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科学养鱼 2015年第8期37卷 52-53页

作者：肖诗斌陶宇王振园李桂峰孙际佳刘丽华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

国内目前所谓鱼类工厂化养殖多为室内流水集约化养殖,与采用封闭循环水的工厂化养殖差别很大。在广东省惠州市财兴实业有限公司集约化花鳗鲡幼苗养殖场,我们进行了1个水处理周期（7天）的水质监测,试图通过水体中p H、溶氧、氨氮、亚硝... 详细信息

国内目前所谓鱼类工厂化养殖多为室内流水集约化养殖,与采用封闭循环水的工厂化养殖差别很大。在广东省惠州市财兴实业有限公司集约化花鳗鲡幼苗养殖场,我们进行了1个水处理周期（7天）的水质监测,试图通过水体中p H、溶氧、氨氮、亚硝酸盐的指标的变化,探讨养鳗池水质因子之间作用关系。

关键词：工厂化养殖水体水质流水养殖水质因子处理周期氨氮浓度养殖池水质监测封闭循环半封闭式

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神经分泌素Secretoneurin的研究进展

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广州大学学报（自然科学版） 2015年第5期14卷 18-23页

作者：舒琥杨丽冬李水生林婷婷广州大学生命科学学院广东广州510006 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广东广州510275 湛江师范学院基础教育学院广东湛江524037

神经分泌素（SN）是分泌粒蛋白II（SgII）前体最保守的序列,由33～34个氨基酸组成.在硬骨鱼类的世系中,可能发生特定的基因组复制事件产生SN的两个旁系同源基因：SNa和SNb.在所有已知SN肽的中央核心都包含“YTPQ-X-LA-X7-EL”这10个相... 详细信息

神经分泌素（SN）是分泌粒蛋白II（SgII）前体最保守的序列,由33～34个氨基酸组成.在硬骨鱼类的世系中,可能发生特定的基因组复制事件产生SN的两个旁系同源基因：SNa和SNb.在所有已知SN肽的中央核心都包含“YTPQ-X-LA-X7-EL”这10个相同的氨基酸.SN免疫反应（SN-ir）在哺乳动物主要的垂体细胞类型中发现.其内分泌功能最显著的例子是刺激金鱼垂体和小鼠LβT2促性腺激素细胞中促黄体生成素的释放,表明SN在生殖调控中有重要作用.研究表明,SN受体有可能是一个G蛋白偶联受体.文章对SN的起源、结构、调控垂体激素及其作用机制等方面的最新研究进展予以综述,并展望了SN今后的发展前景.

关键词：神经分泌素分泌粒蛋白II 促黄体生成素

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两种杂交石斑鱼及其亲本的形态差异分析

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水产学报 2014年第6期38卷 778-785页

作者：王燕张勇张海发黄文肖玲李水生杨宇晴林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东省海洋渔业试验中心

为研究两种杂交石斑鱼及其亲本的形态差异,实验采用传统形态学测定与现代框架测定结合的方法,测定了青龙斑(斜带石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)和虎龙斑(棕点石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)及其亲本的可数性状和可量性状,并进行相关统计分... 详细信息

为研究两种杂交石斑鱼及其亲本的形态差异,实验采用传统形态学测定与现代框架测定结合的方法,测定了青龙斑(斜带石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)和虎龙斑(棕点石斑鱼♀×鞍带石斑鱼♂)及其亲本的可数性状和可量性状,并进行相关统计分析。结果显示,在外观方面,青龙斑与亲本相比,其斜带边缘清晰连贯,而虎龙斑体侧分布有不同于亲本的大型环状斑;在外部形态框架方面,青龙斑背鳍前端及躯干形态都偏向于母本,呈现出背腹部压缩的细长型,而虎龙斑背鳍前端的框架形态偏向于母本、躯干的框架形态却偏向于父本,呈现出两种框架形态组合的特点。综合传统可量数据和框架数据聚类分析、判别分析和主成分分析的结果表明:两种杂交石斑鱼在外部形态方面更偏向于母本。

关键词：杂交石斑鱼亲本形态差异可数性状分析可量性状分析

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中国南方沿海13种石斑鱼类的分子系统进化关系分析

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中山大学学报（自然科学版） 2014年第4期53卷 123-130页

作者：陈兴汉郭梁李明明蒙子宁林浩然阳江职业技术学院生命科学与技术系广东阳江529566 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

石斑鱼类(Groupers)是世界性海洋经济鱼类,也是中国南方沿海省份重要的海水增养殖对象,其种类繁多,由于缺乏明显的种间外部形态区别特征,石斑鱼的分类一直是鱼类系统分类学的一个难题,存在着较多的争议和混淆。为了从分子水平揭示石斑... 详细信息

石斑鱼类(Groupers)是世界性海洋经济鱼类,也是中国南方沿海省份重要的海水增养殖对象,其种类繁多,由于缺乏明显的种间外部形态区别特征,石斑鱼的分类一直是鱼类系统分类学的一个难题,存在着较多的争议和混淆。为了从分子水平揭示石斑鱼类的系统进化关系,应用线粒体细胞色素b基因(Cyt b)及两个核糖体RNA基因(16S和12S)序列联合构建系统进化树对中国近海石斑鱼亚科3属13种进行种类鉴定及亲缘关系分析,探讨了石斑鱼类的分子系统进化。结果表明:①线粒体基因序列在石斑鱼类种间存在较大的变异,种内变异极小,是进行石斑鱼类种类鉴定较为适宜的分子标记;②所研究的3属13种石斑鱼类中,石斑鱼属与九棘鲈属的亲缘关系较近,与鳃棘鲈属的较远;③赤点石斑鱼和青石斑鱼、蜂巢石斑鱼与鲑点石斑鱼、斜带石斑鱼与棕斑石斑鱼两两间具有较近的亲缘关系。

关键词：石斑鱼类 Cyt b 16S rRNA 12S rRNA 分子系统进化

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广东沿海3个斜带石斑鱼养殖群体的RAPD和线粒体Cyt b基因序列变异分析

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南方水产科学 2014年第4期10卷 27-33页

斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）为中国南方重要的海水增养殖经济鱼类,但过度捕捞和人工养殖的快速扩张导致了其自然资源衰退和遗传多样性降低。文章采用随机扩增多态DNA（RAPD）和线粒体细胞色素b（Cyt b）基因序列分析方法,对惠... 详细信息

斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）为中国南方重要的海水增养殖经济鱼类,但过度捕捞和人工养殖的快速扩张导致了其自然资源衰退和遗传多样性降低。文章采用随机扩增多态DNA（RAPD）和线粒体细胞色素b（Cyt b）基因序列分析方法,对惠州、深圳和湛江3个斜带石斑鱼养殖群体进行了遗传多样性状况和遗传差异的研究。结果表明：1）相比较于线粒体Cyt b基因序列分析,RAPD技术在研究斜带石斑鱼种内遗传变异方面具有更高的灵敏性和多态性;2）相比较于其他已经报道的石斑鱼类,斜带石斑鱼的遗传多样性较低,RAPD检测到的多态位点百分率（P）为40.57%,究其原因,可能是受过度捕捞和人工养殖的影响;3）RAPD检测到的群体间遗传相似度（Ⅰ）高达0.967 1～0.980 8,而Cyt b的核苷酸多样性仅为0.003 8;斜带石斑鱼养殖群体间的遗传差异显然很小,具有相似的遗传背景。文章还探讨了斜带石斑鱼线粒体Cyt b基因的特点,并针对目前斜带石斑鱼的养殖现状提出了相应保护遗传多样性的对策与建议。

关键词：斜带石斑鱼 RAPD 线粒体Cyt b 遗传变异

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激素诱导斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)雄性化的研究

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海洋与湖沼 2014年第6期45卷 1317-1323页

作者：黄文杨宪宽徐新肖玲李水生赵会宏张海发张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275 华南农业大学动物科学学院广州510642 广东省海洋渔业试验中心惠州516081 海南大学海洋学院海口570228

石斑鱼属雌雄同体雌性先成熟鱼类,低龄鱼卵巢先成熟,表现为雌性,高龄鱼才性转变为雄性。本实验通过持续跟踪取样,分析了人工养殖条件下斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)在36月龄内的性腺发育过程,发现其性分化完成后,雌性卵巢在9月龄... 详细信息

石斑鱼属雌雄同体雌性先成熟鱼类,低龄鱼卵巢先成熟,表现为雌性,高龄鱼才性转变为雄性。本实验通过持续跟踪取样,分析了人工养殖条件下斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)在36月龄内的性腺发育过程,发现其性分化完成后,雌性卵巢在9月龄后开始发育。因此,采取投喂含有雄激素甲基睾酮(MT)饲料的方法,可以在石斑鱼卵巢发育之前,成功诱导8月龄的斜带石斑鱼幼鱼向雄性方向发育。结果表明,以MT 10mg/kg饲料的剂量投喂3个月能够有效诱导卵巢未发育的幼鱼往雄性方向发育;但停止投喂MT后,幼鱼精巢又开始出现退化,不会继续往雄性方向发展,而转变为雌性。以上结果表明,斜带石斑鱼性别决定和分化除了受遗传因子和内分泌调控外,还受到年龄、体型和群体、环境等因子的影响,人工投喂MT激素的作用并不能从根本上影响石斑鱼幼鱼的性腺发育的方向,只有在持续剂量的MT激素诱导下,石斑鱼幼鱼才能发育为成熟的雄鱼。

关键词：斜带石斑鱼甲基睾酮性别分化性腺发育

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LHRH-A、DA对施氏鲟脑垂体碎片释放GtH的影响

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水产学报 2014年第3期38卷 378-384页

作者：胡红霞张勇朱华李立成姚志刚北京市水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心(北京) 农业部都市农业(北方)重点实验室中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室

为了探讨在古老的软骨硬鳞鱼中促性腺激素(GtH)的双重内分泌调节作用,本实验设计用离体灌流的方法研究促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)和多巴胺(DA)对施氏鲟脑垂体碎片分泌GtH的影响。引入10、100和1 000 nmol/L 3个浓度的LHRH-A对施氏... 详细信息

为了探讨在古老的软骨硬鳞鱼中促性腺激素(GtH)的双重内分泌调节作用,本实验设计用离体灌流的方法研究促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)和多巴胺(DA)对施氏鲟脑垂体碎片分泌GtH的影响。引入10、100和1 000 nmol/L 3个浓度的LHRH-A对施氏鲟脑垂体碎片3次脉冲式刺激实验;每次间隔1 h,持续5 min,研究不同剂量LHRH-A对鲟鱼脑垂体释放GtH的作用;用200 nmol/L DA对施氏鲟脑垂体碎片持续2 h灌流后引入5 min的1 000nmol/L LHRH-A刺激实验,研究DA如何抑制鲟鱼脑垂体释放GtH。每5 min收集一管灌流液,用放射免疫测定法(RIA)检测灌流液中GtH的含量。结果显示,低剂量LHRH-A随着刺激引入脑垂体释放GtH出现波浪式的增加,中、高剂量出现释放延后现象。LHRH-A在10nmol/L到1 000 nmol/L范围内对刺激脑垂体释放GtH没有剂量依存关系。DA对施氏鲟脑垂体碎片GtH的分泌没有显著影响,但是可以抑制LHRH-A引起的GtH分泌,即DA不能抑制施氏鲟GtH的基础分泌,而只能抑制LHRH-A诱导的GtH分泌。研究结果证明,在高等硬骨鱼类中存在的双重神经内分泌调节在古老的鲟鱼中也存在。

关键词：施氏鲟脑垂体促黄体素释放激素类似物多巴胺促性腺激素离体灌流

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斜带石斑鱼GnIH及其受体在性腺中功能的初步研究

斜带石斑鱼GnIH及其受体在性腺中功能的初步研究

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第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：王晴晴刘晓春林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广州510275

促性腺激素抑制激素(GnIH),一种下丘脑神经肽,在鸟类等物种中有研究发现,GnIH及其受体在性腺中对生殖起着重要的作用。在之前的研究中已经克隆得到了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的GnIH及其受体。本研究对GnIH及其受体在斜带石斑... 详细信息

促性腺激素抑制激素(GnIH),一种下丘脑神经肽,在鸟类等物种中有研究发现,GnIH及其受体在性腺中对生殖起着重要的作用。在之前的研究中已经克隆得到了斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的GnIH及其受体。本研究对GnIH及其受体在斜带石斑鱼性腺中的功能进行了初步研究。用实时定量PCR分析检测了gGnIH及其受体gGnIHR在性腺中的分布,结果发现：gGnIH和gGnIHR在雄鱼精巢中的表达量显著性高于雌鱼卵巢中的表达量。对初级卵母细胞时期的2龄雌鱼在体注射预测合成的GnIH三种肽(gGnIH-Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ),检测性腺中LHR,FSHR,3βHSD1,StAR和cyp1 9a mRNA水平的影响。结果发现：gGnIH-Ⅱ能够显著性升高LHR的表达,gGnIH-Ⅰ能够显著性升高βHSD1和StAR的表达,而三种GnIH肽对FSHR和cyp19a mRNA的表达均没有显著性影响。结果显示,在斜带石斑鱼性腺中,GnIH可能通过促进合成类固醇激素合成相关酶和蛋白的表达而促进性类固醇激素的合成,从而实现对生殖的调控。在17α-甲基睾酮(MT)诱导斜带石斑鱼性逆转中,GnIH在各时期性腺中的mRNA水平均显著高于对照组,gGnIHR mRNA水平在各个时期性腺中均有升高趋势,且在兼性(第4周)时有显著性变化。βHSD1和StAR基因是在类固醇激素形成过程中的重要酶和蛋白。用荧光定量PCR测定了βHSD1和StAR基因在埋植MT过程中在性腺中的表达情况。βHSD1和StAR基因mRNA水平在埋植MT过程中性腺的表达与同期对照组比较呈现显著性升高的趋势,且在兼性(第4周)和雄性(第6周)时呈极显著差异。在兼性(第2周),兼性(第4周)和雄性(第6周)时,3βHSD1 mRNA水平在MT埋植组对于同期对照组分别增高了3倍,30倍和50倍,StAR mRNA水平分别增高了5倍,20倍和400倍。鉴于βHSD1和StAR基因在类固醇形成过程中的作用,该结果显示3βHSD1和StAR基因很可能参与了MT诱导性逆转,且起着重要作用。基于GnIH肽对3βHSD1和StAR基因具有调控作用,所以GnIH可能通过与其受体结合,参与MT诱导斜带石斑鱼性逆转的过程。

关键词：斜带石斑鱼 GnIH 性逆转 3βHSD1 StAR

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斜带石斑鱼NLRX1受体的克隆鉴定

斜带石斑鱼NLRX1受体的克隆鉴定

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第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：丁旭卢丹琪梁瑶思林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广州510275

NLR受体家族(NOD-like receptors,NLRs)是一类能够识别细胞内的病原相关危险信号(MAMP和DAMP)的模式识别受体,是固有免疫模式识别受体中的一个重要家族.NLR家族都含有NACHT结构域(是神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)、CIITA、HET-E和TP分子的缩... 详细信息

NLR受体家族(NOD-like receptors,NLRs)是一类能够识别细胞内的病原相关危险信号(MAMP和DAMP)的模式识别受体,是固有免疫模式识别受体中的一个重要家族.NLR家族都含有NACHT结构域(是神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)、CIITA、HET-E和TP分子的缩写)和LRR结构域(富含亮氨酸重复序列leucine-rich repeats).NLR通常在胞浆以非活化状态存在——通过LRR折叠使其靠近NACHT结构域,抑制了自发的多聚体化.当MAMP和DAMP直接或间接结合到LRR后,NLR分子通过构象上的变化,暴露出NACHT结构域,从而触发寡聚体化从而暴露出效应结构域.从而加强机体免疫系统探测微生物感染的能力,产生促炎细胞因子,调节免疫应答和炎症反应.目前NLR家族在鱼类中的免疫功能及其作用机制的研究报道还很少.本实验以斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为研究对象,研究了NLR成员NLRX1基因.通过对己报道鱼类NLRX1基因cDNA序列进行比对,根据保守区设计引物,利用反转录PCR和RACE技术首次克隆得到了斜带石斑鱼NLRX1基因cDNA全长.NLRX1的基因序列全长cDNA序列为3,164bp,其开放阅读框(open reading frame,ORF)为2,886bp.根据ORF序列推导该基因编码962个氨基酸组成的前体蛋白,包含107个氨基酸的N端结构域,177个氨基酸的NACHT结构域和668个氨基酸的5个LRR结构域,具有典型的NLRX1结构域.对不同物种NLRX1家族的氨基酸序列进行系统进化分析,结果显示,鱼类NLRX1单独形成一个分支,切与深裂眶锯雀鲷(Stegastes partitus)、秀美花鳉(Poecilia formosa)以及圆尾型孔雀鱼(Poecilia reticulata)的NLRX1亲缘关系较近.用Real time-qPCR检测NLRX1基因在斜带石斑鱼不同组织中表达分布,结果表NLRX1基因在外周组织中广泛表达,其中在胸腺中的表达量最高,在肠、头肾、脑中也有高水平的表达,在中肾、心、脾中表达量次之,在肝、眼中表达量较低.为进一步探索NLRX1在斜带石斑鱼固有免疫中的功能提供理论基础.

关键词：斜带石斑鱼 NLRX1 基因克隆

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斜带石斑鱼IFNγ的活性验证和功能研究

斜带石斑鱼IFNγ的活性验证和功能研究

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第五届“全国石斑鱼类繁育与养殖产业化”论坛

作者：彭弯卢丹琪孙艳汪婷梁瑶思丁旭张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物繁殖重点实验室广州510275

针对病害频发这一我国渔业健康持续发展所面临的最大问题,本文以斜带石斑鱼为研究对象,进一步探究干扰素γ(IFNγ)在病原识别和递呈过程中的关键作用.IFNγ是主要由NK细胞、CD4+ Thl和CD8+T细胞合成和分泌的具有广谱抗病毒功能和调节免... 详细信息

针对病害频发这一我国渔业健康持续发展所面临的最大问题,本文以斜带石斑鱼为研究对象,进一步探究干扰素γ(IFNγ)在病原识别和递呈过程中的关键作用.IFNγ是主要由NK细胞、CD4+ Thl和CD8+T细胞合成和分泌的具有广谱抗病毒功能和调节免疫系统的Ⅱ型干扰素.相比于哺乳动物中只发现的一种IFNγ基因,斜带石斑鱼中存在两种IFNγ(IFNγ1和IFNγ2).我们对斜带石斑鱼的IFNγ1和IFNγ2进行原核表达和纯化,得到两种IFNγ重组蛋白.为了验证重组蛋白IFNγ的活性,我们进行了呼吸爆发和NO检测实验.呼吸爆发离体实验表明,IFNγ1和IFNγ2均可以促进斜带石斑鱼脾脏细胞系和血淋巴细胞的呼吸爆发.离体实验还表明,IFNγ1和IFNγ2可提高斜带石斑鱼血淋巴细胞NO释放量.为了进一步的功能研究,我们检测了IFNγ在JAK/STAT1通路和TLR通路上相关因子的变化.离体实验表明,在lng/mL和10ng/mL的IFNγ1和IFNγ2分别孵育斜带石斑鱼脾脏细胞系3h后,STAT1及pSTAT1的表达量均出现不同程度的上调.用一定浓度的IFNγ和IFNγ2分别孵育斜带石斑鱼头肾的单核细胞不同时间后,lh,2h和4h的IL-1β均出现不同程度的上调,0.5h,lh和2h的TRAF6也出现了不同程度的上调,同时miR-21-5p,miR-146a-5p和miR-155-3p的表达也出现了不同程度的上调和下调.本研究结果表明,斜带石斑鱼IFNγ与哺乳类IFNγ相似,在免疫系统中起着重要的作用,能够激活相似的下游信号通路诱导免疫相关基因的表达.

关键词：斜带石斑鱼 IFNγ 活性验证 JAK/STAT1 TLR

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