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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：王翔张勇陈嘉兴唐霖唐驻景林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

前列腺素E2是一种重要的花生四烯酸代谢产物,通过与G蛋白偶联受体结合进而作用于机体生理和病理活动。在某些硬骨鱼中,前列腺素E2对其繁殖期排卵过程具有重大作用。本文利用斜带石斑鱼转录组数据确定前列腺素E2受体基因在性腺表达的种类... 详细信息

前列腺素E2是一种重要的花生四烯酸代谢产物,通过与G蛋白偶联受体结合进而作用于机体生理和病理活动。在某些硬骨鱼中,前列腺素E2对其繁殖期排卵过程具有重大作用。本文利用斜带石斑鱼转录组数据确定前列腺素E2受体基因在性腺表达的种类,并对其进行基因全长克隆。利用荧光定量PCR技术验证前列腺素E2受体基因是否存在雌雄性腺差异性表达。结果如下：Ptger2、Ptger4a及Ptger4b三种前列腺素E2受体基因在斜带石斑鱼性腺中表达,其他受体并未在性腺中表达。克隆前列腺素E2受体基因可得,Ptger2全长111obp,编码370aa;Ptger4a全长1065bp,编码355aa;Ptger4b全长1353bp,编码451aa,受体均为G蛋白偶联受体。利用荧光定量PCR验证发现存在雌性差异性表达,其中Ptger4b基因在雄性精巢中显著表达,而Ptger2、Ptger4a在雌性卵巢中表达量显著上升。

关键词：斜带石斑鱼前列腺素E2 受体基因性腺表达

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激素诱导石斑鱼雄性化的研究

激素诱导石斑鱼雄性化的研究

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：李水生刘云肖玲王翔张勇刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

石斑鱼是典型的雌雄同体雌性先成熟鱼类，首次性成熟时为雌性，经过一年或多年产卵后，部分雌鱼发生性反转为雄鱼。其独特的生殖特点造成石斑鱼群体中雄鱼数量少，雌雄发育不同步，给石斑鱼的人工繁育和遗传改良带来了极大的困难。我们... 详细信息

石斑鱼是典型的雌雄同体雌性先成熟鱼类，首次性成熟时为雌性，经过一年或多年产卵后，部分雌鱼发生性反转为雄鱼。其独特的生殖特点造成石斑鱼群体中雄鱼数量少，雌雄发育不同步，给石斑鱼的人工繁育和遗传改良带来了极大的困难。我们通过持续跟踪取样，分析了人工养殖条件下斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)在65月龄内的性腺发育过程，发现其性分化完成后，雌性卵巢在9月龄后开始发育。因此，采取投喂含有雄激素甲基睾酮(MT)饲料的方法，可以在石斑鱼卵巢发育之前，成功诱导8月龄的斜带石斑鱼幼鱼向雄性方向发育。结果表明，以MT 10mg/kg饲料的剂量投喂3个月能够有效诱导卵巢未发育的幼鱼往雄性方向发育;但停止投喂MT后，幼鱼精巢又开始出现退化，不会继续往雄性方向发展，而转变为雌性。以上结果表明，斜带石斑鱼性别决定和分化除了受遗传因子和内分泌调控外，还受到年龄、体型和群体、环境等因子的影响，人工投喂MT激素的作用并不能从根本上影响石斑鱼幼鱼的性腺发育的方向，只有在持续剂量的MT激素诱导下，石斑鱼幼鱼才能发育为成熟的雄鱼。

关键词：石斑鱼性腺发育激素诱导雄性化

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斜带石斑鱼黑色素浓集激素受体的基因克隆及表达研究

斜带石斑鱼黑色素浓集激素受体的基因克隆及表达研究

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：李伟萍李水生刘雅莉卢丹琪张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

黑色素浓集激素(melanin-concentrating hormone,MCH)是一种环形神经肽,主要存在于下丘脑中,其神经纤维广泛分布于各个脑区,与生命体的摄食行为、能量平衡、情绪压抑及色素沉积等神经内分泌调控密切相关.研究发现,在哺乳动物中,神经肽MC... 详细信息

黑色素浓集激素(melanin-concentrating hormone,MCH)是一种环形神经肽,主要存在于下丘脑中,其神经纤维广泛分布于各个脑区,与生命体的摄食行为、能量平衡、情绪压抑及色素沉积等神经内分泌调控密切相关.研究发现,在哺乳动物中,神经肽MCH主要通过与两种G-蛋白偶联受体MCHR1和MCHR2结合后介导不同的信号通路来进行机体的调节活动.本研究首先通过对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)转录组数据分析并结合基因克隆技术,发现了MCH的三个受体亚型,即MCHR1a、MCHR1b和MCHR2.通过研究MCHR这三种受体亚型在机体内的表达模式,我们利用实时荧光定量PCR技术对这三种受体MCHR进行了不同组织分布的检测,结果发现MCHR1和MCHR2均在斜带石斑鱼的脑区广泛表达,特别是在下丘脑中表达丰富,这反应了其与MCH在脑神经中枢的调节活动密切相关;同时在其他外周组织的检测结果发现,MCHR1和MCHR2在胃、肠道、肌肉、肝脏、鳃、心脏和性腺等组织也均有相应广泛的表达,这可能与斜带石斑鱼的摄食、能量平衡和色素沉积等调节活动相关.

关键词：斜带石斑鱼黑色素浓集激素内分泌调控转录组基因克隆

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基于分子标记及BLUP育种技术的斜带石斑鱼优质亲本筛选

基于分子标记及BLUP育种技术的斜带石斑鱼优质亲本筛选

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：陈枭叶智峰陈嘉兴夏军红张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

分子育种与传统育种相比更加高效、准确，已经被广泛的应用于动植物的良种选育。本研究的目的在于通过运用现代分子标记技术结合BLUP育种方法，筛选出斜带石斑鱼优质亲本。研究的方法为：在繁殖场对20条以上亲缘关系较远的石斑鱼进行自... 详细信息

分子育种与传统育种相比更加高效、准确，已经被广泛的应用于动植物的良种选育。本研究的目的在于通过运用现代分子标记技术结合BLUP育种方法，筛选出斜带石斑鱼优质亲本。研究的方法为：在繁殖场对20条以上亲缘关系较远的石斑鱼进行自由交配。将子一代分成6个养殖池养殖，每个池挑选100条子代，分别于6个月、12个月进行体重、体长等经济性状测量。采用10个高多态性微卫星标记建立微卫星多重PCR技术体系，根据谱系重建法对群体进行亲子鉴定。进一步基于BLUP分析对每个个体及亲本组合进行育种值估计，从而筛选出最优亲本、子一代个体及交配组合。本研究将建立斜带石斑鱼高效、高通量的亲子鉴定技术，获得的优质个体可以用于分子标记辅助良种选育工作。

关键词： BLUP育种微卫星标记亲子鉴定良种选育

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斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交二倍体和三倍体转录组分析

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交二倍体和三倍体转录组分析

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：肖玲刘雅莉陈嘉兴陈慧敏李水生张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交子一代中，会出现少量三倍体杂交斑.跟踪43月龄前二倍体和三倍体性腺发育发现，二倍体与其母本斜带石斑鱼性腺发育过程和分化发育的时间均一致，三倍体卵巢发育严重削弱.本实验用18月龄二倍体和... 详细信息

斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)杂交子一代中，会出现少量三倍体杂交斑.跟踪43月龄前二倍体和三倍体性腺发育发现，二倍体与其母本斜带石斑鱼性腺发育过程和分化发育的时间均一致，三倍体卵巢发育严重削弱.本实验用18月龄二倍体和三倍体的脑垂体和性腺分别构建文库，进行了转录组测序，以了解二倍体和三倍体基因表达差异，初步探索三倍体性腺不发育的分子机制.使用Illumina HiSeq 2000对二倍体三倍体脑和性腺测序共得到19.38G数据，包含215.3M条序列，将序列比对到斜带石斑鱼基因组上，以便分析二倍体和三倍体的基因表达情况.与二倍体相比，三倍体脑垂体中上下调基因分别有223和1297个，而性腺中上下调基因分别有12954和2021个.

关键词：青龙斑二倍体三倍体转录组

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斜带石斑鱼两种神经肽Nesfatin-1的发现及功能研究

斜带石斑鱼两种神经肽Nesfatin-1的发现及功能研究

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：王庆黄敏伟唐霖唐驻景张勇李水生林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

内分泌因子Nesfatin-1(NEFA/NUCB2 encoded satiety and fat-influencing protein)是下丘脑基因编码的核连蛋白-2(nucleobindin-2,NUCB2)裂解后产生的一种肽。近年来的研究发现Nesfatin-1在摄食调节,生殖调节,体温调节,精神压力的调节及抗炎保护等方面发挥着重要作用,但其作用机制尚未完全明确。为了研究Nesfatin-1与斜带石斑鱼摄食和生殖调控的关系,本文克隆得到两种到了NUCB2(NUCB2a和NUCB2b)基因的cDNA序列,对NUCB2编码蛋白进行分析得到两种Nesfatin-1(Nes fatin-1a和Nesfatin-1 b)的氨基酸序列,同时对两种Nesfatin-1的信号肽和成熟肽进行预测,发现与脊椎动物的一致。采用实时荧光定量PCR技术对两种肽在斜带石斑鱼不同组织中的表达模式进行分析,结果发现Nes fatin-1a在脾脏中大量表达而Nes fatin-1b在垂体和肝脏中大量表达,在其他外围组织中如肌肉,卵巢中也有相应的表达。

关键词：斜带石斑鱼内分泌因子摄食调控生殖调控

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斜带石斑鱼AMH及受体基因的克隆和组织表达分析

斜带石斑鱼AMH及受体基因的克隆和组织表达分析

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：韩玉龙彭诚黄敏伟陈慧敏张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

抗缪勒氏管激素(ant-iMullerian hormone,AMH)为糖蛋白,属于TGF-β细胞因子家族。哺乳动物中,AMH因具有引起缪勒氏管退化和阻止雌性生殖器官的发育而得名。而硬骨鱼中,虽然都没有缪勒氏管,但是AMH及其受体基因已经在许多鱼类中被克隆出... 详细信息

抗缪勒氏管激素(ant-iMullerian hormone,AMH)为糖蛋白,属于TGF-β细胞因子家族。哺乳动物中,AMH因具有引起缪勒氏管退化和阻止雌性生殖器官的发育而得名。而硬骨鱼中,虽然都没有缪勒氏管,但是AMH及其受体基因已经在许多鱼类中被克隆出来,而且在已经克隆得到的鱼中被证实在性腺中表达,这表明了AMH基因在鱼类性别分化和性逆转方面可能起着某种作用。本文利用RACE方法克隆了AMH及其受体AMHRⅡ基因的全长cDNA序列并进行进化分析;利用RTPCR方法对AMH及其受体AMHRⅡ基因在不同组织器官中的表达量进行检测;并利用原位杂交的方法对AMH及其受体AMHRⅡ基因在性腺中的表达进行定位;在对AMH及其受体AMHRⅡ基因所扮演的作用进行分析及预测,这也为进一步研究和探讨AMH及其受体AMHRⅡ基因在性别分化和性逆转方面可能扮演的作用打下了基础。通过实验我们也得到了斜带石斑鱼中AMH及其受体AMHRⅡ基因的一些结果：(1)斜带石斑鱼AMH基因的cDNA序列全长为1726bp,含有1557bp的开放阅读框(ORF),可编码518个氨基酸;而AMHRⅡ受体基因序列全长为1822bp,含有1497 bp的开放阅读框(ORF),可编码498个氨基酸。

关键词：斜带石斑鱼 RACE克隆原位杂交性别决定性别分化

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杂交虎龙石斑鱼生长优势的分子机制研究

杂交虎龙石斑鱼生长优势的分子机制研究

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第六届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：王登东李水生孙颖肖玲刘云张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州 510275

石斑鱼是我国及东南亚国家重要的海水养殖鱼类.斜带石斑鱼和褐点石斑鱼杂交产生的虎龙斑(Epinephelus fuscogutatus♀×***♂)相对其母本具有显著的生长优势,这将是我国石斑鱼产业中具有显著价值的养殖种类.该石斑鱼获得了两个亲本... 详细信息

石斑鱼是我国及东南亚国家重要的海水养殖鱼类.斜带石斑鱼和褐点石斑鱼杂交产生的虎龙斑(Epinephelus fuscogutatus♀×***♂)相对其母本具有显著的生长优势,这将是我国石斑鱼产业中具有显著价值的养殖种类.该石斑鱼获得了两个亲本优秀的生产特性,但目前对其杂交优势的分子机制仍有待研究.基于RNA测序和基因表达谱,我们实施了虎龙斑与两个亲本生长性状相关的比较转录组分析.在脑和肝脏两个组织中,分别获得了662和5329个差异表达基因(DEGs),对其进行GO富集,它们主要集中在metabolic process和catalytic activity两个GO term上.进一步分析显示,杂交子一代脑组织中的GnRH1、GnRH3以及肝脏中GH/IGF轴相关基因(如IGF-1,IGF-2b,IGFBP-1,IGFBP-2,IGFBP-4 and IGFBP-5a)显著上调,这与杂交石斑鱼生长优势的特点相吻合.

关键词：虎龙斑杂交优势分子机制调控途径

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集约化养殖花鳗鲡幼苗水体水质指标检测

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科学养鱼 2015年第8期37卷 52-53页

作者：肖诗斌陶宇王振园李桂峰孙际佳刘丽华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

国内目前所谓鱼类工厂化养殖多为室内流水集约化养殖,与采用封闭循环水的工厂化养殖差别很大。在广东省惠州市财兴实业有限公司集约化花鳗鲡幼苗养殖场,我们进行了1个水处理周期（7天）的水质监测,试图通过水体中p H、溶氧、氨氮、亚硝... 详细信息

国内目前所谓鱼类工厂化养殖多为室内流水集约化养殖,与采用封闭循环水的工厂化养殖差别很大。在广东省惠州市财兴实业有限公司集约化花鳗鲡幼苗养殖场,我们进行了1个水处理周期（7天）的水质监测,试图通过水体中p H、溶氧、氨氮、亚硝酸盐的指标的变化,探讨养鳗池水质因子之间作用关系。

关键词：工厂化养殖水体水质流水养殖水质因子处理周期氨氮浓度养殖池水质监测封闭循环半封闭式

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神经分泌素Secretoneurin的研究进展

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广州大学学报（自然科学版） 2015年第5期14卷 18-23页

作者：舒琥杨丽冬李水生林婷婷广州大学生命科学学院广东广州510006 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广东广州510275 湛江师范学院基础教育学院广东湛江524037

神经分泌素（SN）是分泌粒蛋白II（SgII）前体最保守的序列,由33～34个氨基酸组成.在硬骨鱼类的世系中,可能发生特定的基因组复制事件产生SN的两个旁系同源基因：SNa和SNb.在所有已知SN肽的中央核心都包含“YTPQ-X-LA-X7-EL”这10个相... 详细信息

神经分泌素（SN）是分泌粒蛋白II（SgII）前体最保守的序列,由33～34个氨基酸组成.在硬骨鱼类的世系中,可能发生特定的基因组复制事件产生SN的两个旁系同源基因：SNa和SNb.在所有已知SN肽的中央核心都包含“YTPQ-X-LA-X7-EL”这10个相同的氨基酸.SN免疫反应（SN-ir）在哺乳动物主要的垂体细胞类型中发现.其内分泌功能最显著的例子是刺激金鱼垂体和小鼠LβT2促性腺激素细胞中促黄体生成素的释放,表明SN在生殖调控中有重要作用.研究表明,SN受体有可能是一个G蛋白偶联受体.文章对SN的起源、结构、调控垂体激素及其作用机制等方面的最新研究进展予以综述,并展望了SN今后的发展前景.

关键词：神经分泌素分泌粒蛋白II 促黄体生成素

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