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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：郭银王晴晴姚谧刘晓春林浩然有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学大学院水生经济动物研究所广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

Kisspeptin由Kiss基因编码,在青春期启动和生殖活动中扮演着重要角色,并且在啮齿动物中已经证明Kisspeptin可以促进GtH的合成和释放.众所周知,雌激素可以反馈调控GnRH的释放,但是GnRH神经元上并没有雌激素受体的表达,但是Kiss神经元上... 详细信息

Kisspeptin由Kiss基因编码,在青春期启动和生殖活动中扮演着重要角色,并且在啮齿动物中已经证明Kisspeptin可以促进GtH的合成和释放.众所周知,雌激素可以反馈调控GnRH的释放,但是GnRH神经元上并没有雌激素受体的表达,但是Kiss神经元上面有雌激素受体、雄激素受体以及孕激素受体的表达,所以Kiss神经元被认为是性类固醇激素反馈调节中的"纽带".雌激素同样在青春期启动和雌性生殖轴中发挥着重要作用,发挥作用主要是通过两个雌激素受体α和β.我们研究了斜带石斑鱼雌激素受体ERβ在雌激素反馈调节中的作用.卵巢切除1龄大小的斜带石斑鱼,发现kiss2、GnRH1和Fshβ的mRNA水平均有显著性升高,而且卵巢切除并补偿雌激素后,kiss2、GnRH1和Fshβ的mRNA水平又恢复至假手术水平.以上结果说明,在青春期前的斜带石斑鱼中,雌激素对于生殖轴上的反馈调节是负反馈调节.所以,ERβ在E2对两种kiss基因的负反馈调节中发挥着怎么样的作用呢？接下来在293T细胞中,运用瞬时细胞转染的方法共转染含有kiss1或kiss2的启动子载体,最后发现两个雌激素受体ERβ1和ERβ2在10-7 M E2雌激素刺激下,显著性地抑制kiss1和kiss2的启动子活性.最后,在脑中分别共定位了ERβ1或ERβ2与kiss1或kiss2.结果证明斜带石斑鱼两种雌激素受体ERβ1和ERβ2可以介导E2对斜带石斑鱼kiss1和kiss2的负反馈调节.

关键词：斜带石斑鱼 kiss1 kiss2 ERβ1 ERβ2 负反馈性腺切除

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斜带石斑鱼GnRH/GnRH-R的结合特性

斜带石斑鱼GnRH/GnRH-R的结合特性

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：佘晴晴王晴晴郭银李高飞姚谧刘晓春林浩然有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学大学院水生经济动物研究所广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州 510275

促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)是由下丘脑合成和分泌的十肽激素,是动物生殖过程中的重要激素之一,是下丘脑-垂体-性腺生殖轴(hypothalamus pituitary gonadal axis,HPG)的关键信号分子,它与脑垂体促性腺激... 详细信息

促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)是由下丘脑合成和分泌的十肽激素,是动物生殖过程中的重要激素之一,是下丘脑-垂体-性腺生殖轴(hypothalamus pituitary gonadal axis,HPG)的关键信号分子,它与脑垂体促性腺激素分泌细胞上的促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRH-R)结合后,刺激促性腺激素(gonadotropin,GtH)的合成和分泌,在脊椎动物的性腺发育、性成熟和繁殖功能的维持中起着至关重要的调节作用。在硬骨鱼的进化中,随着基因组的复制,GnRH及其内源性的受体的种类和数量都有所增加,在鲈形目的斜带石斑鱼中,发现了三种GnRH(sbGnRH、cGnRH、sGnRH)和五种GnRHR(ecGnRHR-1A、ecGnRHR-1B、ecGnRHR-2A、ecGnRHR-2B、ecGnRHR-2C),并且已经克隆得到了这三种GnRH基因和五种GnRHR基因ORF(open reading frame)全长,为了进一步的阐明GnRH/GnRH-R在斜带石斑鱼这种雌雄同体,先雌后雄的鲈形目鱼类中对生殖调控的作用以及GnRH基因启动的下游信号及细胞内信号变化情况,本论文以斜带石斑鱼为对象,通过用COS-7细胞系进行转染试验研究了斜带石斑鱼两种GnRHR(ecGnRHR-1B、ecGnRHR-2A)和三种GnRH的结合特性。

关键词：斜带石斑鱼 GnRH GnRHR 结合特性

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养殖密度、水质和分级对水泥池鱖鱼苗种培育的影响

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广东农业科学 2015年第16期42卷 84-88页

作者：古勇明卢薛胥鹏曾爽周磊曾雷李朝兵佛山市百容水产良种有限公司广东佛山528216 有害生物控制与资源利用国家重点实验室/水生经济动物研究所/广东省水生经济动物良种繁育重点实验室/中山大学生命科学学院广东广州510275

为研究养殖密度、水质和分级对水泥池鳜苗种培育的影响，以翘嘴鳜鱼苗（体长0．7～1cm）为对象，在不同密度下投喂麦瑞加拉鲮进行试验。结果表明：（1）小规格苗种（〈2．5cm）的放养密度宜在4000尾／m^3左右，大规格苗种（2．5～6．5c... 详细信息

为研究养殖密度、水质和分级对水泥池鳜苗种培育的影响，以翘嘴鳜鱼苗（体长0．7～1cm）为对象，在不同密度下投喂麦瑞加拉鲮进行试验。结果表明：（1）小规格苗种（〈2．5cm）的放养密度宜在4000尾／m^3左右，大规格苗种（2．5～6．5cm）的放养密度不宜超过800尾／m^3。（2）养殖水体中氨氮和亚硝酸盐的浓度均与鳜鱼苗养殖密度成显著正相关，水泥池中进行鳜鱼苗种培育不宜密度过高，密度越高，疾病暴发的风险越大。（3）分级过筛选取鳜苗体长为2～3、5-6、8-9cm时的3个节点进行，保持饱食投喂，能较好地提高鳜鱼苗种的整齐度，降低残食率，提高成活率。

关键词：翘嘴鳜苗种培育养殖密度水质分级

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LHRH-A、DA对施氏鲟脑垂体碎片释放GtH的影响

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水产学报 2014年第3期38卷 378-384页

作者：胡红霞张勇朱华李立成姚志刚北京市水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心(北京) 农业部都市农业(北方)重点实验室中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

为了探讨在古老的软骨硬鳞鱼中促性腺激素(GtH)的双重内分泌调节作用,本实验设计用离体灌流的方法研究促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)和多巴胺(DA)对施氏鲟脑垂体碎片分泌GtH的影响。引入10、100和1 000 nmol/L 3个浓度的LHRH-A对施氏... 详细信息

为了探讨在古老的软骨硬鳞鱼中促性腺激素(GtH)的双重内分泌调节作用,本实验设计用离体灌流的方法研究促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)和多巴胺(DA)对施氏鲟脑垂体碎片分泌GtH的影响。引入10、100和1 000 nmol/L 3个浓度的LHRH-A对施氏鲟脑垂体碎片3次脉冲式刺激实验;每次间隔1 h,持续5 min,研究不同剂量LHRH-A对鲟鱼脑垂体释放GtH的作用;用200 nmol/L DA对施氏鲟脑垂体碎片持续2 h灌流后引入5 min的1 000nmol/L LHRH-A刺激实验,研究DA如何抑制鲟鱼脑垂体释放GtH。每5 min收集一管灌流液,用放射免疫测定法(RIA)检测灌流液中GtH的含量。结果显示,低剂量LHRH-A随着刺激引入脑垂体释放GtH出现波浪式的增加,中、高剂量出现释放延后现象。LHRH-A在10nmol/L到1 000 nmol/L范围内对刺激脑垂体释放GtH没有剂量依存关系。DA对施氏鲟脑垂体碎片GtH的分泌没有显著影响,但是可以抑制LHRH-A引起的GtH分泌,即DA不能抑制施氏鲟GtH的基础分泌,而只能抑制LHRH-A诱导的GtH分泌。研究结果证明,在高等硬骨鱼类中存在的双重神经内分泌调节在古老的鲟鱼中也存在。

关键词：施氏鲟脑垂体促黄体素释放激素类似物多巴胺促性腺激素离体灌流

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LHRH-A对尼罗罗非鱼生长及生长轴相关基因表达的影响

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水生生物学报 2013年第1期37卷 42-47页

作者：马细兰张勇周立斌刘晓春林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 华南师范大学生命科学学院广州510631 惠州学院生命科学系生物技术研究所惠州516007

促性腺激素释放激素(GnRH)的主要作用是刺激脑垂体促性激素(GtH)的释放,亦可促进鱼类生长激素(GH)的释放。促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)是哺乳类GnRH的类似物,为了分析LHRH-A对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采... 详细信息

促性腺激素释放激素(GnRH)的主要作用是刺激脑垂体促性激素(GtH)的释放,亦可促进鱼类生长激素(GH)的释放。促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)是哺乳类GnRH的类似物,为了分析LHRH-A对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采用腹腔注射(剂量0.1μg/g体重)方法,分析LHRH-A对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响,并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射LHRH-A后不同时段(6h、12h、24h、2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明,LHRH-A组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05);注射LHRH-A后12h、24h垂体GH mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),2周后恢复到对照组水平;注射LHRH-A后24h和2周肝脏GHR mRNA表达水平显著上升(P<0.05);注射LHRH-A后6h肝脏IGF-I mRNA表达水平显著升高(P<0.05),12h、24h和2周恢复到对照组水平。以上结果提示,LHRH-A可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达,从而促进鱼类的生长。

关键词：尼罗罗非鱼促黄体素释放激素类似物生长基因表达

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禁食与复投喂对斑马鱼肝脏细胞亚细胞结构的影响

禁食与复投喂对斑马鱼肝脏细胞亚细胞结构的影响

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中国水产学会水产生物技术专业委员会2013年年会暨水产生物技术与现代渔业学术研讨会

作者：贾计荣秦超彬王滨李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510006

特殊的生活环境使鱼类经常面临食物资源的匮乏,而进食与生长、代谢密切相关,禁食处理也常常被用于研究鱼类生长和内分泌调控.本实验对斑马鱼禁食处理不同的时间,取肝脏组织进行电镜分析,观察亚细胞结构发生的改变.结果表明,禁食1周对肝...

特殊的生活环境使鱼类经常面临食物资源的匮乏,而进食与生长、代谢密切相关,禁食处理也常常被用于研究鱼类生长和内分泌调控.本实验对斑马鱼禁食处理不同的时间,取肝脏组织进行电镜分析,观察亚细胞结构发生的改变.结果表明,禁食1周对肝脏细胞的亚细胞结构影响不大,但胞质内脂滴的数量大大增多,表现出肝脏组织旺盛的脂代谢.

关键词：

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安布闭壳龟FOXL2的克隆及分布特性初步研究

安布闭壳龟FOXL2的克隆及分布特性初步研究

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中国水产学会水产生物技术专业委员会2013年年会暨水产生物技术与现代渔业学术研讨会

作者：袁熙孙彩云李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510006

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花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达

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中山大学学报（自然科学版） 2012年第2期51卷 86-90,96页

作者：毛黎敏张勇李阳源黄海李波李文笙陈国华林浩然海南大学海洋学院暨热带生物资源教育部重点实验室海南海口570228 中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室//中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以lin-ker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA... 详细信息

采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以lin-ker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα。再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7%甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000。

关键词：花鳗鲡促黄体生成激素 linker 共表达载体pPICZαA-LHβα 毕赤酵母

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广西龟石水库大眼鳜的年龄与生长特征

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中国水产科学 2012年第2期19卷 229-236页

作者：刘凌志李桂峰陈石娟卢薛罗渡王贺中山大学生命科学学院水生经济动物研究所广东省水生经济动物良种繁育重点实验室有害生物控制与资源利用国家重点实验室广东广州510275 华南农业大学动物科学学院广东广州510642

2008年9月2009年8月,在广西龟石水库用刺网逐月采集大眼鳜（Siniperca kneri）标本688尾,摘取鳞片作为年龄鉴定的主要材料,摘取鳃盖骨和臀鳍第二鳍棘作为年龄鉴定的辅助材料,研究大眼鳜的年龄特征,并采用von Bertalanffy生长方程描述了... 详细信息

2008年9月2009年8月,在广西龟石水库用刺网逐月采集大眼鳜（Siniperca kneri）标本688尾,摘取鳞片作为年龄鉴定的主要材料,摘取鳃盖骨和臀鳍第二鳍棘作为年龄鉴定的辅助材料,研究大眼鳜的年龄特征,并采用von Bertalanffy生长方程描述了大眼鳜的生长特性,为合理利用和保护库区大眼鳜资源提供科学依据和理论参考。结果表明,以鳞片作为大眼鳜年龄的鉴定材料较可靠,年轮特征显示为疏密型和断裂切割型,年轮主要形成时期在4 6月,年轮的形成与繁殖有关;年龄组成为0~4龄,0龄和1龄鱼占标本总数的93.32%;体长（L）与鳞径（R）的回归方程为：L=24.47R＋4.021 2（r=0.981 9,n=623）;体长（L）与体质量（W）的回归方程为：W=0.017 7×L3.087 6（r=0.979 1,n=688）;体长、体质量的von Bertalanffy生长方程为：Lt=59.04[l-e-0.2692（t＋0.251 9）],Wt=5 196.88[l-e-0.269 1（t＋0.263 8）]3.087 6。分析龟石水库大眼鳜资源现状,认为渔获物中低龄个体占绝对优势与库区无节制捕捞有关。为保护与合理利用库区大眼鳜资源,建议将库区大眼鳜的最小捕捞年龄定为3龄,捕捞规格定为990 g以上。

关键词：大眼鳜年龄生长龟石水库

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斜带石斑鱼GtHRs在卵巢发育过程中的表达模式

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中国水产科学 2012年第6期19卷 915-922页

作者：胡雪松刘晓春张勇李水生陈华谱林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)卵巢进行组织学分析,根据卵母细胞的发育阶段将卵巢发育划分为7个时期(I-VII),检测斜带石斑鱼不同发育时期卵巢中两种促性腺激素受体(gonadotropin receptors,GtHRs),即卵泡刺激素受体(follicle-stim... 详细信息

对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)卵巢进行组织学分析,根据卵母细胞的发育阶段将卵巢发育划分为7个时期(I-VII),检测斜带石斑鱼不同发育时期卵巢中两种促性腺激素受体(gonadotropin receptors,GtHRs),即卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)和促黄体素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)的mRNA水平,同步分析下游卵巢型芳香化酶基因(Cyp19a)的表达模式。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)结果显示,FSHR的mRNA水平在I、II时期的卵巢中较低,在III时期开始上调,在IV、V时期显著升高,在VI时期显著下降。相比之下,LHR的转录水平在卵巢发育早期(I-IV)表达较低,在V时期开始有所升高,在VI时期达到峰值。卵巢内Cyp19a的mRNA在I III时期保持较低水平,在IV、V时期的表达显著增强,在VI时期表达明显减弱。在卵巢发育过程中,Cyp19a的整体表达模式与FSHR较为相似。上述结果表明,斜带石斑鱼FSHR和LHR均参与了卵巢发育的调控,但在不同发育时期功能不同。在卵巢发育过程中,FSHR可能是介导Cyp19a正调控的主要因子。本研究旨为阐明斜带石斑鱼GtH/GtHR信号系统在生殖调控过程中的作用提供基础依据。

关键词：斜带石斑鱼促性腺激素受体卵巢型芳香化酶基因卵巢发育

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