检索结果-内蒙古大学图书馆

慢病毒介导RNA干扰Clusterin基因表达载体的构建及其在肾癌786-O与ACHN细胞系中的表达

武汉大学学报（医学版） 2012年第6期33卷 779-783页

作者：石华邓军洪马胜利王铸曹开源周亮万华广州医学院附属广州市第一人民医院泌尿外科广东广州510180 中山大学临床检验标准化研究中心/中山大学中山医学院微生物学教研室广东广州510080

目的:应用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立Clusterin(CLU)基因稳定干扰的人肾癌细胞系,为CLU基因的功能研究奠定基础。方法:以人CLU mRNA编码序列作为干扰靶点,与pGCSIL-GFP载体连接真核表达载体。另外构建不针对任何已知mRNA的阴性对照sh... 详细信息

目的:应用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立Clusterin(CLU)基因稳定干扰的人肾癌细胞系,为CLU基因的功能研究奠定基础。方法:以人CLU mRNA编码序列作为干扰靶点,与pGCSIL-GFP载体连接真核表达载体。另外构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒。利用包装细胞293T获得重组慢病毒,分别感染人肾癌786-O细胞株及ACHN细胞株。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别CLU表达的变化。结果:成功构建CLU shRNA慢病毒载体CLU-RNAi-LV并获得相应的慢病毒,病毒悬液滴度>4×1011TU/L。RealTime-PCR、Western blot结果显示干扰组CLU mRNA及蛋白表达水平较对照组显著降低。结论:慢病毒介导的CLU基因干扰能稳定有效地表达于肾癌细胞,筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。

关键词： RNA干扰慢病毒 Clusterin 肾癌

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B细胞非霍奇金淋巴瘤TCR基因重排及CDR3谱型分析

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白血病．淋巴瘤 2009年第9期18卷 556-558页

作者：张建波宋永平于庆凯胡俊董涛河南省肿瘤医院病理科郑州450003 河南省肿瘤医院血液科郑州450003 中山大学中山医学院微生物学教研室

目的分析B细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法应用RT—PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3区基因，并经基因扫描确定T细胞克隆陛，对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物进行测序... 详细信息

目的分析B细胞淋巴瘤穿刺标本中T细胞受体（TCR）β链克隆性基因重排及互补决定区3（CDR3）谱型。方法应用RT—PCR扩增TCR Vβ24个亚家族的CDR3区基因，并经基因扫描确定T细胞克隆陛，对提示单克隆或寡克隆增生亚家族的PCR产物进行测序。结果3例淋巴瘤患者TCR存在限制性取用，仅表达2～5个Vβ亚家族。所有患者均存在克隆性增生T细胞，增生形式包括寡克隆及寡克隆增生趋势。CDR3区序列分析证实增生的T细胞克隆具有不同的氨基酸序列。结论B细胞淋巴瘤患者存在T细胞克隆性增生，其TCRVB呈限制性取用，不同克隆T细胞的CDR3序列不同。

关键词：淋巴瘤 B细胞基因重排互补决定区寡核苷酸序列分析

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轻症和重症人感染H7N9禽流感病毒的致病性

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中山大学学报（医学科学版） 2016年第6期37卷 828-833页

作者：方丹云郭晓兰于玉凤晏辉钧司露露王颖江丽芳周俊梅中山大学中山医学院微生物学教研室//热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 广州医科大学生物学实验教学中心广东广州511430

【目的】研究来自不同临床类型H7N9感染者病毒分离株的致病性,探索病毒分子特性与致病差异的关系。【方法】建立人PBMC体外培养及病毒感染模型,人肺组织体外培养及病毒感染模型以及小鼠感染H7N9动物模型,分别从以上3个层次研究两株来自... 详细信息

【目的】研究来自不同临床类型H7N9感染者病毒分离株的致病性,探索病毒分子特性与致病差异的关系。【方法】建立人PBMC体外培养及病毒感染模型,人肺组织体外培养及病毒感染模型以及小鼠感染H7N9动物模型,分别从以上3个层次研究两株来自轻症和重症H7N9感染者病毒分离株(即GD-6和GD-7)的感染性及病理损伤状况。【结果】两株病毒均能感染人PBMC、人肺组织体外培养模型和Balb/C小鼠的肺组织,并在其中有效复制,且GD-7的增殖能力强于GD-6。病毒主要感染人肺组织的II型肺泡上皮细胞,GD-7引起肺组织的病例变化更加明显。在小鼠肺组织,GD-7的病毒载量高于GD-6,小鼠感染病毒后其肺指数增大,肺组织的病理变化明显,且GD-7对小鼠的致病力强于GD-6。【结论】重症分离株GD-7的复制能力和致病力强于轻症分离株GD-6,结合前期研究结果 ,两株病毒存在关键氨基酸位点的差异,其中PB2蛋白的627位点在GD-7发生了突变E627K,因此推测病毒载量及关键位点突变可能对病毒的致病力起重要作用。

关键词： H7N9禽流感病毒感染性致病性

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广东首例H5N1人禽流感病毒表面糖蛋白基因分子特征研究

广东首例H5N1人禽流感病毒表面糖蛋白基因分子特征研究

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第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会

作者：周经姣付捷方丹云晏辉钧田疆周俊梅陶建平梁瑜江丽芳中山大学中山医学院微生物学教研室

2006年3月,广东省广州市出现一例 H5N1感染并死亡病例。为了了解该病毒的来源、变异和致病的分子基础,我们从尸检肺组织中扩增了 H5N1全基因组8 个片段,命名为(A/China/GD01/06(H5N1)),并对 HA 和 NA 基因片断进行克隆、

关键词：人禽流感病毒糖蛋白基因分子特征

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登革病毒2型prM蛋白的表达及其多克隆抗体的中和作用和ADE作用的初步研究

登革病毒2型prM蛋白的表达及其多克隆抗体的中和作用和ADE作用的...

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2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会

作者：冯俊杰罗雅艳周俊梅方丹云喻治准晏辉钧江丽芳中山大学中山医学院微生物学教研室

目的:建立登革2型prM蛋白的真核和原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究prM多克隆抗体的中和作用及抗体依赖增强作用(Antibody-DependentEnhancement,ADE)。方法:应用毕赤酵母和大肠杆菌表达系统表达全长登革病毒2型prM蛋白,经Ni-... 详细信息

目的:建立登革2型prM蛋白的真核和原核稳定表达系统,并制备prM多克隆抗体,研究prM多克隆抗体的中和作用及抗体依赖增强作用(Antibody-DependentEnhancement,ADE)。方法:应用毕赤酵母和大肠杆菌表达系统表达全长登革病毒2型prM蛋白,经Ni-NTA亲和层析法和电洗脱法纯化重组蛋白,免疫家兔,采集免疫血清制备兔抗prM蛋白多克隆抗体;经辛酸-硫酸铵法、亲和层析法纯化抗体,应用Western-blot、ELISA法检测抗prM多克隆抗体的性质及效价;应用空斑形成试验

关键词：登革病毒 prM蛋白 prM多克隆抗体中和作用 ADE作用

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人CD134L基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析

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热带医学杂志 2002年第2期2卷 121-123,120页

作者：汤永平张春艳邵焰湖南医学高等专科学校微生物学教研室长沙410006 中山大学中山医学院免疫学教研室广州510089 中山大学中山医学院微生物学教研室广州510089

目的　构建人CD1 34L真核细胞表达载体并对其进行序列分析。方法　采用PCR方法扩增人CD1 34L基因cDNA ,先后经BamHI和XhoI酶切并纯化 ,再定向克隆到高效真核表达载体pcDNA3中 ,构建成pcDNA3 CD1 34L ,通过PCR扩增、双酶切后琼脂糖电泳... 详细信息

目的　构建人CD1 34L真核细胞表达载体并对其进行序列分析。方法　采用PCR方法扩增人CD1 34L基因cDNA ,先后经BamHI和XhoI酶切并纯化 ,再定向克隆到高效真核表达载体pcDNA3中 ,构建成pcDNA3 CD1 34L ,通过PCR扩增、双酶切后琼脂糖电泳分析及序列测定进行鉴定。结果　pcDNA3 CD1 34L经BamHI和XhoI双酶切后出现两条目的条带、经PCR扩增出现单一目的条带、序列测定结果与Genebank的序列完全一致。结论　成功地克隆了人CD1 34L基因cDNA ,构建了真核表达载体 ,本研究为探讨CD1 34L与淋巴细胞活化的关系。

关键词： CD134L基因真核细胞基因克隆序列分析聚合酶链反应真核细胞表达载体淋巴细胞活化免疫性疾病信号传导

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两株人H7N9禽流感病毒的全基因组测序及分子特征分析

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中山大学学报（医学科学版） 2015年第2期36卷 167-175页

作者：郭晓兰司露露管大伟王颖于玉凤方丹云武婕江丽芳中山大学热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 广东省疾病预防控制中心广东广州511430 中山大学中山医学院微生物学教研室广东广州510080

【目的】对两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的人H7N9禽流感病毒进行全基因组测序,研究其来源、基因组特征以及相互间的分子差异,旨在了解毒株的遗传进化特征与其致病性及其所致疾病临床类型的关系,为进一步阐明H7N9禽流感病毒的致... 详细信息

【目的】对两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的人H7N9禽流感病毒进行全基因组测序,研究其来源、基因组特征以及相互间的分子差异,旨在了解毒株的遗传进化特征与其致病性及其所致疾病临床类型的关系,为进一步阐明H7N9禽流感病毒的致病机制提供科学依据。【方法】选取两株从轻症病例和重症死亡病例中分离的H7N9禽流感病毒进行全基因组序列测定;运用生物信息学软件比较分析两株病毒的遗传进化关系、基因组特征、受体结合位点、宿主特异性位点及致病相关位点等重要分子特征;从禽流感共享数据(GISAID)下载2013年至2014年10月轻症和重症病例的病毒分离株序列,分析致病相关关键位点差异,并分析这些变异与其致病性及所致疾病临床类型的关系。【结果】这两株H7N9禽流感病毒的HA、NA和M基因来源于2013年华东地区流行的H7N9禽流感病毒,NP、NS、PA、PB1和PB2基因来源于2013年在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒;H7N9禽流感病毒PA蛋白L336M和PB1蛋白I368V的突变率随流行时间的延长而逐渐上升,并存在地区差异;两株病毒各基因核苷酸同源性达到99.2%以上,氨基酸同源性在99.5%以上,但各基因节段存在个别氨基酸的差异,其中HA受体结合位点存在一个关键氨基酸的差异(226L和226 Q),宿主特异性位点存在两个关键氨基酸的差异(PB2-591L和PB2-591Q,PB2-627E和PB2-627K),毒力位点存在两个关键氨基酸差异(PA-353R和PA-353K,PB2-627E和PB2-627K);M2均发生了S31N突变;潜在糖基化位点均相对保守;2013年至2014年10月报道的重症病例病毒分离株PB2蛋白E627K突变率高于轻症病例分离株。【结论】两株来自不同临床类型的H7N9禽流感病毒是一种新的重组病毒,是由华东地区流行的人H7N9禽流感病毒和在广东地区禽类中流行的H9N2禽流感病毒基因重组而来;H7N9禽流感病毒的某些致病相关的关键氨基酸位点在流行的过程中不断发生变异,必须密切监测毒株的变异动向;两株致病力不同的病毒各基因节段虽然同源性较高,但存在关键氨基酸位点的差异,其中PB2蛋白627位氨基酸位点的差异可能对病毒的致病性起重要作用,与所致疾病临床类型相关。

关键词： H7N9禽流感病毒测序进化特征分子特征致病性临床类型

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登革病毒基因组核苷酸变异与毒力的关系

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热带医学杂志 2007年第1期7卷 98-100,F0003页

作者：曹丹周俊梅中山大学中山医学院 2002级本科生广州510080 中山大学中山医学院微生物学教研室广州510080

登革病毒是一种流行于热带、亚热带地区的蚊媒病毒,其引起的登革热、登革出血热/登革休克综合征(DSS/DHF)已成为严重威胁人类健康的公共卫生问题。登革病毒缺乏精确的复制校正系统,在传播过程中核苷酸的变化会导致病毒毒力的变化,目前... 详细信息

登革病毒是一种流行于热带、亚热带地区的蚊媒病毒,其引起的登革热、登革出血热/登革休克综合征(DSS/DHF)已成为严重威胁人类健康的公共卫生问题。登革病毒缺乏精确的复制校正系统,在传播过程中核苷酸的变化会导致病毒毒力的变化,目前其致病与免疫机制尚未明了,缺乏有效的疫苗。本文就登革病毒基因变异与其毒力关系方面的研究进行综述。

关键词：登革病毒核酸序列差异毒力

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2014年广东省登革热大流行的病原体来源及分子进化特点

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中山大学学报（医学科学版） 2017年第1期38卷 21-28页

作者：郭前方崔国辉方丹云晏辉钧周俊梅司露露吴德江丽芳中山大学热带病防治研究教育部重点实验室//中山医学院微生物学教研室广东广州510080 广东省疾病预防控制中心广东广州510300

【目的】分离培养与鉴定2014年广东省登革热暴发流行的病原体,从分子进化方向分析其来源和遗传进化特点,为登革热的监测和防控提供科学依据。【方法】在2014年登革热暴发流行期间,采集广东省不同地区登革热患者的血清标本,从中分离培养... 详细信息

【目的】分离培养与鉴定2014年广东省登革热暴发流行的病原体,从分子进化方向分析其来源和遗传进化特点,为登革热的监测和防控提供科学依据。【方法】在2014年登革热暴发流行期间,采集广东省不同地区登革热患者的血清标本,从中分离培养登革病毒并进行型别鉴定。采用RT-PCR和测序技术获取病毒的E基因和全基因组序列,并对其进行系统进化分析、贝叶斯进化分析和遗传变异分析。【结果】分离培养与鉴定了40株登革病毒1型(DENV-1)病毒,获得了这40株分离株的完整E基因序列和其中6株分离株的全基因组序列。E基因进化分析结果显示,40株分离株中有16株为基因Ⅰ型,24株为基因Ⅴ型。16株基因Ⅰ型毒株中有14株与2013年广州市和2013年新加坡流行的毒株高度同源,核苷酸相似度为99.6%~99.9%,另2株基因Ⅰ型毒株则与2013年马来西亚流行的毒株亲缘关系最近,核苷酸相似度为99.7%。24株基因Ⅴ型毒株均与2009年孟加拉、广州市和2013年不丹流行的毒株同源性高,核苷酸相似度为99.0%~99.9%。对6株病毒全基因组进化分析结果显示,其中5株病毒与2013年广州市和中山市流行的毒株高度同源,核苷酸相似度为99.6%~99.8%,另一株病毒则与2002年的缅甸流行株亲缘关系最近,核苷酸相似度为98.8%。对E基因的遗传变异分析结果显示,与2013年广东省的流行代表株比较,2014年广东省分离株有5个氨基酸位点发生了变异,其中3个(S88V,E203G,T275R)位于EⅡ区的毒力位点区域,1个(S305P)位于EⅢ区的毒力位点区域。【结论】2014年广东省登革热的病原体主要为DENV-1,且至少有2种基因型同时在流行;其可能来源于2013年广东省流行的毒株,也可能来源于新加坡、马来西亚、缅甸等东南亚国家的毒株,其中2013年广东省流行的毒株可能是重要来源之一,提示须加强对本地毒株及传播媒介的监测和研究,以便了解登革热是否在广东省本地化的问题;在流行过程中,病毒有些氨基酸位点已发生变异,其中有4个变异位点位于登革病毒的毒力位点区域,提示有必要对这些变异的生物学意义开展进一步研究。

关键词：登革热登革病毒 E基因全基因组系统进化分析贝叶斯分析

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亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶检测

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中国抗生素杂志 2011年第3期36卷 223-227页

作者：余广超徐霖袁广卿张甜陈康蒋岗姜余琴许沙沙常彦敏曹开源暨南大学附属第一医院临床检验中心广州510630 中山大学临床检验标准化研究中心广州510080 中山大学中山医学院微生物学教研室广州510080 广东省重大传染病预防和控制技术研究中心广州510080

目的了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料。方法采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株... 详细信息

目的了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料。方法采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,采用PCR检测5类金属β-内酰胺酶的编码基因(IMP家族、VIM家族、GIM-1、SPM-1和SIM-1),利用生物信息学的方法对检测到的金属β-内酰胺酶亚型进行比对分析并制作分子进化树。结果 164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中筛选出22株金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,IMP阳性15株(9.1%),其中11株为IMP-9亚型,另外4株携带一个新的亚型,命名为IMP-25,VIM阳性5株(3.0%),均为VIM-2亚型,未检测到GIM-1、SPM-1和SIM-1型金属β-内酰胺酶。结论广州地区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的基因型已经出现多型化的特征,同时存在IMP型和VIM型金属β-内酰胺酶的流行,本次研究发现了一个新的金属β-内酰胺酶亚型(IMP-25),为IMP家族金属β-内酰胺酶的多样性及其分子流行病学资料提供了新的信息。

关键词：铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶耐药基因

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