检索结果-内蒙古大学图书馆

水产学报 2009年第1期33卷 53-59页

作者：周雯伊黄海尹绍武齐鑫张勇刘晓春陈国华林浩然海南大学海洋学院暨热带生物资源教育部重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

用肌肉注射HCG的处理方式(剂量为500 U/kg体重,每周注射1次,注射时间为6周)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明:花鳗鲡精子头部长径为(3.81±0.69)μm,短径为(1.24±0.15... 详细信息

用肌肉注射HCG的处理方式(剂量为500 U/kg体重,每周注射1次,注射时间为6周)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明:花鳗鲡精子头部长径为(3.81±0.69)μm,短径为(1.24±0.15)μm;尾部长度为(24.83±3.05)μm;精液pH为7.3~7.5,精子密度每毫升1.02×1010尾。精子的适宜盐度为15~20,其中盐度为15时,精子激活比率最高,快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0,pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡精子活力与寿命的影响趋势基本一致,金属离子浓度过高或过低都会抑制精子的活力、缩短快速运动时间和寿命。而MgCl2、CaCl2、KCl、NaCl溶液浓度为0.4~0.6 g/mL时,精子活力最好,最高激活比率为3级(41.0%~60.0%)。

关键词：花鳗鲡人工诱导精巢精子活力

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不同饥饿时段对黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)ghrelin基因表达的影响

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海洋与湖沼 2009年第3期40卷 313-318页

作者：马细兰张勇刘云黄卫人刘晓春周立斌中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 惠州学院生命科学系惠州516007

设计了黑鲷ghrelin基因的特异性引物,提取胃组织总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了ghrelin基因荧光实时定量PCR检测方法,以准确分析ghrelin基因... 详细信息

设计了黑鲷ghrelin基因的特异性引物,提取胃组织总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了ghrelin基因荧光实时定量PCR检测方法,以准确分析ghrelin基因在黑鲷摄食调节中的作用。运用建立的荧光实时定量PCR方法检测了不同饥饿时段(2天、7天)黑鲷胃、肠、下丘脑组织中ghrelin mRNA的表达变化。结果表明,饥饿2天(短期饥饿),黑鲷胃、肠组织中ghrelin mRNA表达显著上升(P<0.05),下丘脑ghrelin mRNA表达无显著变化(P>0.05);饥饿7天(长期饥饿),黑鲷胃、肠组织ghrelin mRNA表达比饥饿2天显著下降,但仍显著高于对照组,下丘脑ghrelin mRNA表达逐渐升高(P<0.05);在同一饥饿时间内不同组织ghrelin mRNA表达存在显著差异(P<0.05)。黑鲷不同组织ghrelin基因的表达随不同饥饿时段呈现出不同的变化趋势,推测ghrelin基因参与了黑鲷摄食调节的生物学过程。

关键词：黑鲷 ghrelin 实时定量PCR 饥饿

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鱼类ghrelin研究进展

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水生生物学报 2009年第3期33卷 546-551页

作者：马细兰刘晓春周立斌陈勇智张勇中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室、水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 惠州学院生命科学系惠州516007

摘要: 1999年日本学者Kojima, etal. 1 在大鼠胃组织中首次发现了一种多肽, 当这种多肽与生长激素促分泌素受体(Grow th horm one secretagogue receptor, GHS-R) 结合后, 能刺激生长激素(Grow th hormone, GH) 的分泌, 因此将其命名为... 详细信息

摘要: 1999年日本学者Kojima, etal. 1 在大鼠胃组织中首次发现了一种多肽, 当这种多肽与生长激素促分泌素受体(Grow th horm one secretagogue receptor, GHS-R) 结合后, 能刺激生长激素(Grow th hormone, GH) 的分泌, 因此将其命名为ghrelin (ghre 即grow 之意) 。

关键词：鱼 Ghrelin 生理功能

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雄尼罗罗非鱼肝脏2种生长激素受体基因表达的发育性变化

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中国水产科学 2009年第1期16卷 1-7页

作者：马细兰张勇刘晓春林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 惠州学院生命科学系广东惠州516007

选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰... 详细信息

选取同一批30日龄的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)鱼苗置于水泥池中自然饲养,分别于30、60、80、110、140日龄取样测定不同发育阶段雄鱼的特定生长率。用实时荧光定量PCR方法检测雄鱼肝脏中两种生长激素受体(GHR1和GHR2)的mRNA丰度。结果表明,30～110日龄,雄鱼特定生长率呈不断上升趋势,至80～110日龄达到最高,之后开始下降;雄鱼肝脏中2种GHR基因表达的发育性变化趋势不相同,30～110日龄,GHR1mRNA表达逐渐上升,110日龄达到最高,随后开始下降,其发育性变化与特定生长率显著正相关(R=0.96,P<0.01);GHR2mRNA表达在60日龄达到最高,80日龄急剧下降,之后又缓慢上升,其发育性变化与特定生长率无相关性。提示尼罗罗非鱼生长激素可能主要通过与肝脏中GHR1受体的结合启动其促生长机制,肝脏中GHR1mRNA表达具有显著的年龄依赖性,其表达对尼罗罗非鱼的生长有重要影响。

关键词：尼罗罗非鱼生长激素受体基因表达实时定量PCR 发育性变化

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荧光实时定量PCR检测尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因方法的建立及初步应用

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中山大学学报（自然科学版） 2009年第3期48卷 74-79页

作者：马细兰易诗白张勇李云黄卫人刘晓春林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室／／水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 惠州学院生命科学系广东惠州516007 上海海洋大学生命学院上海200090

为了准确分析尼罗罗非鱼生长激素(growth hormone,GH)、生长激素受体(growth hormone receptors,GHRs)和胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在早期发育阶段的作用,实验设计了尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因的特异性引物,提取垂体或肝脏总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了GH、GHR、IGF-Ⅰ基因荧光实时定量PCR检测方法。运用建立的荧光实时定量PCR检测了尼罗罗非鱼GH、GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化。结果表明在早期发育阶段,尼罗罗非鱼GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2的mRNA表达存在一定的互补关系;GH的表达与GHR1的表达呈显著正相关,提示GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2在尼罗罗非鱼早期发育的不同阶段起主导作用,且GH可能主要通过与GHR1的结合起作用。

关键词：尼罗罗非鱼荧光实时定量PCR GH GHR IGF-Ⅰ 发育性变化

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花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

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水生生物学报 2009年第2期33卷 214-221页

作者：黄海张勇刘晓春尹绍武杨丽萍朱培齐兴柱林浩然中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海口570228

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库... 详细信息

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测,文库的滴度为4.3×106cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43—3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-II)cDNA序列。序列分析表明,花鳗鲡mGnRHcDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—22位氨基酸)、mGnRH十肽(23—32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33—35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36—91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-IIcDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1—24位氨基酸)、cGnRH-II十肽(25—34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34—36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37—87位氨基酸)。序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-IIcDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%—78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%—67%)。采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。

关键词：花鳗鲡 cDNA文库促性腺激素释放激素克隆基因表达

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鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究

鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究

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“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议

作者：张勇李水生刘云刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室

研究表明,新型的神经内分泌因子kisspeptin与GnIH(gonadotropin-inhibitoryhormone)对哺乳动物的生殖轴起着直接而相反的调控作用,Kisspeptin刺激GtH(gonadotropin)的合成与释放,而GnIH抑制GtH的合成与释放。然而,在鱼类中,相关报道甚少。本研究利用比较基因组学技术,通过同线性分析结合分子生物学手段,在斑马鱼、金鱼中克隆得到了kisspeptin(kiss1、kiss2)与GnIH基因的cDNA序列。氨基酸序列同源比对结果显示:在脊椎动物中,kisspeptin的核心肽相对保守,而GnIH的核心肽在不同物种中则有较大的差异。比较基因组分析显示kisspeptin与GnIH基因在鱼类、两栖类、鸟类和哺乳类都维持着保守的同线性结构;并且,同线性的结果表明,鱼类kiss1与kiss2基因来源于早期的基因组复制,在漫长的进化过程中,哺乳类丢失了kiss2基因。通过配体受体结合实验,证明两种kisspeptins均能激活其相关受体GPR54(GPR54a、GPR54b),启动下游通路,但却存在一定的配体-受体选择性差异。金鱼、斑马鱼组织表达模式研究显示:kisspeptins与GnIH在生殖相关组织或区域(下丘脑、垂体、性腺)均有丰富的表达,提示kisspeptins与GnIH可能参与鱼类的生殖调控。通过化学合成金鱼kisspeptins与GnIH核心肽,在体注射成熟的雌性金鱼,发现kiss1能显著刺激金鱼LH的分泌,而kiss2不能;在高剂量的状况下,GnIH亦能有效抑制金鱼LH的分泌。然而,在离体实验中,两种kisspeptin与GnIH对金鱼垂体细胞LH的分泌均没有显著的影响,提示kisspeptins与GnIH对金鱼的LH调控可能发生于下丘脑水平。以上结果表明:与哺乳动物相类似,在鱼类生殖轴中也存在kisspeptins与GnIH的正负调控系统。

关键词： Kisspeptin GnIH 同源比对

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斑鳠血清促性腺激素的季节变化和埋植甲基睾酮对斑鳠促性腺激素分泌的影响

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中山大学学报（自然科学版） 2009年第5期48卷 103-107页

作者：周立斌刘晓春马细兰林浩然李大疆陈焜慈李恒颂邬国民中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室//水生经济动物研究所和广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 惠州学院生命科学系和生物技术研究所广东惠州516007 中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380

采用鲤鱼GtHβ-亚基(cGtHβ)的标准品和抗血清建立了斑鳠异源的促性腺激素(Gonadotropin,GtH)放射免疫测定技术,并对斑鳠性腺指数(Gonadosomatic index,GSI)和GtH分泌的季节变化,以及埋植甲基睾酮(17α-methyl-testosterone,MT)对斑鳠GtH分泌的影响进行了研究。结果表明:斑鳠雌雄鱼GSI值分别在5月份和6月份达到最高,与其他月份相比有显著性提高(P<0.05);斑鳠雌鱼血清GtH水平在6月份达到最高,与10月和12月相比有显著性提高(P<0.05),斑鳠雄鱼血清GtH水平在6月份达到最高,4月、10月和12月相比有显著性提高(P<0.05);雌雄鱼血清GtH水平表现出基本相同的变化趋势,并且血清GtH水平差异不显著(P>0.05);埋植MT对斑鳠雌雄鱼血清GtH水平有一定影响,在性腺发育初期能提高雌雄鱼血清GtH水平,而在性腺成熟和排卵期能降低雌雄鱼血清GtH水平。上述结果表明在斑鳠的人工繁殖中可以采用埋植MT的方法对斑鳠进行催熟和催产。

关键词：斑鳠促性腺激素季节变化 MT

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赤点石斑鱼脑垂体超微结构的初步研究

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中山大学学报（自然科学版） 2008年第4期47卷 68-71页

作者：舒琥刘晓春张勇袁桃安林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275 广州大学生命科学学院广东广州510006

应用透射电镜技术观察不同时期的性成熟赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)脑垂体的超微结构。结果表明,性成熟赤点石斑鱼脑垂体近椭圆形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。神经垂体主要由神经纤维、脑垂体细胞和微血管组成。其中神经分泌纤... 详细信息

应用透射电镜技术观察不同时期的性成熟赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)脑垂体的超微结构。结果表明,性成熟赤点石斑鱼脑垂体近椭圆形,由神经垂体和腺垂体两部分组成。神经垂体主要由神经纤维、脑垂体细胞和微血管组成。其中神经分泌纤维存在A(A1、A2)和B型神经分泌纤维。腺垂体中外侧部(PPD)腺细胞由嗜酸性的GH细胞和嗜碱性的TSH细胞及GTH细胞3类细胞构成。在不同的时期,GTH细胞内的分泌颗粒明显不同。

关键词：赤点石斑鱼脑垂体超微结构

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史氏鲟(Acipenser schrenckii)两种促性腺激素β亚基的原核表达

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中山大学学报（自然科学版） 2008年第2期47卷 89-92页

作者：胡红霞贝锦新刘晓春张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所和广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET-22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)... 详细信息

采用遗传工程方法,重组表达史氏鲟两种促性腺激素β亚基蛋白。选用原核表达载体pET-22b(+),分别插入史氏鲟GtHⅠ&Ⅱβ亚基成熟肽cDNA序列,构建成C端含有6个组氨酸(6-His)融合蛋白标签的表达质粒;分别转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)并诱导表达2个基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示重组融合蛋白相对分子质量分别为:GtHⅠβ亚基大约14 000,GtHⅡβ亚基15 000左右。分别用抗6个组氨酸融合标签的单克隆抗体及兔抗鲟鱼GTH多克隆抗体对2个表达蛋白进行Western-Blot分析,结果显示重组蛋白表达正确且有较高的免疫活性。GTHⅠβ重组蛋白在2 h就有明显的表达,6 h后随着时间增加表达量不再增加;25℃诱导重组蛋白产量比37℃诱导产量低。获得的重组蛋白质将可用于建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。

关键词：史氏鲟(Acipenser schrenckii) 促性腺激素 β-亚基蛋白质遗传工程

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