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中国生理学会2012年消化内分泌生殖代谢生理学术会议暨第八届比较生理学学术会议

作者：李晓瑜林浩然李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学生命科学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510006

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鞍带石斑鱼精子诱导斜带石斑鱼雌核发育的研究

鞍带石斑鱼精子诱导斜带石斑鱼雌核发育的研究

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2012年中国水产学会学术年会

作者：吴廷昌骆剑黄飞佘长宁陈猛猛陈国华黄文刘扬潮海南大学海洋学院海南大学热带生物资源教育部重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室海南青利水产繁殖有限公司

将鞍带石斑鱼精子遗传物质进行紫外线照射灭活,灭活后的精子与斜带石斑鱼卵子混合授精,经低温冷休克处理加倍,静水培育孵化出膜。实验结果显示:鞍带石斑鱼精子在适宜的紫外处理剂量下,精子处理各实验组受精率和成活率均表现出了明显的He... 详细信息

将鞍带石斑鱼精子遗传物质进行紫外线照射灭活,灭活后的精子与斜带石斑鱼卵子混合授精,经低温冷休克处理加倍,静水培育孵化出膜。实验结果显示:鞍带石斑鱼精子在适宜的紫外处理剂量下,精子处理各实验组受精率和成活率均表现出了明显的Hertwig效应,未冷休克组显示出较高的受精率83.5%和单倍体率80%;在卵子受精后6min进行冷休克处理,水温在4-6℃的条件下,可以获得40%的受精率和29.7%的成活率。Duncan多重比较结果显示冷休克处理水温组和持续时间组在受精率方面差别不显著,而在孵化率方面持续时间组差异极显著(p=0.002),水温处理组差异并不显著(p=0.396),可能与卵子分裂受冷休克影响较小而持续发育受影响较大有关。

关键词：石斑鱼雌核发育紫外照射冷休克

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斜带石斑鱼转化生长因子β1(TGF-β1)基因的克隆及表达分析

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中山大学学报（自然科学版） 2011年第1期50卷 92-98页

作者：平海林吴金英徐胜威胡开顺段志刚中山大学生命科学学院水生经济动物研究所∥广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

转化生长因子β1(TGF-β1)是一种高度保守的多效细胞因子。通过分子克隆得到了斜带石斑鱼Epi-nephelus coioidesTGF-β1 cDNA全长序列,全长为2 477 bp,开放阅读框为1 161 bp,编码一种含386个氨基酸的多肽。Realtim e PCR分析表明,TGF-β... 详细信息

转化生长因子β1(TGF-β1)是一种高度保守的多效细胞因子。通过分子克隆得到了斜带石斑鱼Epi-nephelus coioidesTGF-β1 cDNA全长序列,全长为2 477 bp,开放阅读框为1 161 bp,编码一种含386个氨基酸的多肽。Realtim e PCR分析表明,TGF-β1基因在健康斜带石斑鱼所取组织中均有表达,肾脏中表达最高,其次是头肾和脾脏。用PolyI:C或ConA刺激斜带石斑鱼头肾淋巴细胞,TGF-β1表达量明显上升,且在刺激4 h后达到最高值。用PolyI:C刺激16、24 h后,TGF-β1几乎不表达,而用ConA刺激实验组,TGF-β1表达量一直高于对照组。结果说明,斜带石斑鱼TGF-β1基因结构和表达特征与其他硬骨鱼类具有高度相似性。

关键词： TGF-β1 斜带石斑鱼Epinephelus coioides 克隆表达分析

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大海马转化生长因子β1(TGF-β1)基因的克隆鉴定及功能研究

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中国水产科学 2011年第5期18卷 1021-1031页

作者：平海林吴金英徐胜威胡开顺段志刚中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种多效应细胞因子,在免疫系统中,成熟的TGF-β1多肽是一种强有力的细胞分化调节剂和免疫调节剂。本研究通过基因克隆得到了大海马(Hippocampus kuda)TGF-β1 cDNA全长序列(... 详细信息

转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种多效应细胞因子,在免疫系统中,成熟的TGF-β1多肽是一种强有力的细胞分化调节剂和免疫调节剂。本研究通过基因克隆得到了大海马(Hippocampus kuda)TGF-β1 cDNA全长序列(GenBank登录号为HM564035),全长为1 941 bp,开放阅读框为1 161 bp,编码1种含386个氨基酸的多肽。同源性分析表明,大海马TGF-β1与斜带石斑鱼TGF-β1的亲缘关系最近。Real-time PCR结果显示,TGF-β1基因在健康大海马肾中表达量最高,其次是肝、大脑、小脑、皮肤、中脑、卵巢,在鳃和肠道中表达很少,在心脏和肌肉中检测不到表达。大海马TGF-β1重组蛋白在TNT快速偶联的转录/翻译系统中高效表达,用BS3交联后形成了大量的可溶性二聚体蛋白,Western blot检测结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性。利用得到的大海马rTGF-β1刺激HeLa细胞,结果显示刺激细胞中TGF-β1下游Smad信号通路中的Smad3、Smad4基因表达量上升,Smad7基因表达量下降,表明所得到的大海马TGF-β1重组蛋白具有特定的生物活性,能够诱导人细胞中Smad信号通路的活化,延续了TGF-β1蛋白功能的保守性。

关键词： TGF-β1 大海马克隆组织分布重组蛋白信号通路

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尼罗罗非鱼Orexin前体基因的克隆、组织分布及其在摄食调控中的表达

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Zoological Research 2011年第3期32卷 285-292页

作者：陈文波王鑫周雅璐董海燕林浩然李文笙中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 河南理工大学资源环境学院生物系河南焦作454000

该文采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)的方法,从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)下丘脑总RNA中获得了尼罗罗非鱼Orexin前体基因的cDNA全长序列。该cDNA全长648bp,其中开放阅读框的长423bp,编码Orexin前体蛋白为140个氨基酸,包括37个氨基酸的信号肽、43个氨基酸的Orexin-A、28个氨基酸的Orexin-B和末尾32个氨基酸组成的功能不详的多肽。采用Real-time PCR技术对尼罗罗非鱼Orexin前体基因的组织表达模式以及在摄食前后、饥饿和再投喂状态下的表达量变化进行了研究。结果显示,在脑部和外周等18个组织中都检测到了Orexin前体基因的表达,其中在下丘脑中表达量最高;在摄食前后,尼罗罗非鱼Orexin前体基因的表达量显著低于在摄食状态中;饥饿2、4、6和8d后,Orexin前体基因在下丘脑中的表达量与正常投喂组相比均显著升高,饥饿4d再投喂后,表达量又恢复至正常水平。这些结果表明,Orexin在尼罗罗非鱼摄食中可能有着重要的调节作用。

关键词：尼罗罗非鱼 Orexin 克隆表达摄食

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唐鱼Caspase-3和Caspase-9 cDNA全长克隆及胁迫表达分析

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水生生物学报 2011年第1期35卷 138-144页

作者：徐胜威李恬吴金英梁健宏刘汉生连常平中山大学生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 广州市海洋与渔业自然保护区管理站广州510405

研究以唐鱼(Tanichthys albonubes)鳃部组织为材料,利用同源克隆和RACE方法,首次克隆得到唐鱼Caspase-3和Caspase-9 cDNA全长序列,并对其生物信息学进行了分析和鉴定。实验结果表明唐鱼Caspase-3 cDNA全长2153 bp,开放读码框(Open Readi... 详细信息

研究以唐鱼(Tanichthys albonubes)鳃部组织为材料,利用同源克隆和RACE方法,首次克隆得到唐鱼Caspase-3和Caspase-9 cDNA全长序列,并对其生物信息学进行了分析和鉴定。实验结果表明唐鱼Caspase-3 cDNA全长2153 bp,开放读码框(Open Reading Frame,ORF)为840 bp,编码一段长为279个氨基酸的多肽序列;Caspase-9 cDNA全长为1758 bp,ORF为1323 bp,编码440个氨基酸。生物信息学分析表明Caspase-3和Caspase-9与其他鱼类在蛋白结构上较为保守,在重要的功能域呈现高度的保守性。应用实时荧光定量PCR技术,分析了氯氰菊酯对唐鱼鳃部组织表达Caspase-3和Caspase-9的影响,在氯氰菊酯的胁迫下,Caspase-3和Caspase-9的表达呈现抑制状态,且呈现明显的浓度和时间依赖效应。

关键词：唐鱼 Caspase-3 Caspase-9 克隆氯氰菊酯表达

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中国大鲵5个野生种群的AFLP分析

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中山大学学报（自然科学版） 2011年第2期50卷 99-104页

作者：杨丽萍蒙子宁刘晓春张勇黄俊海黄景林浩然中山大学水生经济动物研究所∥广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 西南林业大学云南省森林灾害预警与控制重点实验室云南昆明650224 珠海金鲵野生动物养殖有限公司广东珠海519015 海南大学海洋学院海南海口570228

采用AFLP技术对中国大鲵四川、贵州、湖北、陕西及河南五个野生种群的遗传多样性和遗传分化水平进行了评估。9对引物组合在5个野生种群中共扩增出507条带,其中多态性条带为354。多态位点比例(69.82%)、香农信息指数(0.362 9)和基因多样... 详细信息

采用AFLP技术对中国大鲵四川、贵州、湖北、陕西及河南五个野生种群的遗传多样性和遗传分化水平进行了评估。9对引物组合在5个野生种群中共扩增出507条带,其中多态性条带为354。多态位点比例(69.82%)、香农信息指数(0.362 9)和基因多样性指数(0.241 4)等参数均较高,显示中国大鲵遗传多样性水平较为丰富。AMOVA分析发现,中国大鲵遗传多样性绝大部分位于种群内(97.94%)。种群间遗传分化较弱(Фst=0.021,P<0.001)。根据种群间遗传距离构建的UPGMA树基本依照流域进行聚类,结合化石证据,推测中国大鲵由北向南进行扩散。

关键词：中国大鲵遗传多样性遗传分化 AFLP 系统地理学

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黄鳍鲷(Sparus latus)两种生长激素受体的cDNA克隆及组织表达分析

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海洋与湖沼 2011年第6期42卷 830-838页

作者：马细兰冷婷婷刘启智周立斌张勇林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室生命科学学院水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 华南师范大学生命科学学院广州510631 惠州学院生命科学系生物技术研究所惠州516007

采用RT-PCR方法克隆了黄鳍鲷两种生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)的cDNA序列,序列分析表明:GHR1开放阅读框为1935bp,共编码645个氨基酸,GHR2开放阅读框为1749bp,共编码583个氨基酸,GHR1与GHR2的氨基酸同源性为36.7%。GHR1和GHR2在分子结构上存在显著差异,GHR1胞外域有7个半胱氨酸残基而GHR2只有6个;GHR1胞内域有9个酪氨酸残基而GHR2只有5个,两者的结构差异表明两者可能具有不同的生物学功能。用Real-timeRT-PCR方法研究了GHR1和GHR2在各组织的分布情况,结果表明:GHR1和GHR2在所检测的10种组织中均有表达,其中以肝脏、肌肉、垂体表达量较高,且在大部分组织中GHR2表达量均高于GHR1。

关键词：黄鳍鲷生长激素受体 cDNA克隆 Real-time RT-PCR 组织表达

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低温对罗非鱼类影响的相关研究进展

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南方水产科学 2011年第6期7卷 77-82页

作者：段志刚吴金英李文笙中山大学生命科学学院水生经济动物研究所广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

罗非鱼类作为重要的水产养殖品种,耐受低温能力差成为限制其产量的重要原因。因此,很多学者对低温伤害罗非鱼的机理进行了多方面的研究,以期针对性地解决罗非鱼不耐寒的问题。文章综述了饵料、环境和鱼体自身等影响罗非鱼耐寒的因素,以... 详细信息

罗非鱼类作为重要的水产养殖品种,耐受低温能力差成为限制其产量的重要原因。因此,很多学者对低温伤害罗非鱼的机理进行了多方面的研究,以期针对性地解决罗非鱼不耐寒的问题。文章综述了饵料、环境和鱼体自身等影响罗非鱼耐寒的因素,以及低温对鱼体的伤害范围,包括宏观的生理变化和微观的细胞分子水平的改变,介绍了低温对罗非鱼的影响及相关机理研究,重点讨论了这些研究成果的重要指导意义。

关键词：罗非鱼低温生理环境

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养殖鱼类生殖内分泌调控相关功能基因的研究和应用

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中国水产科学 2010年第2期17卷 363-368页

作者：张勇李水生刘云刘晓春林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广东广州510275

新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitory hormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,kisspeptin刺激脑垂体促性腺激素(GtH,gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放。然而,在鱼类中,相关研究甚少。本研究室利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼(Danio rerio)、金鱼(Carassius auratus)中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH以及它们相关受体的基因cDNA序列。氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异。比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因。通过配体受体结合实验,证明2种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异。金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH以及它们相关受体在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控。通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH的核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,并且能诱导金鱼排卵,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌。然而,在离体实验中,2种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平。以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统。本文侧重对这项研究以及相关的研究成果进行归纳与分析,旨为深入探讨鱼类生殖内分泌调控相关功能基因提供参考。

关键词： kisspeptin GnIH GtH 生殖调控

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