论多肽/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于监测治疗前后结核患者外周血多肽特异性CD4 T细胞的变化。

关键词：结核 E7多肽 HLA-DR 四聚体 CD4+ T细胞

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应用CD4+Vα9-J27/Vβ29-D1-J2和Vα9-J27/Vβ29-D2-J2 TCR四聚体诊断结核病的初步研究

应用CD4+Vα9-J27/Vβ29-D1-J2和Vα9-J27/Vβ29-D2-J2 TCR四聚体...

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中华医学会结核病学分会2011年学术会议

作者：谢丹杜玄静方毅敏李研张建波高鸣张扣兴赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心中山大学附属第三医院中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术研究中心！广州510080 广州市胸科医院

目的初步探讨CD4~ + Vα9-J27/Vβ29-D1-J2和Vα9-J27/Vβ29-D2-J2（以下简称5号和8号）TCR四聚体对结核感染检测是否有特异性。方法应用已有的果蝇S2恒定细胞株,分别表达、纯化获得2种生物素化TCR复合物单体并制备成相应四聚体。2种四... 详细信息

目的初步探讨CD4~ + Vα9-J27/Vβ29-D1-J2和Vα9-J27/Vβ29-D2-J2（以下简称5号和8号）TCR四聚体对结核感染检测是否有特异性。方法应用已有的果蝇S2恒定细胞株,分别表达、纯化获得2种生物素化TCR复合物单体并制备成相应四聚体。2种四聚体分别与抗人CD14-FITC共染色,流式细胞分析检测肺结核患者外周血的四聚体阳性CD14单核细胞的百分率,以健康成人对照者、非结核呼吸道感染患者外周血及脐带血作为研究对照:2种四聚体分别与抗结核抗体或抗人CD14抗体原位共染色,激光共聚焦倒置显微镜下观察四聚体与结核抗原双染阳性的细胞及四聚体与CD14双染阳性细胞的分布情况,以肺炎组织作为研究对照。结果流式细胞分析结果:除非结核呼吸道组与正常健康人组间无统计学差异（5号四聚体p=0.454,8号四聚体p=0.018,p>0.017,统计学无差异）,其余肺结核组与其他三组对照组,脐带血组与肺结核组、非结核呼吸道组和正常健康人组间差异均有统计学意义p<0.001。2种四聚体对36例相同肺结核患者标本的流式分析结果无统计学差异（p>0.05）。原位染色结果显示:结核组织标本可观察到四聚体与CD14双染阳性的细胞和四聚体与结核抗原双染阳性细胞;而对照组织标本四聚体与结核抗原均为阴性。结论 5号和8号CD4 TCR四聚体对结核检测有一定的特异性,为TCR四聚体应用于结核的诊断和免疫机制研究奠定了一定的实验基础。

关键词：结核 CD4+ TCR四聚体 CD14+单核-巨噬细胞

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Enniatin B与Enniatin B4的抗结核活性及对细菌基因表达的影响

Enniatin B与Enniatin B4的抗结核活性及对细菌基因表达的影响

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中华医学会结核病学分会2011年学术会议

作者：王娟梁碧怡黄宇虹陈伊李研彭毅林永成王军赖小敏中山大学中山医学院微生物学教研室热带病防治研究教育部重点实验室海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室广东省重大传染病预防和控制技术中心中山大学药学院海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室

目的研究Enniatin B与Enniatin B4体外抗结核活性以及对结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB) H37Rv基因表达的影响。方法 Kind-Bauer纸片扩散法初步鉴定海洋微生物代谢产物的抗结核活性;运用绝对浓度间接法测定具有一定抗结核... 详细信息

目的研究Enniatin B与Enniatin B4体外抗结核活性以及对结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB) H37Rv基因表达的影响。方法 Kind-Bauer纸片扩散法初步鉴定海洋微生物代谢产物的抗结核活性;运用绝对浓度间接法测定具有一定抗结核活性的化合物的最低抑菌浓度;应用结核cDNA芯片检测化合物处理MTB组与未处理MTB对照组表达差异的基因。结果初步鉴定发现Enniatin B与Enniatin B4在卡介苗(BCG)平板上有明显的抑菌圈。绝对浓度间接法发现Enniatin B与Enniatin B4对MTB H37Rv、临床分离的耐药MTB株均有抑菌效果,尤其对部分耐药菌株的抑制作用甚至优于抗结核一线用药。结核cDNA芯片检测发现,Enniatin B处理组与对照组比较,有差异表达的基因总数为117条,上调50条,下调67条;Enniatin B4化合物处理组与对照组比较,有差异表达的基因总数为97条,上调44条,下调53条;这些存在差异的基因功能涉及核苷酸、脂质、能量、辅酶、氨基酸代谢,DNA的复制、转录、翻译、翻译后修饰以及细胞膜的生物合成等。结论本实验为抗结核新药的开发以及新的抗结核作用靶点的探索提供有价值的实验基础。

关键词：抗结核 Enniatin B Enniatin B4 基因芯片差异表达

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