检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病杂志 2005年第4期21卷 283-287页

作者：申川军何蔼郑小英余南郑斌郑焕钦李卓雅曹爱莲詹希美中山大学基础医学院寄生虫学教研室广州510089

目的　克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法　根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,... 详细信息

目的　克隆弓形虫核仁G蛋白- 1(NOG1)基因的全长cDNA序列。方法　根据NCBIGeneBank中登录的弓形虫NOG1基因的唯一EST序列设计引物,利用cDNA 5’-末端快速扩增法(5’-RACE)和cDNA 3’-末端快速扩增法(3’-RACE)分别对已知序列进行延伸,将扩增获得的3’-端和5’-端未知序列与位于中间位置的已知序列进行拼接,然后经Blast检验全长序列的正确性。结果　5’-RACE扩增获得3个不同长度的片断,最长片断全长12 87bp ,去除引物和夹杂的已知序列后,通过5’-RACE在5’端扩增获得未知序列为1196bp。3’-RACE扩增后得到一条特异性条带,位于大约1.7kb左右,测序全长为16 34bp ,去除引物和已知序列,经3’-RACE扩增获得的3’-端未知序列为12 0 4bp。Blast全长为316 7bp的3段拼接序列,发现其覆盖NOG1基因cDNA的完整ORF或者CDS序列(6 5 0bp 2 80 9bp)。推导翻译出的蛋白质一级结构包含719个氨基酸(aa) ,在所有已发现物种的NOG1中,弓形虫NOG1基因的cDNA和相应的aa序列都是最长的。该序列已登录NCBIGeneBank ,核酸序列登录号AY6 86 734,对应蛋白质的aa序列登录号为AAT94 2 90。结论　本研究首次克隆获得了弓形虫NOG1基因的全长cDNA序列,并对相应的aa序列进行了推导翻译和简单分析。

关键词：弓形虫核仁G蛋白-1 cDNA末端快速扩增技术克隆

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不同分离株弓形虫hsp70基因体外扩增及其酶切分析

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中国人兽共患病杂志 2004年第3期20卷 199-202页

作者：李华文陈观今郑焕钦中山大学基础医学院病原生物学教研室广州510089

目的　不同分离株弓形虫hsp70基因的比较 ;运用限制性内切酶分析 (PRA)建立一种简单的虫株鉴定方法。方法　采用PCR技术扩增hsp70基因 ;采用 3种限制性内切酶Bsp12 86Ⅰ、BstXⅠ、MboⅠ分别对该基因进行酶切比较。结果　从 5种不同分... 详细信息

目的　不同分离株弓形虫hsp70基因的比较 ;运用限制性内切酶分析 (PRA)建立一种简单的虫株鉴定方法。方法　采用PCR技术扩增hsp70基因 ;采用 3种限制性内切酶Bsp12 86Ⅰ、BstXⅠ、MboⅠ分别对该基因进行酶切比较。结果　从 5种不同分离株的弓形虫基因组DNA中扩增出相似的约 2 0 2 2bp的完整HSP70基因阅读框序列 ;Bsp12 86Ⅰ酶切 5株弓形虫有 2组不同酶谱 ,而BstXⅠ、MboⅠ酶切的片段各株间没有差异。结论　 5种不同分离株弓形虫的hsp70基因片段大小基本相同 ;但酶切图谱有差异 ,这可以为虫株鉴定和毒力研究提供参考。

关键词：弓形虫 hsp70基因体外扩增酶切分析毒力

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华支睾吸虫一个谷胱甘肽转移酶新基因的克隆与表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第6期20卷 489-491页

作者：伍忠銮余新炳吴德徐劲吴忠道胡旭初中山大学基础医学院寄生虫学教研室广州510089

目的克隆华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase,GST)的一个新基因,并在大肠杆菌中表达。方法用PCR方法从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库中扩增新基因CsGST1,对DNA及其推导的氨基酸进行序列分析。... 详细信息

目的克隆华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase,GST)的一个新基因,并在大肠杆菌中表达。方法用PCR方法从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库中扩增新基因CsGST1,对DNA及其推导的氨基酸进行序列分析。将CsGST1克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,用SDS-PAGE鉴定重组蛋白。结果从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库扩增出642 bp的CsGSTl,序列分析显示它所编码的氨基酸序列与麝猫后睾吸虫GST的同源性最高(88％),并具有GST N-末端和C-末端的保守功能域。构建了重组质粒pET-30a(+)-CsGST1,SDS-PAGE显示CsGST1在大肠杆菌中得到了高效表达,pET-30a(+)-CsGST1的蛋白条带的分子量约为30 kDa。结论成功构建了CsGST1的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究该基因的功能打下了基础。

关键词：华支睾吸虫谷胱甘肽转移酶克隆表达

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ES源性表皮干细胞在腹腔微环境中分化潜能的初步研究

ES源性表皮干细胞在腹腔微环境中分化潜能的初步研究

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中国实验动物学会第六届学术年会

作者：程树军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组胚教研室中山大学基础医学院组胚教研室中山大学基础医学院组胚教研室

目的探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础。方法小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,它们呈β... 详细信息

目的探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础。方法小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,它们呈β1整合素、CK15和CK19阳性。无菌手术下移植入裸鼠腹腔。每周取材,连续9周。对移植后细胞的分化情况进行形态学和CEA、CK1、CK18、CK19免疫组织化学观察。结果小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠腹腔内1～4周,细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构。种植5周后,除上述结构外,可见角化复层扁平上皮、毛囊样、汗腺样及皮脂腺样等结构。免疫组化的结果表明汗腺样结构分别呈CEA和CK18阳性,而角化复层扁平上皮的基底层细胞分别呈CK19和CK10阳性。结论初步研究结果表明小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在腹腔微环境下,同样具有分化为角化复层上皮、毛囊样、汗腺样和皮脂腺样结构的潜能。

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞定向分化

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铝佐剂Aβ_(42)及其亚单位疫苗可有效诱导大鼠产生特异性抗体

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第1期25卷 39-44页

作者：胡金家汪华侨林贤曲怀刚徐杰姚志彬中山大学基础医学院解剖学教研室脑研究室广东广州510080

[目的]探讨铝佐剂AB42及其C端亚单位肽Aβ36-42疫苗接种大鼠能否产生特异性抗Aβ42抗体。[方法]24只SD大鼠随机分为Aβ42肽疫苗、Aβ36-42肽疫苗和对照组,每组8只。将Aβ42肽疫苗及Aβ36-42与七聚赖氨酸耦联制成的亚单位疫苗分别接种于S... 详细信息

[目的]探讨铝佐剂AB42及其C端亚单位肽Aβ36-42疫苗接种大鼠能否产生特异性抗Aβ42抗体。[方法]24只SD大鼠随机分为Aβ42肽疫苗、Aβ36-42肽疫苗和对照组,每组8只。将Aβ42肽疫苗及Aβ36-42与七聚赖氨酸耦联制成的亚单位疫苗分别接种于SD大鼠,对照组用等体积PBS加铝佐剂。用间接ELISA法检测大鼠血清和脑匀浆上清液中特异性抗体的滴度;用Morris水迷宫测试大鼠的行为学变化;用HE染色观察大鼠的脑、肝、脾和肾组织学变化;用接种后血清与老年性痴呆患者的脑片作免疫组织化学染色。[结果]第3次接种后ABβ42和Aβ36-42组鼠的血清均开始有抗Aβ42抗体产生,抗体滴度随接种次数的增多而增高,第6次接种后两组鼠血清的抗ABβ42抗体滴度均达到1:1 600以上,同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗Aβ42抗体,血和脑匀浆的抗体滴度与对照组相比,差异有显著性(P<0.01);对照组、Aβ42组和Aβ36-42组鼠逃避潜伏期分别为54.81±17.06、43.18±18.70和52.27±15.13,差异均无显著性(P>0.05);对照组、Aβ42组和Aβ36-42组鼠平台象限游泳距离占总游泳距离百分比分别为59.78±5.68、65.14±4.98和61.34±4.19,各组间差异也无显著性(P>0.05);3组鼠的脑、肝、脾和肾均未出现病理性变化;Aβ42组鼠的血清能结合AD患者脑组织中的老年斑,?

关键词： 13-淀粉样蛋白疫苗铝佐剂老年斑老年性痴呆

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ER和PRmRNAs在内异症子宫内膜表达的变化

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中国应用生理学杂志 2004年第2期20卷 194-196页

作者：郑辉李洪义王自能柏志全卢晓晔暨南大学医学院生理教研室广东广州510632 中山大学中山医学院广东广州510089 暨南大学医学院妇产科教研室广东广州510632 暨南大学医学院组胚教研室广东广州510632

目的 :探讨雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)在子宫内膜异位症 (内异症 )子宫内膜的表达。方法 :利用大鼠内异症动物模型 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测子宫内膜ER和PRmRNAs的表达情况。结果 :内异症模型组大鼠异位内膜E... 详细信息

目的 :探讨雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)在子宫内膜异位症 (内异症 )子宫内膜的表达。方法 :利用大鼠内异症动物模型 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测子宫内膜ER和PRmRNAs的表达情况。结果 :内异症模型组大鼠异位内膜ER、PRmRNAs的表达低于在位内膜和对照组正常子宫内膜 ,与后两者比较差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ;而模型组在位内膜ER、PRmRNAs的表达与正常对照组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。内异症模型组异位内膜ER/PRmRNA比值大于在位内膜和正常子宫内膜ER/PRmRNA比值 (P <0 .0 1)。结论 :内异症大鼠异位内膜ERmRNA表达的相对增高在内异症的发生与发展中起着一定的作用。

关键词：子宫内膜异位症子宫内膜雌激素受体孕激素受体 mRNA ER PR

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日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)结构与功能的生物信息学分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第3期25卷 202-205页

作者：吕刚余新炳黄灿徐劲吴忠道陈守义胡旭初海南医学院寄生虫学教研室海口571101 中山大学基础医学院寄生虫学教研室广州510089

目的应用生物信息学分析软件预测日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及Vector NTI、PCgene等软件包分析SjLDH与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对,分析相同的保守位点... 详细信息

目的应用生物信息学分析软件预测日本血吸虫乳酸脱氢酶(SjLDH)氨基酸序列的结构与功能。方法应用NCBI、Expasy等在线生物信息学网站及Vector NTI、PCgene等软件包分析SjLDH与其他物种的同源序列,进行多序列同源比对,分析相同的保守位点及催化活性位点,构建分子进化树;预测二级结构、拓扑结构;同源模建预测三级结构;预测主要抗原表位等。结果SjLDH与其他物种的同源序列含相同的保守位点及催化活性位点,与华支睾吸虫LDH(CsLDH)同源性最高为75%,与阴道毛滴虫LDH(TvLDH)同源性最低为17%,与人LDH(HsLDH-A,-B,-C)的同源性为58%～60%;SjLDH与果蝇(DmLDH)的进化距离较秀丽隐杆线虫(CeLDH)为近,3种人LDH中与HsLDH-B、-C的进化距离较HsLDH-A为近;该蛋白具有3个跨膜区域,3个高亲水性区域,主要的线性表位98aa￣106aa位于膜外,与原虫LDH相同区域差异显著,而与其他LDH有1～3个氨基酸的差异,关键催化位点之一及底物丙酮酸结合区域位于该区域,蛋白质同源模建分析表明该区域位于蛋白表面形成环状结构,3个关键催化位点位于该区域或在其附近。结论生物信息学预测结果提示LDH是研究物种分子进化理想的分子;SjLDH可能是免疫诊断、药物作用及疫苗潜在的靶分子。

关键词：日本血吸虫乳酸脱氢酶生物信息学结构功能

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普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的抑制作用(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2006年第5期20卷 361-366页

作者：孙林光黄奕俊苏兴文孔天翰邱鹏新颜光美中山大学基础医学院药理学教研室广东广州510089 广州医学院蛇毒研究所广东广州510182

目的观察普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的保护作用。方法建立大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡模型，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记，Hoeehst 33258核染色，琼脂糖凝胶电泳以及醋酸荧光素染色等方法，根据... 详细信息

目的观察普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的保护作用。方法建立大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡模型，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记，Hoeehst 33258核染色，琼脂糖凝胶电泳以及醋酸荧光素染色等方法，根据细胞凋亡的形态学及生物化学等特征，分析普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡的影响。结果大鼠小脑颗粒神经元与普卡霉素预孵育1h及持续作用下，普卡霉素浓度依赖性地抑制低钾诱导24h所致的大鼠小脑颗粒神经元凋亡，其有效浓度在50～200nmol·L^-1之间，普卡霉素浓度为200nmol·L^-1时达到的最大凋亡抑制率约为80％。结论普卡霉素对大鼠小脑颗粒神经元低钾性凋亡具有较强的抑制作用。

关键词：小脑神经元钾细胞凋亡普卡霉素

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棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第5期25卷 401-405页

作者：吕刚胡旭初黄灿谢红艳徐劲陈守义吴忠道余新炳海南医学院寄生虫学教研室海口571101 中山大学基础医学院寄生虫学教研室广州510089

目的检测棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶(rSjLDH)活性的影响。方法在已建立的rSjLDH标准酶活性测定体系中分别加入不同浓度的棉子酚(0～0.10mmol/L)、吡喹酮(0～0.20mmol/L)及蒿甲醚(0～0.10mmol/L),以相应药物溶剂... 详细信息

目的检测棉子酚、吡喹酮、蒿甲醚对重组日本血吸虫乳酸脱氢酶(rSjLDH)活性的影响。方法在已建立的rSjLDH标准酶活性测定体系中分别加入不同浓度的棉子酚(0～0.10mmol/L)、吡喹酮(0～0.20mmol/L)及蒿甲醚(0～0.10mmol/L),以相应药物溶剂作对照,分光光度法测定药物对rSjLDH活性的影响。用SPSS13.0软件统计结果,计算药物对酶活性的相对抑制率。结果与对照组比较,0.04mmol/L棉子酚对rSjLDH催化丙酮酸还原为乳酸及乳酸氧化为丙酮酸的相对抑制率分别为59.1%和34.4%(P<0.01),0.10mmol/L棉子酚分别为91.3%和89.1%(P<0.01);0.06mmol/L吡喹酮分别为5.77%和41.4%(P<0.05),0.20mmol/L吡喹酮分别为83.8%和72.2%(P<0.01)。0.10mmol/L蒿甲醚对rSjLDH则无抑制作用(P>0.05)。结论棉子酚及吡喹酮对rSjLDH活性均有显著的抑制作用,SjLDH可能是吡喹酮的分子靶标之一。

关键词：日本血吸虫乳酸脱氢酶重组蛋白棉子酚吡喹酮蒿甲醚

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大鼠DRG内ClC-3敲减导致的TNF-α/IL-10失衡对电压门控性钠通道表达和机械痛敏的影响

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中国病理生理杂志 2020年第7期36卷 1153-1160页

作者：汪小芳何苏月马卓琳杨杰庞瑞萍中山大学中山医学院生理学教研室中山大学疼痛研究中心广东广州510080 暨南大学基础医学院生理学系广东广州510632

目的:研究敲减大鼠背根神经节(DRG)内ClC-3氯通道/反向转运体对神经元电压门控性钠通道表达和大鼠机械痛敏的影响及机制。方法:成年SD大鼠鞘内注射ClC-3 shRNA腺相关病毒(AAV-ClC-3 shRNA)以敲减DRG内ClC-3的表达,RT-qPCR、免疫荧光染色... 详细信息

目的:研究敲减大鼠背根神经节(DRG)内ClC-3氯通道/反向转运体对神经元电压门控性钠通道表达和大鼠机械痛敏的影响及机制。方法:成年SD大鼠鞘内注射ClC-3 shRNA腺相关病毒(AAV-ClC-3 shRNA)以敲减DRG内ClC-3的表达,RT-qPCR、免疫荧光染色和Western blot从mRNA和蛋白水平检测ClC-3、细胞因子和电压门控性钠通道表达的变化,用up-down方法检测机械痛敏。结果:鞘内注射AAV-ClC-3 shRNA后DRG组织ClC-3的表达下调,大鼠出现机械触诱发痛。敲减DRG组织ClC-3的表达可致电压门控性钠通道Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8和Nav1.9的表达增加。敲减DRG组织ClC-3的表达可提高肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,降低白细胞介素10(IL-10)水平。结论:大鼠DRG内ClC-3下调导致TNF-α/IL-10失衡,进而增加电压门控性钠通道Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8和Nav1.9表达,增强神经组织兴奋性,最终导致机械痛敏。

关键词：神经病理性疼痛 ClC-3通道背根神经节肿瘤坏死因子α 白细胞介素10 电压门控性钠通道机械痛敏

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