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Zoological Research 2005年第2期26卷 174-178页

作者：曹运长文红波李文笙林浩然南华大学生命科学与技术学院湖南衡阳421001 中山大学水生经济动物研究所广东省水生经济动物繁殖重点实验室广东广州510275

应用半定量RT PCR方法和Southern杂交技术,系统地研究了生长激素(GH)基因在蓝太阳鱼垂体外组织中的表达情况。在建立检测蓝太阳鱼GHmRNA表达的半定量RT PCR扩增条件之后,分别对蓝太阳鱼雄性幼鱼(6月龄)和雄性成鱼(1年龄)的12个组织部位... 详细信息

应用半定量RT PCR方法和Southern杂交技术,系统地研究了生长激素(GH)基因在蓝太阳鱼垂体外组织中的表达情况。在建立检测蓝太阳鱼GHmRNA表达的半定量RT PCR扩增条件之后,分别对蓝太阳鱼雄性幼鱼(6月龄)和雄性成鱼(1年龄)的12个组织部位中GHmRNA的表达进行了检测。结果表明,除了在垂体之外,还在肌肉、性腺、鳃、心脏、脑、肾脏6个组织检测到GHmRNA的表达,但各组织间的表达水平存在差异,而在脾脏、肝脏、胃3个组织未检测到表达;肌肉组织中的表达水平从幼鱼到成鱼后明显提高,同时观察到在幼鱼和成鱼的性腺组织中存在着较高水平的表达。本研究表明,GH基因在蓝太阳鱼的垂体外组织中存在着广泛的表达,由此提示,蓝太阳鱼GH可能以旁分泌或自分泌的方式对其生长繁殖起着重要的作用。

关键词：蓝太阳鱼生长激素半定量RT-PCR 基因表达 mRNA 垂体

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赤点石斑鱼精子发生和形成的超微结构研究

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中山大学学报（自然科学版） 2005年第4期44卷 103-106页

作者：舒琥刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所//广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州大学生物与化学工程学院生物系广东广州510405

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinepheluskaara精子发生和精子形成过程。结果表明,赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原... 详细信息

用透射电镜研究了赤点石斑鱼Epinepheluskaara精子发生和精子形成过程。结果表明,赤点石斑鱼精子发生经历了初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞阶段。精子细胞再经过精子形成过程成为精子。在初级精原细胞、次级精原细胞阶段,细胞核释放出拟染色体。拟染色体分布于精原细胞和前期Ⅰ的初级精母细胞的细胞质中。初级精母细胞减数分裂早期同源染色体配对明显可见,并形成联会复合体。精子细胞之间存在细胞联系(桥粒)。赤点石斑鱼成熟精子的特点是细胞核圆形,核内染色质致密,没有核泡(核空隙)。精子尾部细长,横切面为典型的“9+2”轴丝结构。

关键词：赤点石斑鱼精子发生精子形成超微结构

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斜带石斑鱼白细胞介素1β基因全长cDNA序列的克隆、原核表达及纯化

斜带石斑鱼白细胞介素1β基因全长cDNA序列的克隆、原核表达及纯化

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：卢丹琪贝锦新张勇李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一种具有广泛生物学活性的多肽。IL-1β前体蛋白并没有活性,在经过IL-1β转化酶切割后成为具有生理活性的成熟肽,在哺乳动物中除可引起炎症反应、激活T细胞以外,亦可影响下丘脑、垂体、性腺及... 详细信息

白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一种具有广泛生物学活性的多肽。IL-1β前体蛋白并没有活性,在经过IL-1β转化酶切割后成为具有生理活性的成熟肽,在哺乳动物中除可引起炎症反应、激活T细胞以外,亦可影响下丘脑、垂体、性腺及子宫等的功能,是免疫系统与神经内分泌系统间的重要信使分子。

关键词：斜带石斑鱼白细胞介素-1β 原核表达纯化

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雄性罗非鱼中雌激素相关基因的表达分析

雄性罗非鱼中雌激素相关基因的表达分析

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：张勇黄卫人朱培刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

雌激素(estrogen)是脊椎动物体内的重要化学信使,对生长发育和生殖功能具有重要作用。一般认为,雌激素主要是与雌性动物生殖功能的调节相关,但越来越多的证据表明,雌激素也是雄性动物生殖内分泌调控系统的一个重要组成部分。芳香化酶(ar... 详细信息

雌激素(estrogen)是脊椎动物体内的重要化学信使,对生长发育和生殖功能具有重要作用。一般认为,雌激素主要是与雌性动物生殖功能的调节相关,但越来越多的证据表明,雌激素也是雄性动物生殖内分泌调控系统的一个重要组成部分。芳香化酶(aromatase)是生物体能将雄激素转化为雌激素的关键酶,因此,生物体内芳香化酶的活性和分布能反映雌激素的生物合成状况。雌激素通过其受体介导信号发挥生理功能,所以,雌激素受体(estrogenreceptor)的表达直接与雌激素的生理功能相关。我们采用RT-PCR方法分别克隆了尼罗罗非鱼雌激素相关基因(芳香化酶与雌激素受体)的cDNA序列,包括两种芳香化酶(A型和B型)和三种雌激素受体(ERα、ERβ1和ERβ2)。以RT-PCR结合Southernblot方法检测了雄性罗非鱼脑和精巢组织中这些雌激素相关基因的表达。结果表明在雄性罗非鱼脑中,这5种基因都有表达,其中B型芳香化酶和ERα的表达较高,这与雌性罗非鱼的基因表达结果相似;但在雄性罗非鱼精巢中,同样是B型芳香化酶和ERα的表达较高,而雌性罗非鱼卵巢中A型芳香化酶的表达较高,三种雌激素受体(ERα、ERβ1和ERβ2)都具有较高的表达量。这表明在雄性罗非鱼生殖内分泌调控过程中,雌激素也起着重要作用,但是,在雌激素的产生与作用方式方面,雄性罗非鱼具有与雌鱼不同的分子机制。

关键词：雄性尼罗罗非鱼芳香化酶雌激素雌激素受体基因表达

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罗非鱼生长轴相关基因的cDNA克隆及mRNA表达分析

罗非鱼生长轴相关基因的cDNA克隆及mRNA表达分析

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：马细兰龙梓洁刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

神经内分泌生长轴,又称脑垂体生长轴,在动物的生长发育过程中发挥重要的调节作用。下丘脑根据机体需要分泌生长抑素(somatostatin,SS)和生长激素释放激素(growthhormonereleasinghormone,GHRH)双重作用于垂体,调节生长激素(growthhormon... 详细信息

神经内分泌生长轴,又称脑垂体生长轴,在动物的生长发育过程中发挥重要的调节作用。下丘脑根据机体需要分泌生长抑素(somatostatin,SS)和生长激素释放激素(growthhormonereleasinghormone,GHRH)双重作用于垂体,调节生长激素(growthhormone,GH)的分泌,GH经血液循环至肝脏,与肝细胞膜表面的生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR)结合,启动细胞内的信号传导机制,促进胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)的表达,再通过血液循环到达机体的局部组织,促进组织细胞的生长和分化。为了探索鱼类的生长调控机理以及相互间的作用机制,我们选择吉富罗非鱼作为实验材料,克隆了其生长轴相关基因的cDNA并对其mRNA表达作了初步分析。(1)采用RT-PCR方法分别克隆了吉富品系尼罗罗非鱼生长轴相关基因的cDNA序列,包括生长激素(GH)及其受体(GHR-1和GHR-2),类胰岛素生长因子(IGF-I和IGF-II)5种功能基因。GH的开放阅读框为615bp,共编码204个氨基酸;GHR-1的开放阅读框为1908bp,共编码635个氨基酸;GHR-2的开放阅读框为1725bp,共编码574个氨基酸;IGF-I的开放阅读框为549bp,共编码182个氨基酸;IGF-II的开放阅读框为648bp,共编码215个氨基酸。根据GenBank中其它鱼类生长轴相关基因的氨基酸序列进行相似性比较并构建分子系统进化树,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。(2)根据已获得的各基因的cDNA序列设计各自的特异引物,以β-actin作内标比较各组织(垂体、下丘脑、嗅球、端脑、中脑、后脑、延脑、鳃、心脏、胸腺、头肾、肝脏、脾脏、肾脏、性腺、胃、肠、肌肉)基因表达量的差异,GH在垂体大量表达,其余组织无表达;GHR和IGF在大部分组织都有表达,以肝脏表达量最高。(3)吉富罗非鱼的生长存在明显的雌雄差异,雄鱼大于雌鱼,为了探讨其机理,通过半定量RT-PCR方法,比较了垂体GH,肝脏和肌肉的GHR及IGFmRNA表达的雌雄差异,雄鱼垂体GHmRNA的表达量显著高于雌鱼,雄鱼肝脏GHR、IGFmRNA的表达量亦显著高于雌鱼,因而雄鱼生长轴调节的各组织的蛋白表达合成可能高于雌鱼,这可能是雄鱼生长较雌鱼快的原因之一。

关键词：吉富品系尼罗罗非鱼生长激素及其受体类胰岛素生长因子雌雄表达差异

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中国大鲵野生亲代,人工繁殖子一代、子二代遗传多样性分析

中国大鲵野生亲代,人工繁殖子一代、子二代遗传多样性分析

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：杨丽萍蒙子宁刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

中国大鲵(Andriasdavidianus),俗称娃娃鱼,为我国特有的珍稀两栖动物,隶属于两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科、大鲵属。由于人为过度捕杀及其栖息繁衍环境被破坏,数量锐减,已被列为我国国家二级重点保护动物,并列入CITES公约附录Ⅰ。为恢复和... 详细信息

中国大鲵(Andriasdavidianus),俗称娃娃鱼,为我国特有的珍稀两栖动物,隶属于两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科、大鲵属。由于人为过度捕杀及其栖息繁衍环境被破坏,数量锐减,已被列为我国国家二级重点保护动物,并列入CITES公约附录Ⅰ。为恢复和有效利用大鲵资源,自20世纪70年代起国内许多单位对大鲵人工养殖进行研究,并已成功繁殖出子二代。在许多鱼类、爬行类在养殖过程中均出现遗传多样性下降等现象。大鲵繁殖周期较长,所处保护地位特殊,为防止大鲵在养殖条件下遗传多样性下降,有必要对各世代大鲵间遗传多样性变化做一检测。RAPD分析方法具有相对简单、易于操作,产物遗传多样性丰富等优点,已被广泛应用于动物,植物,微生物遗传多样性分析。本文利用随机引物扩增多态DNA(RAPD)对从广东珠海市斗门金鲵水产科技有限公司所采集的大鲵野生亲代,人工繁殖子一代、子二代各12个个体进行遗传多样性分析。从100条随机引物中筛出条带较好的20条引物进行扩增,共扩增出91个位点,野生亲代同子一代、子二代间相似度为0.9477和0.9455,子一代同子二代间相似性度为0.9699,相似性较高,显示遗传作用较强。三代群体的多态位点比例分别为46.15%、42.86%和39.56%,Shannon多样性指数分别为0.2787、0.2557和0.2301。结果表明,大鲵人工繁殖的子代和野生亲代群体遗传多样性较为丰富,但随着人工累代养殖,大鲵多态位点比例及遗传多样性水平有下降趋势。

关键词：中国大鲵 RAPD 遗传多样性

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斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达特性研究

斜带石斑鱼胃cDNA文库的构建和胃蛋白酶原基因的克隆及其组织表达...

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：冯少珍李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

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斜带石斑鱼(Epinephelus coiodes)orexin cDNA的克隆及组织表达特性

斜带石斑鱼(Epinephelus coiodes)orexin cDNA的克隆及组织表达特...

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会和发育生物学分会联合学术研讨会

作者：张玲娟李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

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罗非鱼生长轴相关基因的cDNA克隆及mRNA表达分析

罗非鱼生长轴相关基因的cDNA克隆及mRNA表达分析

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会

作者：马细兰龙梓洁刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广州510275

神经内分泌生长轴,又称脑垂体生长轴,在动物的生长发育过程中发挥重要的调节作用.下丘脑根据机体需要分泌生长抑素(somatostatin,SS)和生长激素释放激素(growthhormonereleasinghormone,GHRH)双重作用于垂体,调节生长激素(growthhormone... 详细信息

神经内分泌生长轴,又称脑垂体生长轴,在动物的生长发育过程中发挥重要的调节作用.下丘脑根据机体需要分泌生长抑素(somatostatin,SS)和生长激素释放激素(growthhormonereleasinghormone,GHRH)双重作用于垂体,调节生长激素(growthhormone,GH)的分泌,GH经血液循环至肝脏,与肝细胞膜表面的生长激素受体(growthhormonereceptor,GHR)结合,启动细胞内的信号传导机制,促进胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)的表达,再通过血液循环到达机体的局部组织,促进组织细胞的生长和分化.为了探索鱼类的生长调控机理以及相互间的作用机制,选择吉富罗非鱼作为实验材料,克隆了其生长轴相关基因的cDNA并对其mRNA表达作了初步分析。

关键词：吉富品系尼罗罗非鱼生长激素类胰岛素生长因子雌雄表达差异脑垂体生长轴 cDNA克隆

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斜带石斑鱼白细胞介素1β基因全长cDNA序列的克隆、原核表达及纯化

斜带石斑鱼白细胞介素1β基因全长cDNA序列的克隆、原核表达及纯化

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第二届中国动物学会比较内分泌学分会、发育生物学分会联合学术年会

作者：卢丹琪贝锦新张勇李文笙林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广州510275

白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一种具有广泛生物学活性的多肽.IL-1β前体蛋白并没有活性,在经过IL-1β转化酶切割后成为具有生理活性的成熟肽,在哺乳动物中除可引起炎症反应、激活T细胞以外,亦可影响下丘脑、垂体、性腺及... 详细信息

白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)是一种具有广泛生物学活性的多肽.IL-1β前体蛋白并没有活性,在经过IL-1β转化酶切割后成为具有生理活性的成熟肽,在哺乳动物中除可引起炎症反应、激活T细胞以外,亦可影响下丘脑、垂体、性腺及子宫等的功能,是免疫系统与神经内分泌系统间的重要信使分子.在进行鱼类及哺乳动物IL-1β基因序列的同源性比对,并根据保守区设计简并引物后,以斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)脾脏反转录产物作为模板,利用PCR方法获得斜带石斑鱼IL-1β基因cDNA片段;再利用RACE技术,获得IL-1βcDNA的3'末端和5'末端.斜带石斑鱼IL-1βcDNA基因序列的全长为1364bp,3'非编码区为120bp,5'非编码区为480bp,开放读码框为765bp,编码255个氨基酸,分子量大约为28.7kD,其中成熟肽由176个氨基酸组成,分子量约为19.7kD.与其他鱼类及哺乳动物IL-1β氨基酸序列同源性分析表明,斜带石斑鱼IL-1β与其他动物IL-1β氨基酸序列有较高的相似性,同时亦含有白细胞介素家族的标识序列.将编码IL-1β成熟肽的基因序列亚克隆至原核表达载体pET-22b(+)中,构建IL-1β重组蛋白原核表达质粒pIL1-ET22b(+)并经测序验证.将该重组质粒转化大肠杆菌BL21后,进行诱导表达,并优化培养温度、诱导时间及IPTG浓度.在30℃,0.5mMIPTG诱导4hr后,重组菌株表达可溶可溶性目的蛋白,约占菌体蛋白70％.利用目的蛋白的融合组氨酸标签与镍层析柱特异结合的特性进行蛋白分离纯化,获得较纯的重组表达蛋白.斜带石斑鱼IL-1β重组蛋白的表达纯化,为后续的生物功能研究以及抗体的制备提供基础。

关键词：斜带石斑鱼白细胞介素-1β 原核表达纯化 cDNA序列免疫系统

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