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解剖学杂志 2005年第2期28卷 172-174,i003页

作者：朱建华郭开华袁群芳徐杰中山大学基础医学院解剖学教研室

目的:研究金雀异黄酮对去卵巢大鼠海马突触体素的影响,以探讨金雀异黄酮对女性更年期后中枢神经系统退行性变的作用机制。方法:用免疫组化结合图像分析的方法,测量分析去卵巢后不同时间点以及给予金雀异黄酮替代治疗后海马CA1～3区辐射... 详细信息

目的:研究金雀异黄酮对去卵巢大鼠海马突触体素的影响,以探讨金雀异黄酮对女性更年期后中枢神经系统退行性变的作用机制。方法:用免疫组化结合图像分析的方法,测量分析去卵巢后不同时间点以及给予金雀异黄酮替代治疗后海马CA1～3区辐射层和齿状回分子层突触体素免疫阳性产物的平均光密度变化。结果:去卵巢后大鼠CA1～3区辐射层和DG分子层突触体素免疫阳性产物的平均光密度值逐渐降低,4周后与假手术组和苯甲酸雌二醇组相比有显著差异;金雀异黄酮组治疗后海马突触体素免疫阳性产物平均光密度恢复。结论:金雀异黄酮能恢复去卵巢大鼠海马突触密度,延缓女性更年期后中枢神经系统的退行性变。

关键词：金雀异黄酮突触体素大鼠海马中枢神经系统平均光密度免疫阳性退行性变更年期后海马CA1 去卵巢大鼠作用机制图像分析免疫组化不同时间测量分析光密度值海马突触分子层治疗后产物齿状回二醇组苯甲酸

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反基因及反义寡核苷酸对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

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中华医学杂志 2008年第29期88卷 2073-2076页

作者：张勇马毅卢汉平周祥福谢瑶高锦辉梁昌盛中山大学附属第三医院核医学科广州510630 中山大学附属第三医院泌尿外科广州510630 中山大学附属第一医院器官移植中心中山大学基础医学院实验核医学教研室中山大学基础医学院人体解剖学教研室中山大学基础医学院实验基础医学实验教学中心

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸（TFO）和反义寡核苷酸（ASO）对人前列腺癌裸鼠移植瘤雄激素受体（AR）表达和肿瘤细胞生长的抑制作用。方法32只荷LNCaP-C4-2前列腺癌移植瘤裸鼠随机分成4组：TFO治疗组、ASO治疗组、序列对照寡核苷酸（SCO... 详细信息

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸（TFO）和反义寡核苷酸（ASO）对人前列腺癌裸鼠移植瘤雄激素受体（AR）表达和肿瘤细胞生长的抑制作用。方法32只荷LNCaP-C4-2前列腺癌移植瘤裸鼠随机分成4组：TFO治疗组、ASO治疗组、序列对照寡核苷酸（SCO）非特异性对照组和阴性对照组。采用瘤内注射给药，寡核苷酸用量25mg／kg，隔天给药1次，共14次。观察裸鼠体重和肿瘤体积变化。测量移植瘤重量计算抑瘤率，放射免疫分析法检测裸鼠血清前列腺特异抗原（PSA）水平，RT-PCR方法检测肿瘤组织AR mRNA表达，免疫组化和放射配基结合分析方法检测AR蛋白表达。结果TFO和ASO均能有效抑制移植瘤生长，抑瘤率分别为67．55％和41.06％，与对照组相比差异有统计学意义（均P〈0．01）。TFO组的瘤重和肿瘤组织AR表达水平显著低于ASO组（均P〈0．05），TFO组动物血清PSA水平[（6．6±1．0）ng／ml]也显著低于ASO组[（19．8±3．7）ng／ml，P〈0．05]。结论TFO对前列腺癌裸鼠移植瘤AR表达和肿瘤生长的抑制作用强于ASO，具有较好的抗前列腺癌应用前景。

关键词：前列腺肿瘤寡核苷酸类受体,雄激素

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人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌

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中山大学学报（医学科学版） 2006年第1期27卷 7-10,37页

作者：徐伟光王海军黄锦桃刘爱军李海标朱永红中山大学附属第一医院神经外科广东广州510080 中山大学基础医学院组胚教研室广东广州510080

目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复... 详细信息

目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growthhormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%,46%,96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01);培养液中均含有相应激素,且3种方法的激素分泌量没有统计学差异(P>0.05);腺瘤细胞分别呈GH,PRL阳性表达,成纤维细胞表达I型胶原。结论方法Ⅲ可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。

关键词：垂体腺瘤细胞培养生长激素泌乳素

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华支睾吸虫成虫RPEF基因的克隆和表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第12期20卷 1052-1057页

作者：张咏莉余新炳吴德吴忠道毕惠祥陈明志中山大学基础医学院寄生虫教研室广州510089

目的　构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子 (RPEF)基因重组质粒 ,分析其编码序列 ,并进行大肠杆菌原核重组表达和免疫鉴定。方法　根据RPEF基因已知序列设计一对引物 ,用常规PCR技术从华支睾吸虫质粒文库模板中扩增RPEF基因片段 ;... 详细信息

目的　构建华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子 (RPEF)基因重组质粒 ,分析其编码序列 ,并进行大肠杆菌原核重组表达和免疫鉴定。方法　根据RPEF基因已知序列设计一对引物 ,用常规PCR技术从华支睾吸虫质粒文库模板中扩增RPEF基因片段 ;将目的基因PCR产物和空质粒 pGEX 4T 1同时用BamHⅠ和SalⅠ限制性内切酶双酶切 ,纯化回收后建立连接反应并转化大肠杆菌BL2 1。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 RPEF双酶切、PCR、测序鉴定正确后在BL2 1中诱导表达 ,SDS PAGE电泳和Western blot方法鉴定其原核表达效果。结果　成功构建出RPEF基因原核重组质粒 pGEX 4T 1 RPEF。SDS PAGE分析显示RPEF基因在大肠杆菌BL2 1系统中得以高效表达 ,其融合蛋白分子量大约 4 5kD ,与理论值相符。Western blot的结果显示此RPEF融合蛋白可被山羊GST单抗所识别 ,融合蛋白具有GST免疫反应性。结论　筛选到华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子 (RPEF)基因 ,并成功构建原核表达载体及在E .coliBL2 1系统中高效表达。

关键词：华支睾吸虫 RPEF基因重组质粒克隆原核表达免疫印迹

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雄激素受体三螺旋形成寡核苷酸抗前列腺癌细胞增殖的研究

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中华核医学杂志 2005年第2期25卷 97-99页

作者：张勇陈维真谢瑶高锦辉中山大学附属第三医院核医学科广州510630 中山大学基础医学院解剖学教研室中山大学基础医学院实验核医学教研室

目的　探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法　针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺... 详细信息

目的　探讨反基因策略对雄激素受体(AR)表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法　针对AR基因2 4 4 7～2 4 6 1核苷酸序列设计并合成三螺旋形成寡核苷酸(TFO) ,经脂质体介导转染LN CaP前列腺癌细胞株,于转染后2 4、4 8、72h分别采用3H 胸腺嘧啶核苷(TdR)参入实验测定癌细胞增殖活性,用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测ARmRNA表达,用放射配基结合分析法(RBA)单点法检测AR蛋白质表达,并与反义寡核苷酸(ASON)相比较。结果　2 4、4 8、72hTFO组LNCaP细胞的AR表达水平明显低于ASON组(P <0 0 5 ) ,TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于ASON(P <0 0 5 )。结论　该TFO能有效抑制AR表达和前列腺癌细胞增殖。

关键词：前列腺癌细胞增殖三螺旋形成寡核苷酸雄激素受体逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 放射配基结合分析法前列腺癌细胞株 LNCaP细胞细胞增殖活性胸腺嘧啶核苷 mRNA表达反义寡核苷酸反基因策略脂质体介导蛋白质表达序列设计

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Th1细胞亚群和Th1记忆细胞在体内的功能和组织分布

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中国免疫学杂志 2004年第8期20卷 525-530页

作者：吴长有杨滨燕朱兆玲中山大学基础医学院免疫学教研室广州510089

目的 :检测抗原特异性Th1细胞亚群和记忆性Th1细胞在体内的功能和分布。方法 :抗原特异性Th1细胞在体外分化的不同时期 ,在单个细胞水平上同时检测细胞因子IL 2、IFN γ和IL 4的表达和细胞膜表面分子表达。将标记的初始CD4 + T细胞和Th... 详细信息

目的 :检测抗原特异性Th1细胞亚群和记忆性Th1细胞在体内的功能和分布。方法 :抗原特异性Th1细胞在体外分化的不同时期 ,在单个细胞水平上同时检测细胞因子IL 2、IFN γ和IL 4的表达和细胞膜表面分子表达。将标记的初始CD4 + T细胞和Th1细胞被动输给小鼠后 ,观察Th1记忆细胞在体内组织器官的分布和IFN γ的产生。结果 :根据细胞因子产生的不同 ,可将Th1细胞分为不同的亚群。随着Th1细胞分化次数的增加 ,IFN γ产生细胞的百分率也随之增加 ,但IL 2阳性细胞的百分率下降。CD6 2L随着Th1细胞分化次数的增加而减少。当细胞被动输给小鼠 2周后 ,初始CD4 + T细胞几乎等数量地分布于淋巴结、脾和肺组织 ,随着Th1细胞分化次数的增加 ,效应记忆T细胞优先地分布于非淋巴器官肺组织。当再次受到抗原刺激后 ,迅速产生IFN γ。结论 :Th1细胞是一群非均一细胞 ,效应记忆性Th1细胞在细胞膜分子标记、组织器官的分布和功能等方面均与初始CD4 +

关键词： CD4^+T细胞 Th1亚群记忆T细胞细胞因子

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碱性成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓间质干细胞增殖的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2004年第6期25卷 508-511页

作者：刘爱军项平黄锦桃李海标中山大学中山医学院组胚教研室广东广州510080

【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白... 详细信息

【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠骨髓基质干细胞(MSC)增殖的影响。【方法】用α-MEM冲洗骨髓腔,收集骨髓细胞悬液,接种在塑料培养瓶中,经体外扩增、纯化,观察其生长特性,用免疫组织化学SABC法检测波形蛋白和纤粘连蛋白的表达,并研究不同浓度bFGF对MSC生长曲线和克隆形成率的影响。【结果】原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落,细胞集落14d时接近融合,传代后细胞体积变大,约5～7d传代1次;免疫组化显示MSC呈波形蛋白阳性,而纤粘连蛋白阴性。浓度10ng/mL和20ng/mLbFGF组的MSC的细胞数和克隆形成率比5ng/mLbFGF组和对照组(无bFGF)明显增加,具有高度显著性(P<0.01)。【结论】bFGF可明显促进MSC的增殖。

关键词： FGF 增殖大鼠集落克隆形成率纤粘连蛋白碱性成纤维细胞生长因子细胞体积传代纯化

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褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响

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中山医科大学学报 2002年第3期23卷 180-182,203页

作者：胡黎平谢富康李海标中山大学中山医学院组胚教研室广东广州510089

【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞... 详细信息

【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含 10mL/L胎牛血清条件下培养 ,经褪黑激素或Luzindole作用 1周后做免疫组织化学染色 ,比较Map2阳性细胞出现率。【结果】①依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长 ,表达抗原蛋白巢蛋白(Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、S10 0蛋白、微管相关蛋白 (Map2 )阳性细胞。②褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率 (2 3 4 5 % ,2 1 82 % ) (P <0 0 1)。③褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度 (10 0 μmol/L)褪黑激素促神经干细胞分化作用 ,但不能抑制低浓度褪黑激素 (10nmol/L)的作用。【结论】褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化 ,不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。

关键词：褪黑激素干细胞/神经细胞分化

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胚胎干细胞源性表皮干细胞对小鼠全层皮肤缺损的修复

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解剖学报 2007年第3期38卷 296-299页

作者：刘爱军黄锦桃李海标中山大学基础医学院组织学胚胎学教研室广州510080

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层... 详细信息

目的研究129小鼠胚胎干细胞(ES cell)源性表皮干细胞在同种小鼠全层皮肤缺损的生长和分化,探讨ES细胞源性表皮干细胞对全层皮肤缺损的修复作用。方法以生物膜为载体,将羊膜诱导后带有核荧光标记的ES细胞源性表皮干细胞直接覆盖小鼠全层皮肤缺损创面。术后1-8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10、CEA免疫组织化学和荧光双标显色。结果术后2周,创面完全长合,较厚的新生皮覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,真皮层中可见管腔样结构,免疫荧光双标显示,1-3周新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15阳性,真皮层中带有核标记的管状或泡状结构呈β1整合素、CK15阳性;4周后新生表皮开始变薄,基底层细胞呈CK19、CK10阳性,汗腺样结构呈CEA阳性,6-8周新生表皮下可见毛囊样、汗腺样、皮脂腺样等结构。结论ES细胞源性表皮干细胞植入小鼠全层皮肤缺损创面,可修复缺损的表皮,并在其下真皮层内具有分化为汗腺样、毛囊样和皮脂腺样结构的潜能。

关键词：胚胎干细胞表皮干细胞定向分化皮肤附属结构免疫组织化学人羊膜小鼠

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环孢素A对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 346-349页

作者：黄俊马瑞杨培增吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室广东广州510080 中山大学中山眼科中心广东广州510080

目的研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3mAb+抗CD28mAb及抗CD3mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响。在单个细... 详细信息

目的研究在不同刺激条件下,环孢素A(CsA)对小鼠γ-干扰素(IFN-γ)产生的影响。方法小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3单克隆抗体(mAb)、抗CD3mAb+抗CD28mAb及抗CD3mAb+rIL-12刺激后,用ELISA法检测CsA对小鼠脾细胞IFN-γ产生的影响。在单个细胞水平上,用流式细胞仪检测CsA对脾细胞表面CD25和CD69表达及IFN-γ产生的影响。结果CsA对不同条件下诱导的小鼠脾细胞IFN-γ产生,均表现为剂量依赖性的抑制作用,其抑制机制与细胞的活化有关。结论CsA可以剂量依赖的方式抑制小鼠脾细胞表达CD25、CD69及产生IFN-γ。

关键词：环孢素A(CsA) 脾细胞 IFN-γ 小鼠

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