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SARS-CoV S DNA疫苗诱导特异性T细胞及相关细胞因子的特性研究

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第11期25卷 940-943页

作者：黄俊马瑞吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广州510080

目的小鼠经皮下SARS-CoVS DNA疫苗免疫后,研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性。方法SARS-CoVS DNA疫苗免疫BALBPc小鼠后,获取淋巴细胞悬液。经S抗原多肽刺激后,采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,利用流式细胞仪在单个细... 详细信息

目的小鼠经皮下SARS-CoVS DNA疫苗免疫后,研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性。方法SARS-CoVS DNA疫苗免疫BALBPc小鼠后,获取淋巴细胞悬液。经S抗原多肽刺激后,采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平,利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果当S混合多肽刺激后,DNA疫苗免疫小鼠的淋巴细胞产生大量的IFN-γ,与对照鼠相比差异有统计学意义(P<0.01)。细胞亚群分析的结果表明,IFN-γ+和IL-2+的CD4+T细胞百分率明显高于CD8+T细胞。单独产生IL-2的细胞占大多数,其次为IFN-γ和IL22双阳性细胞,只产生IFN-γ的细胞很少。结论SARS-CoVS DNA疫苗免疫小鼠后可以诱导抗原特异性CD4+和CD8+T细胞的产生。

关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) DNA疫苗 S抗原多肽细胞因子 T细胞

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Caveolin-1蛋白在17β-雌二醇抑制内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

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生理学报 2004年第3期56卷 379-383页

作者：谈智林桂平王庭槐中山大学基础医学院生理学教研室广州510089

本工作旨在研究Caveolin-1在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2)抑制内皮素-1（endothelin-1,ET-1)诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs前后ET-1对DNA合成和caveolin-1蛋白表达的影响。结果显示，ET-1可以刺激VSMCs增殖。E2作用24h后，可明显抑制ET-1的上述作用。免疫荧光证实，在VSMCs上有cavellin-1分布，ET-1刺激VSMCs增殖的过程中，VSMCs上caveolin-1蛋白荧光强度下，而事称给予E2可逆转这种下降。Western bolt证实，ET-1可抑制caveolin-1蛋白的表达而E2则可增加caveolin-1蛋白的表达。以上结果表明E2抑制ET-1诱导的VSMCs增殖可能与其增加caveolin-1蛋白表达有关。

关键词： caveolin-1蛋白细胞质膜微囊内皮素血管平滑肌细胞 17β-雌二醇

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转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长和化疗敏感性的影响

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中华病理学杂志 2005年第11期34卷 737-741页

作者：顾霞林汉良邵建永张萌朱有凯梁惠珍马怡晖中山大学基础医学院病理教研室中山大学基础医学院肿瘤防治中心病理科广州510089

目的研究转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长的影响以及转染后淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法构建survivin反义mRNA真核表达质粒pcDNA3.1反义(As)survivin;利用脂质体转染法将其转入高表达survivinmRNAT淋巴母细胞淋巴瘤J... 详细信息

目的研究转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长的影响以及转染后淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法构建survivin反义mRNA真核表达质粒pcDNA3.1反义(As)survivin;利用脂质体转染法将其转入高表达survivinmRNAT淋巴母细胞淋巴瘤Jurkat细胞系,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组织化学SP法、Western印迹法检测细胞中survivin表达;用细胞计数、流式细胞术(FCM)检测其细胞生长曲线、细胞凋亡指数,并进行光镜、电镜形态学观察;并对转染pcDNA3.1Assurvivin前后Jurkat细胞分别加入4羟基环磷酰胺(CTX)、甲氨蝶呤(MTX)72h后,常规MTT检测细胞存活率。结果RTPCR检测转染pcDNA3.1Assurvivin后48h、5和6周Jurkat细胞survivinmRNA表达,发现survivinmRNA表达皆低于对照组;转染后survivin蛋白表达也明显降低。转染pcDNA3.1Assurvivin后Jurkat细胞生长倍增时间(52h)明显延长;用FCM检测细胞凋亡发现,转染pcDNA3.1Assurvivin后Jurkat细胞凋亡指数[20.2%(48h)]明显高于对照组(转染空质粒和未转染组,2.1%和1.3%);5和6周为6.2%和6.8%,明显高于未转染细胞(1.3%和1.0%)。光镜、电镜观察见转染细胞出现较多凋亡细胞及一些变性肿胀细胞;MTT检测结果显示Jurkat细胞转染前后,经化疗药物4羟基环磷酰胺和甲氨蝶呤作用,转染细胞的抑制率明显大于未转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因对Jurkat细胞系的生长起着重要的作用,抑制survivin基因表达在T淋巴母细胞淋巴瘤治疗中可能有重要的意义,该基因似可能作为治疗的靶点。

关键词：淋巴瘤药物筛选试验,抗肿瘤转染 RNA,反义基因,survivin

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MSCs构建的类真皮对ES细胞源性表皮干细胞分化潜势的影响

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基础医学与临床 2007年第7期27卷 753-757页

作者：刘爱军黄锦桃李海标广州中医药大学组胚教研室广东广州510405 中山大学基础医学院组胚教研室广东广州510080

目的探讨以MSCs构建类真皮对ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的影响。方法大鼠骨髓MSCs与复合凝胶-明胶海绵组成类真皮,Hoechst33342标记E14-ES细胞,经羊膜诱导4 d后,形成表皮干细胞克隆,将二者构成皮肤类似物,埋植于129小鼠皮下。术后2、... 详细信息

目的探讨以MSCs构建类真皮对ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的影响。方法大鼠骨髓MSCs与复合凝胶-明胶海绵组成类真皮,Hoechst33342标记E14-ES细胞,经羊膜诱导4 d后,形成表皮干细胞克隆,将二者构成皮肤类似物,埋植于129小鼠皮下。术后2、4、6和8周取材,做HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CEA、CK18免疫荧光双标和免疫组化观察。结果术后2和4周,植块中以形成单层立方或柱状上皮构成的管状和泡状结构为主,6和8周后,可见角化复层上皮、毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构,皮脂腺样结构多见。免疫双标结果显示,植入2和4周,带有蓝色核标记的细胞形成的管状或泡状结构,呈β1整合素、CK15、CK19、CEA和CK18阳性,6和8周后,HE染色汗腺样结构呈CEA、CK18阳性。结论ES细胞源性表皮干细胞与骨髓MSCs构建的类真皮,在同种小鼠皮下可分化出角化复层上皮、汗腺样、毛囊样、皮脂腺样等结构。

关键词： ES细胞表皮干细胞皮肤附属结构定向分化

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应用变性高效液相色谱技术筛查广东汉族及壮族G6PD基因变异型(英文)

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中华医学遗传学杂志 2005年第6期22卷 607-611页

作者：蒋玮莹陈路明林群娣耿茜杜传书中山大学基础医学院医学遗传学教研室广州510089

目的建立变性高效液相色谱筛查G6PD基因变异的技术。观察广东汉族和壮族G6PD基因变异型的分布。方法应用变性高效液相色谱技术筛查广东汉族和壮族G6PD基因变异型。与ARMS及DNA测序比较,考察其准确性、灵敏度、效率及耗资。结果在73例G6P... 详细信息

目的建立变性高效液相色谱筛查G6PD基因变异的技术。观察广东汉族和壮族G6PD基因变异型的分布。方法应用变性高效液相色谱技术筛查广东汉族和壮族G6PD基因变异型。与ARMS及DNA测序比较,考察其准确性、灵敏度、效率及耗资。结果在73例G6PD缺陷者中发现G6PD1388G→A20例、1376G→T24例、95A→G6例、1311C→T8例、1024C→T3例、392G→T2例、871G→A1例、1376G→A/95A→G4例、1388G→A/95A→G3例、1311C→T/95A→G2例,与DNA测序结果吻合;在酶学正常对照组中发现男1例女2例1388突变。结论变性高效液相色谱技术对G6PD基因变异型的筛查具有准确、高效、半自动化及经济等优点。尤其对无症状女性杂合子及临床Ⅳ型个体的筛查具有重要意义。

关键词：葡糖磷酸脱氢酶变性高效液相色谱杂合子

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粘多糖贮积症Ⅱ型IDS基因的1343-TT新突变

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中华儿科杂志 2006年第2期44卷 110-113页

作者：郭奕斌杜传书中山大学基础医学院医学遗传学教研室广州510080

目的研究中国粘多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)的基因突变,为产前基因诊断打下基础。方法应用尿粘多糖含量检测、聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)对1例MPSⅡ患儿及其父母的IDS基因的突变热点exons 9,3,8,进行... 详细信息

目的研究中国粘多糖贮积症Ⅱ型(MPSⅡ)艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)的基因突变,为产前基因诊断打下基础。方法应用尿粘多糖含量检测、聚合酶链反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)对1例MPSⅡ患儿及其父母的IDS基因的突变热点exons 9,3,8,进行突变检测,并对PCR-DHPLC检出的突变样品进行直接测序。结果经PCR-DHPLC分析,发现患儿的IDS基因exon 9有明显异常峰形;DNA序列分析进一步发现,患儿IDS基因的exon 9发生1343-TT新移码突变,突变部位在第407位密码子(TTT)内,即IDS基因cDNA第1343 bp的T后缺失了2个T,并在第429位提前遇上终止密码TGA,导致肽链从550个氨基酸缩短至428个。患儿为这一突变的半合子,而其母为这一突变的杂合子。结论新发现的移码突变(1343-TT)导致肽链比正常的少了122个氨基酸,极可能引起酶活性大大降低,因此可能是该MPSⅡ患儿发病的真正原因。

关键词：粘多糖贮积症Ⅱ型艾杜糖醛酸硫酸酯酶突变聚合酶链反应色谱法,高压液相序列分析,DNA

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Toll样配体(R-848)与IL-12对人NK细胞亚群IFN-γ产生的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第7期23卷 623-626页

作者：尹凌凡范艳莹李丽吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广东广州510080

目的:研究Toll样配体(R-848)与IL-12对人NK细胞IFN-γ产生的作用和细胞亚群分析。方法:分离人外周血PBMC和纯化的NK细胞,分别与R-848、IL-12或R-848和IL-12共同培养。利用ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平,再利用流式检测并分析产生I... 详细信息

目的:研究Toll样配体(R-848)与IL-12对人NK细胞IFN-γ产生的作用和细胞亚群分析。方法:分离人外周血PBMC和纯化的NK细胞,分别与R-848、IL-12或R-848和IL-12共同培养。利用ELISA法检测培养上清中IFN-γ的水平,再利用流式检测并分析产生IFN-γ的NK细胞亚群。结果:正常人PBMC分别与不同浓度的Toll样配体R-848、LPS、CpG培养后,均以剂量依赖的方式诱导IFN-γ的产生,但以R-848的效果最佳。细胞亚群分析的结果表明,R-848对CD4+T和CD8+T细胞IFN-γ的表达无明显作用,但显著地促进CD56+细胞表达IFN-γ。同样地,在IL-12刺激之下,CD56bright和CD56dimNK细胞表达IFN-γ。当R-848和IL-12与PBMC和纯化NK细胞孵育后,对CD56bright和CD56dimNK细胞IFN-γ的表达具有协同作用。结论:Toll样配体与NK细胞Toll样受体结合后,促进CD56brightNK细胞亚群IFN-γ的产生,而且Toll样配体与IL-12具有协同作用,提示Toll样受体与细胞因子在调控NK细胞的生物活性中发挥着十分重要的作用。

关键词： Toll样受体/配体 NK细胞细胞因子

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STAT3特异性小干扰RNA表达载体的构建及其对STAT3表达的抑制

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肿瘤 2005年第1期25卷 37-40页

作者：吴健王方金何蕴韶中山大学基础医学院人体解剖教研室

目的　构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法　设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构... 详细信息

目的　构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法　设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果　经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论　运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。

关键词： RNA,小干扰转录激活因子3 细胞系,肿瘤 PC-3细胞

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CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4^+ T细胞相关性的探讨

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第6期23卷 491-494页

作者：李丽吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广东广州510080

目的:探讨CD154+细胞的表型特征与初始和记忆CD4+ T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3+抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用... 详细信息

目的:探讨CD154+细胞的表型特征与初始和记忆CD4+ T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3+抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4+ T细胞,而不表达于CD8+T细胞。对比分析CD4+CD154+ T和CD4+CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4+CD154+ T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3+抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4+ T细胞均为CD4+CD154+ T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4+CD154+ T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4+ T细胞。

关键词： CD4^+T细胞 CD154 记忆T细胞细胞因子

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ES细胞源性表皮干细胞分化潜能的研究

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广东医学 2006年第8期27卷 1139-1141页

作者：刘爱军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组胚教研室现在广州中医药大学组胚教研室(广州510405)

目的探讨人羊膜诱导的ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内的分化,研究其在不同微环境中的分化潜能和稳定性,为组织工程皮肤寻找新的种子细胞奠定基础。方法Hoechst33342标记129小鼠E14胚胎干细胞,与人羊膜共培养4d,定向诱导其分化为的表皮... 详细信息

目的探讨人羊膜诱导的ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内的分化,研究其在不同微环境中的分化潜能和稳定性,为组织工程皮肤寻找新的种子细胞奠定基础。方法Hoechst33342标记129小鼠E14胚胎干细胞,与人羊膜共培养4d,定向诱导其分化为的表皮干细胞克隆,诱导后的细胞移植入129小鼠肾被囊内,术后4,6和8周取材。对移植后细胞的分化进行形态学和免疫荧光双标CK19及CK18检测。结果ES细胞源性表皮干细胞在小鼠肾被囊内4周,分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构,种植6周和8周,除上述结构外,可见角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样等结构。管泡状结构免疫荧光双标染色呈CK19及CK18阳性。结论ES细胞源性表皮干细胞在肾被囊内,仍具有分化为角化复层上皮、汗腺样、皮脂腺样及毛囊样结构的潜能。

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞分化潜能羊膜肾被囊

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