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嗅鞘细胞移植和左旋硝基精氨酸对大鼠脊髓损伤后背核神经元存活及其轴突再生的影响

解剖学报 2007年第3期38卷 271-277页

作者：张静曾园山张伟陈穗君中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的探讨嗅鞘细胞(OECs)移植和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)对大鼠脊髓损伤后,背核神经元存活及其轴突再生的影响。方法将20只大鼠行脊髓半横断术后分为对照组、OECs组、L-NNA组和OECs+L-NNA组。OECs+L-NNA组在脊髓损... 详细信息

目的探讨嗅鞘细胞(OECs)移植和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)对大鼠脊髓损伤后,背核神经元存活及其轴突再生的影响。方法将20只大鼠行脊髓半横断术后分为对照组、OECs组、L-NNA组和OECs+L-NNA组。OECs+L-NNA组在脊髓损伤处移植嗅鞘细胞,并注射L-NNA。术后30d时,应用NADPH酶组织化学、免疫组织化学、中性红染色、HE染色和荧光金逆行标记等方法,观察4组大鼠L1背核神经元存活及其轴突再生情况。结果***组、L-NNA组L1背核神经元存活数量均高于对照组,且分类计数显示,这两组对脊髓背核大、中、小神经元的存活均有促进作用,而OECs+L-NNA组的促存活作用最显著。***组和OECs+L-NNA组脊髓损伤处可见再生的轴突,且L1背核可观察到被荧光金逆行标记的神经元胞体。3.与对照组比较,OECs组L1背核NOS阳性神经元增加,L-NNA组NOS阳性神经元减少,OECs+L-NNA组NOS阳性神经元数量差异不明显。结论嗅鞘细胞移植和L-NNA均可促进脊髓受损伤背核神经元的存活,两者联合应用可更好地促进受损伤的背核神经元存活及其轴突再生。

关键词：嗅鞘细胞左旋硝基精氨酸脊髓半横断神经元存活轴突再生背核免疫组织化学大鼠

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灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

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解剖学报 2007年第3期38卷 369-372页

作者：熊轶曾园山唐久余张伟陈穗君钟志强中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响。方法给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形。然后,给予灵芝孢子... 详细信息

目的探讨灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)表达的影响。方法给予实验对照组和灵芝孢子组妊娠E7.75d的小鼠一次性胃饲维甲酸,造成这2组孕鼠的胚胎出现神经管畸形。然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液。在孕期E10.5d时取出2组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Western blotting检测胚胎神经管神经上皮依赖细胞周期蛋白激酶4(Cdk4)的表达情况。结果在灵芝孢子组可以观察到形态正常的胚胎中,神经管的神经上皮细胞有Cdk4的表达,其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较没有明显差异。在灵芝孢子组形态异常的胚胎中,其神经管的神经上皮细胞也有Cdk4的表达,但其表达水平与空白对照组及正常对照组相比较是低的。结论灵芝孢子可能是通过促进神经管神经上皮细胞上调Cdk4的表达来减轻维甲酸诱导的胚胎小鼠神经管畸形。

关键词：灵芝孢子维甲酸神经管畸形依赖细胞周期蛋白激酶4 免疫荧光组织化学免疫印迹法胚胎小鼠

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灵芝孢子防止妊娠高血压大鼠的胎鼠及其生后幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少

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解剖学报 2007年第1期38卷 27-33页

作者：程进军曾园山张惠君陈穗君张伟熊轶钟志强中山大学中山医学院解剖学教研室广州510080 中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的探讨灵芝孢子对妊娠高血压大鼠的胎鼠及幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少的干预作用。方法40只SD妊娠大鼠分为正常对照组、N硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)+蒸馏水组、L-NAME+精氨酸组、L-NAME+灵芝孢子组。采用免疫组织化学、Wes... 详细信息

目的探讨灵芝孢子对妊娠高血压大鼠的胎鼠及幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少的干预作用。方法40只SD妊娠大鼠分为正常对照组、N硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)+蒸馏水组、L-NAME+精氨酸组、L-NAME+灵芝孢子组。采用免疫组织化学、Western blotting、RT-PCR、流式细胞计数和电镜等技术对海马组织进行检测。结果应用L-NAME后,E21海马低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达增加,直到P30时仍有表达。E21海马微血管密度增高,P30海马毛细血管结构异常。E21海马细胞的增殖下降,P30海马神经元减少。应用灵芝孢子后,E21海马HIF-1α和VEGF低水平表达,在P30时则未见表达。E21海马微血管密度达到正常水平,P30海马毛细血管结构正常。E21海马细胞增殖上升,P30海马神经元恢复性增多。结论灵芝孢子能防止妊娠高血压大鼠的胎鼠及幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少。

关键词：灵芝孢子妊娠高血压低氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子细胞增殖海马免疫印迹大鼠

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红景天对慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马5-羟色胺水平及其细胞增殖、分化和神经元数量的影响

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中国中药杂志 2008年第23期33卷 2842-2846页

作者：秦亚静曾园山周春春李燕钟志强中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广东广州510080

目的:探讨中药红景天Rhodiola rosea对慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马5-羟色胺(5-HT)水平及其细胞增殖、分化和神经元数量的影响。方法:50只大鼠被分为正常对照组、模型组、阴性对照组、阳性对照组及红景天治疗组,每组各10只动物。除... 详细信息

目的:探讨中药红景天Rhodiola rosea对慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马5-羟色胺(5-HT)水平及其细胞增殖、分化和神经元数量的影响。方法:50只大鼠被分为正常对照组、模型组、阴性对照组、阳性对照组及红景天治疗组,每组各10只动物。除正常对照组外,给予其余4组大鼠为期4周的慢性应激,以建立抑郁症模型。在模型建立后,除模型组正常饲养外,其余4组大鼠分别灌服5%羧甲基纤维素钠、氟西汀、红景天,灌药周期均为3周。灌药结束后,采用高效液相色谱法检测海马组织5-HT水平,5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)和β-微管蛋白Ⅲ(β-tubu-linⅢ)免疫荧光组化双标记染色检测海马神经干细胞的增殖和分化、采取形态计量学方法计数海马神经元。结果:与正常对照组比较,红景天治疗组的大脑海马5-HT水平、BrdU标记细胞数量、β-tubulin III和BrdU双标记细胞百分率以及神经元数量恢复性增加到正常对照组大鼠的水平。结论:红景天能够提高慢性应激导致的抑郁大鼠大脑海马5-HT水平,促进其海马神经干细胞增殖和分化,同时具有保护受损伤的海马神经元的作用。

关键词：红景天抑郁症海马神经干细胞分化

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神经营养素-3基因修饰骨髓间充质干细胞的明胶海绵圆柱体支架移植促进大鼠全横断脊髓损伤部分结构和功能修复的研究

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中国康复医学杂志 2011年第7期26卷 603-608页

作者：卢丽雅张巍曾园山曾湘何兵黄斯凡李燕中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的:探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)的明胶海绵圆柱体支架移植对大鼠全横断脊髓损伤部分结构和功能修复的影响。方法:选取15只SD大鼠,随机分成3组:①NT-3基因修饰MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植组(NT-3-MSCs... 详细信息

目的:探讨神经营养素-3(NT-3)基因修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)的明胶海绵圆柱体支架移植对大鼠全横断脊髓损伤部分结构和功能修复的影响。方法:选取15只SD大鼠,随机分成3组:①NT-3基因修饰MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植组(NT-3-MSCs组);②MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植组(MSCs组);③单纯明胶海绵圆柱体支架移植组(control组)。在脊髓全横断后施行上述支架移植,在一定时间点比较3组动物功能恢复情况及其脊髓损伤区的结构变化。结果:NT-3-MSCs组BBB功能评分、移植的MSCs存活数、神经丝蛋白-200(NF-200)阳性纤维计数和平均空洞面积均优于其余组别(P<0.05)。结论:NT-3基因修饰MSCs联合明胶海绵圆柱体支架移植能够促进大鼠脊髓损伤部分结构和功能的修复,为临床治疗脊髓损伤提供实验依据。

关键词：神经营养素-3 骨髓间充质干细胞明胶海绵圆柱体支架移植脊髓损伤神经纤维再生

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督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生

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解剖学报 2006年第1期37卷 30-35页

作者：李晓滨曾园山陈玉玲郭家松陈穗君中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室中山大学中山医学院附属第一医院针灸科广州510080

目的探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生的影响。方法将对照组、神经干细胞移植组、督脉电针组和督脉电针+神经干细胞移植组的成年大鼠胸10脊髓段做全横断损伤;其中神经干细胞移植组... 详细信息

目的探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生的影响。方法将对照组、神经干细胞移植组、督脉电针组和督脉电针+神经干细胞移植组的成年大鼠胸10脊髓段做全横断损伤;其中神经干细胞移植组和电针神经干细胞组在损伤处移植神经干细胞。电针组和电针神经干细胞移植组在术后开始接受督脉电针治疗。所有动物存活67d。结果1.电针神经干细胞移植组脊髓损伤处的去甲肾上腺素能5、_羟色胺受体、降钙素基因相关肽能和生长相关蛋白-43阳性染色的4种神经纤维均明显多于其他几组。2.电镜下可观察到脊髓横断处有再生的神经纤维穿越,在电针神经干细胞移植组尤为明显。3.大脑体感运动区皮质和中脑红核受损伤的神经元存活数量也多于其他几组,一些神经元的再生神经纤维可能穿越横断处,进入尾端脊髓组织。结论督脉电针与神经干细胞移植联合应用能促进脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生。

关键词：督脉电针神经干细胞移植脊髓损伤神经元存活神经纤维再生免疫细胞化学大鼠

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一种快速、经济、省时的施万细胞体外培养和纯化方法

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解剖学报 2007年第5期38卷 628-630页

作者：张雪宝曾园山陈穗君中山大学中山医学院组织学胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的探讨一种快速、简单、经济的施万细胞(SCs)培养和纯化方法,为SCs体内移植研究提供稳定及可靠的细胞来源。方法选用SD乳鼠,取坐骨神经和臂丛神经,用单细胞双酶消化法和半植块单酶消化法培养SCs。结果用同样多的组织材料,半植块单酶... 详细信息

目的探讨一种快速、简单、经济的施万细胞(SCs)培养和纯化方法,为SCs体内移植研究提供稳定及可靠的细胞来源。方法选用SD乳鼠,取坐骨神经和臂丛神经,用单细胞双酶消化法和半植块单酶消化法培养SCs。结果用同样多的组织材料,半植块单酶消化法所获得的SCs比单细胞双酶消化法所获细胞至少多两倍,省时40min。免疫组织化学染色显示,获得的施万细胞96%以上呈S-100阳性。结论用半植块单酶消化法培养SCs,可以在短时间内获得足够数量和足够纯度的SCs。

关键词：施万细胞细胞培养单酶消化法大鼠

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灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

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中国中西医结合杂志 2004年第S1期24卷 65-68页

作者：丁英曾园山马钦桃陈穗君中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广州510080

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg... 详细信息

目的探讨灵芝孢子对大鼠受损伤的脊髓自身神经干细胞增殖和分化的影响。方法将成年SD 大鼠随机分成损伤不用药组和损伤用药组。对两组动物 T12脊髓段施行右侧半横断后,在其腹腔内注射溴脱氧尿嘧啶(5’-Bromo-2’-deoxyuridine,BrdU 50mg/kg),每天2次,连续注射10天。损伤用药组动物胃饲灵芝孢子。在脊髓损伤后2周和4周,用免疫荧光组织化学法检测两组动物脊髓中央管室管膜细胞的 BrdU、nestin、neurofilament(NF)、oligodendrocyte specific protein 和 glial fibrillary acidic protein(GFAP)标记物,并分析其增殖和分化情况。结果损伤用药组大鼠脊髓室管膜细胞 BrdU 阳性染色数量[(45.67±3.62)个]高于损伤不用药组[(29.91±3.68)个]。在脊髓白质中,有些 BrdU 阳性细胞同时表达 oligodendrocyte specific protein 或nestin 或 NF 或 GFAP。结论灵芝孢子能够促进大鼠受损伤脊髓中央管室管膜细胞增殖,少数增殖后的细胞能分化为神经干细胞、神经元样细胞、少突胶质样细胞和星形胶质样细胞。

关键词：灵芝孢子脊髓损伤室管膜细胞增殖神经干细胞分化大鼠

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灵芝孢子能够调节妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质的水平

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中西医结合学报 2007年第3期5卷 322-327页

作者：程进军曾园山熊轶张伟陈穗君钟志强中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广东广州510080

目的:探讨灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质的影响。方法:用一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N硝基左旋精氨酸甲酯(Nw-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)给予大鼠腹腔注射制备妊高征模型,在此基... 详细信息

目的:探讨灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质的影响。方法:用一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N硝基左旋精氨酸甲酯(Nw-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)给予大鼠腹腔注射制备妊高征模型,在此基础上胃饲灵芝孢子。应用cAMP放免法、RT-PCR、酶活力检测等技术评价灵芝孢子对妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的影响。结果:妊高征孕鼠的刚分娩幼鼠海马cAMP水平、线粒体DNA(mtDNA)水平及ATP合酶活力都降低。pgc1α表达水平与正常对照大鼠比较没有变化。生后30 d的幼鼠海马cAMP水平、mtDNA水平、ATP合酶活力和pgc1α表达水平低于正常对照大鼠。胃饲灵芝孢子后,妊高征大鼠的刚分娩幼鼠和生后30 d的幼鼠海马cAMP水平和mtDNA含量恢复到正常对照大鼠水平,ATP合酶活力和pgc1α表达水平也有恢复性增高。结论:灵芝孢子具有调节妊高征大鼠所生幼鼠海马线粒体相关分子物质水平的作用。

关键词：大鼠灵芝孢子妊娠高血压海马线粒体线粒体DNA

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预先服用灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形发生率

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中西医结合学报 2006年第4期4卷 368-373页

作者：张伟曾园山熊轶陈穗君钟志强中山大学中山医学院组织胚胎学教研室神经科学研究室广东广州510080

目的探讨预先服用灵芝孢子能否降低维甲酸诱导的胚胎神经管畸形的发生率。方法将胚胎(embryo,E)0d孕鼠随机分为正常对照组、溶剂组、模型组和灵芝孢子组,每组5只。灵芝孢子组孕鼠于E0d起即给予胃饲灵芝孢子溶液,溶剂组孕鼠胃饲等量溶剂... 详细信息

目的探讨预先服用灵芝孢子能否降低维甲酸诱导的胚胎神经管畸形的发生率。方法将胚胎(embryo,E)0d孕鼠随机分为正常对照组、溶剂组、模型组和灵芝孢子组,每组5只。灵芝孢子组孕鼠于E0d起即给予胃饲灵芝孢子溶液,溶剂组孕鼠胃饲等量溶剂。至E7.75d时,模型组和灵芝孢子组孕鼠一次性胃饲全反式维甲酸。E10.5d时取孕鼠胚胎,计算神经管畸形发生率及测量胚胎顶臀距。采用免疫荧光组织化学染色和流式细胞术检测胚胎神经管神经上皮细胞巢蛋白的表达及细胞周期分布,采用DNA定量荧光染色及RT-PCR技术检测胚胎神经管细胞周期素依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependentkinase2,Cdk2)和Cdk4mRNA的转录水平。结果孕鼠胚胎神经管畸形发生率模型组为79.41%,灵芝孢子组为21.67%;顶臀距模型组为(3.62±1.27)mm,灵芝孢子组为(5.84±0.92)mm。胚胎神经管神经上皮细胞巢蛋白表达阳性率模型组为32.44%,灵芝孢子组为77.65%。模型组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞G0/G1期比例为82.80%,灵芝孢子组为53.74%。灵芝孢子组Cdk4mRNA转录水平高于正常对照组和溶剂组,但未检测到Cdk2mRNA。结论预先服用灵芝孢子能够降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生率。

关键词：神经管畸形灵芝孢子维甲酸巢蛋白细胞周期素依赖性蛋白激酶

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