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中国动物学会比较内分泌学专业委员会第十二次学术研讨会暨2018世界华人内分泌学家大会

作者：陈栋杨威韩士英杨惠夷岑欣刘江张利红张为民中山大学生命科学学院中山大学生命科学学院中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物重点实验室广州510275

脊椎动物机体内存在多种促性腺激素释放激素受体(GnRHR)类型,但有关不同GnRHR的生理功能差异目前仍有待进一步研究。本文中,我们从黄鳝脑克隆获得了 3种GnRH配体：pjGnRH(GnRH1),cGnRH-Ⅱ(GnRH2)和 sGnRH(GnRH3),并从黄鳝垂体克隆获得了... 详细信息

脊椎动物机体内存在多种促性腺激素释放激素受体(GnRHR)类型,但有关不同GnRHR的生理功能差异目前仍有待进一步研究。本文中,我们从黄鳝脑克隆获得了 3种GnRH配体：pjGnRH(GnRH1),cGnRH-Ⅱ(GnRH2)和 sGnRH(GnRH3),并从黄鳝垂体克隆获得了 2 种 GnRH 受体：GnRHR1(GnRHR Ⅱa)和 GnRHR2(GnRHR Ⅱb)。

关键词：黄鳝促性腺激素释放激素促性腺激素释放激素受体生长激素细胞生长激素释放

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蓝身大斑石斑鱼染色体核型分析

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海洋科学 2017年第12期41卷 46-50页

作者：刘苏杨宇晴张海发张勇吴锦辉黄锦雄石和荣广东省海洋渔业试验中心广东惠州516081 中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东广州510275

为了解蓝身大斑石斑鱼(Epinephelus tukula)的细胞生物学特征,作者采用体内注射PHA培养肾细胞法对蓝身大斑石斑鱼染色体核型进行了研究。结果表明,其染色体核型为2n=48t,属于石斑鱼属鱼类典型的高位类中原始类群,是石斑鱼属进化过程中... 详细信息

为了解蓝身大斑石斑鱼(Epinephelus tukula)的细胞生物学特征,作者采用体内注射PHA培养肾细胞法对蓝身大斑石斑鱼染色体核型进行了研究。结果表明,其染色体核型为2n=48t,属于石斑鱼属鱼类典型的高位类中原始类群,是石斑鱼属进化过程中出现较早的物种。

关键词：蓝身大斑石斑鱼(Epinephelus tukula) 核型染色体

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斜带石斑鱼Ctrp9的分子克隆、鉴定和功能研究

斜带石斑鱼Ctrp9的分子克隆、鉴定和功能研究

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2018年中国水产学会水产生物技术专业委员会第九届学术研讨会暨水产生物技术与绿色发展学术研讨会

作者：杨国坤秦超彬宋芹芹孙彩云李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东省重要经济鱼类健康养殖工程技术研究中心中山大学生命科学学院广东广州 510275

脂肪组织不仅是重要的能量器官,而且是重要的内分泌器官,能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子,比如脂联素(Adiponectin).Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能.CTRP9 作为adiponectin的同源... 详细信息

脂肪组织不仅是重要的能量器官,而且是重要的内分泌器官,能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子,比如脂联素(Adiponectin).Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能.CTRP9 作为adiponectin的同源类似物,具有类似的生理功能.在本研究中,我们首次从斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)克隆得到了CTRP9的全长基因序列.荧光定量PCR结果表明在正常生理状态下,CTRP9 主要在肾脏和脑区中表达;在饥饿状态下,肝脏的CTRP9 的mRNA水平与正常投喂组相比有非常显著的下降,再投喂后回复正常水平,但脂肪组织中的表达变化不明显,表明CTRP9 在不同能量状态和组织中的表达模式不同.

关键词： CTRP9 克隆代谢生殖斜带石斑鱼

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miR-181b-5p靶向mstn1调节吉富罗非鱼的肌肉生长

miR-181b-5p靶向mstn1调节吉富罗非鱼的肌肉生长

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2018年中国水产学会水产生物技术专业委员会第九届学术研讨会暨水产生物技术与绿色发展学术研讨会

作者：赵早亚李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东省重要经济鱼类健康养殖工程技术研究中心中山大学生命科学学院广东广州 510275

肌肉抑制素(myostatin,mstn),属于转化生长因子(Transforming Growth Factor beta,TGF-β)超家族的一员,被认为是骨骼肌生长的负调节因子.精确调控mstn的表达对鱼类的肌肉生长具有重要意义.miRNA(microRNA)是一类非编码RNA,一般与靶基因... 详细信息

肌肉抑制素(myostatin,mstn),属于转化生长因子(Transforming Growth Factor beta,TGF-β)超家族的一员,被认为是骨骼肌生长的负调节因子.精确调控mstn的表达对鱼类的肌肉生长具有重要意义.miRNA(microRNA)是一类非编码RNA,一般与靶基因的3'UTR结合,在转录后水平调节基因的表达,参与调控多种生理功能,包括骨骼肌的生长.本研究首先克隆了吉富罗非鱼的mstn1和mstn2 基因,荧光定量PCR的结果显示罗非鱼mstn1主要在罗非鱼的脑、白肌、肠和脂肪组织中表达,而mstn2 主要仅在脑区高表达,表明mstn1参与调控罗非鱼肌肉生长.生物信息学分析表明共1992种miRNA靶向mstn1 的3'UTR.将预测的 30 种miRNA mimics与mstn1 3'UTR进行双荧光素酶实验,结果表明miR-181a/b-5p,miR-30-3p,miR-200a 和 miR-27a 显著降低荧光强度.对miR-181b-5p 与 mstn1 的结合位点进行突变及双荧光素酶实验,结果显示miR-181b-5p不能降低突变型mstn1 载体的荧光强度,表明miR-181b-5p直接靶向mstn1 的 3'UTR序列.

关键词： miRNA mstn 吉富罗非鱼肌肉生长

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斜带石斑鱼Ctrp9的分子克隆、鉴定和功能研究

斜带石斑鱼Ctrp9的分子克隆、鉴定和功能研究

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中国动物学会比较内分泌学专业委员会第十二次学术研讨会暨2018世界华人内分泌学家大会

作者：杨国坤秦超彬宋芹芹孙彩云李文笙有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广东省重要经济鱼类健康养殖工程技术研究中心南海生物资源开发与利用协同创新中心中山大学生命科学学院广东广州 510275

脂肪组织不仅是重要的能量器官，而且是重要的内分泌器官，能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子，比如脂联素(Adiponectin).Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能.CTRP9作为adiponectin的同... 详细信息

脂肪组织不仅是重要的能量器官，而且是重要的内分泌器官，能够分泌大量具有生物活性的脂肪因子，比如脂联素(Adiponectin).Adiponectin作为重要的脂肪因子具有提高胰岛素敏感性、调节葡萄糖和脂肪代谢的功能.CTRP9作为adiponectin的同源类似物，具有类似的生理功能.

关键词： CTRP9 克隆代谢生殖斜带石斑鱼

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斜带石斑鱼AMH基因分布及相关功能初步研究

斜带石斑鱼AMH基因分布及相关功能初步研究

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第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛第二届鱼类工业化养殖学术研讨会

作者：韩玉龙王庆王晶赵密齐鑫李水生林浩然张勇中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH),也被称为缪勒氏管抑制物(Mullerian Inhibiting SubstanceMIS),由于在雄性胚胎发育过程中可以引起缪勒氏管退化,并阻止雌性生殖器官发育而命名。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)隶属鲈形...

抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH),也被称为缪勒氏管抑制物(Mullerian Inhibiting SubstanceMIS),由于在雄性胚胎发育过程中可以引起缪勒氏管退化,并阻止雌性生殖器官发育而命名。斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)隶属鲈形目、鲈亚目、鮨科、石斑鱼亚科、石斑鱼属。属于自然性逆转的雌雄同体鱼类,可以作为研究脊椎动物性别分化的模型。我们在克隆得到斜带石斑鱼AMH的cDNA序列全长的基础上,通过原核表达,制备了特异性AMH的多抗,免疫组化实验表明AMH在精巢中主要是在精小囊周围的支持细胞中表达,在卵巢中主要集中在卵母细胞周围的颗粒细胞和滤泡细胞中表达。我们用甲基睾酮MT埋植实验诱导斜带石斑鱼性逆转。我们检测在此过程中AMH的表达变化,发现在MT埋植过程的12天,24天,36天和96天,AMH的表达量相比对照组有显著的升高。我们进一步克隆得到了AMH的启动子序列并进行分析发现启动子上有雄激素反应结合元件。我们推测AMH在MT诱导的性逆转过程中受到了雄激素的调控。我们的实验结果对AMH的功能有了初步的了解。

关键词：

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斜带石斑鱼TLR13及其转运伴侣UNC93B1的功能研究

斜带石斑鱼TLR13及其转运伴侣UNC93B1的功能研究

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第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛第二届鱼类工业化养殖学术研讨会

作者：于雪梁瑶思张勇林浩然卢丹琪中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

针对石斑鱼病害频发这个阻碍我国渔业可持续发展的重大问题,本文以鱼类先天性免疫功能为基础,首次对斜带石斑鱼Toll样受体13 (TLR13)基因的功能特点、病原相关分子模式的识别及激活的信号通路进行了较为综合的研究.Toll样受体(Toll-like... 详细信息

针对石斑鱼病害频发这个阻碍我国渔业可持续发展的重大问题,本文以鱼类先天性免疫功能为基础,首次对斜带石斑鱼Toll样受体13 (TLR13)基因的功能特点、病原相关分子模式的识别及激活的信号通路进行了较为综合的研究.Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)是主要的天然免疫受体,能够参与识别多种病原相关分子模式PAMPs(Pathogen-associated molecular pattern),并激活下游信号通路的级联反应,促进细胞因子的分泌,协助机体抵御病原分子的入侵.TLR 13位于胞内细胞器膜上,已发现小鼠TLR13可识别细菌及病毒RNA上的一段保守序列,并通过髓样分化因子88依赖的信号通路激活下游的免疫反应.本研究克隆得到的斜带石斑鱼TLR 13全长3559 bp,其开发阅读框共编码948个氨基酸残基.TLR13mRNA在脑、胸腺、头肾、肠道等组织中有较高的表达量,并在细菌23SrRNA片段类似物ORNSa 19刺激斜带石斑鱼脾脏细胞(grouper spleen细胞,GS细胞)后显著性表达上调.细胞免疫荧光实验研究表明,石斑鱼TLR13在293 T细胞及GS细胞中的定位模式相似,大部分与内质网共定位,部分与早期内体共定位.双荧光素酶报告基因检测发现,过表达石斑鱼TLR 13后,ORN Sa 19可以激活下游IFN-β的启动子活性.我们还研究了TLR13在一种常见鱼类致病菌——副溶血弧菌,侵袭的过程中发挥的作用.结果表明,副溶血弧菌中分离的RNA可以显著性激活TLR 13的表达,而在GS细胞中敲除TLR13后会显著性抑制副溶血弧菌RNA介导激活的细胞因子,表明TLR 13在抵御细菌入侵的过程中发挥重要的作用.此外,我们还克隆得到了斜带石斑鱼UNC93B1的全长cDNA序列并研究其表达模式及亚细胞定位,发现与TLR 13的亚细胞定位一致,判定其可参与TLR 13由早期内体到内质网的转运.采用SiRNA敲降UNC93Bl发现能够对多种病原相关分子模式诱导的细胞因子产生影响.通过上述研究,首次证实了鱼类TLR 13在识别细菌性病原体的过程中发挥重要的作用,完善了鱼类Toll样受体家族的研究,证实了在斜带石斑鱼中UNC93B1能够参与TLR 13介导的免疫调节,同时了解鱼类识别细菌类病原体的机制,为鱼类的抗病选育提供了坚实的理论依据.

关键词：斜带石斑鱼 TLR13 UNC93B1 ORNSa19 SiRNA敲降

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褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)基因组序列的构建

褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)基因组序列的构建

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第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛第二届鱼类工业化养殖学术研讨会

作者：王臀东刘云李水生张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)又称棕点石斑鱼、老虎斑,是辐鳍鱼纲、鲈形目、鲈亚目、鮨科、石斑鱼亚科、石斑鱼亚属的一个物种,为暖水性岛礁鱼类.分布于红海、印度洋非洲东岸至太平洋,在我国主要分布地东海和南海,由于其味道...

褐点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)又称棕点石斑鱼、老虎斑,是辐鳍鱼纲、鲈形目、鲈亚目、鮨科、石斑鱼亚科、石斑鱼亚属的一个物种,为暖水性岛礁鱼类.分布于红海、印度洋非洲东岸至太平洋,在我国主要分布地东海和南海,由于其味道鲜美、蛋白质品质高,近年来已广东、海南等南方沿海省市的重要经济鱼类.同时老虎斑也是雌雄同体先雌后雄鱼类,对其进行全基因组测序,和功能基因组的研究,有助于阐明其特殊生物学性状.我们选取一条成年雌性褐点石斑鱼进行全基因组从头测序.从褐点石斑鱼血液中提取DNA并构建三个不同插入片段长度的测序文库.其中,paired-end文库两个、平均插入片段长度为400bp,mate-pair文库两个、插入片段平均长度分别约2Kb和9Kb.作用Illumina 2000测序仪测序,得到总测序量约160GB,测序深度约150倍.使用Soapdenovo (K-mer=75)和fermi对reads进行组装,得到基因组序列1.13G,其contig N50长度为44 Kb,scaffold N50为841Kb.从基因组序列中预测得到protein-coding的基因23963个.利用斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)氨基酸序列对预测基因进行blast验证,比对显示92.4％(22139)的基因覆盖率在60％以上.同时,从转录组序列在基因上的覆盖率看,大部分基因的转录组序列覆盖率在50％以上.褐点石斑鱼基因组序列的构建对于解析石斑鱼性别逆转、生长、生殖发育等性状的分子机制具有重要意义,也为石斑鱼良种分子育种和鱼类性别决定机制的深入研究提供了宝贵的遗传资源.

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Cyp19a1a在斜带石斑鱼早期性分化中的功能研究

Cyp19a1a在斜带石斑鱼早期性分化中的功能研究

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第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛第二届鱼类工业化养殖学术研讨会

作者：黄敏伟王庆彭诚陈慧敏张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

斜带石斑鱼是一种雌雄异体,雌性先熟的鱼类,其早期性腺发育过程大致可以分为三个阶段：性原基形成期、卵巢分化期以及成熟卵巢期。我们收集石斑鱼在性分化各时期性腺样本进行转录组测序,发现雌激素合成关键酶编码基因(cyp19a1a)在性腺...

斜带石斑鱼是一种雌雄异体,雌性先熟的鱼类,其早期性腺发育过程大致可以分为三个阶段：性原基形成期、卵巢分化期以及成熟卵巢期。我们收集石斑鱼在性分化各时期性腺样本进行转录组测序,发现雌激素合成关键酶编码基因(cyp19a1a)在性腺分化中的表达显著升高,而fshr则在性别分化时期高表达,而在性别分化完成后表达下降,因此我们提出假设：cyp19a1a在性腺中上调表达是石斑鱼向雌性分化的关键,而fsh/fshr信号和可能激活cyp19a1a的表达。以此,我们对性腺未开始分化的斜带石斑鱼进行AI(芳香化酶抑制剂,抑制cyp19a1a功能),雄激素(MT)以及雄激素+雌激素(E2)投喂,结果表明,抑制cyp19a1a的功能使斜带石斑鱼往雄性方向分化;而早期MT诱导使其性腺萎缩,同时投喂MT+E2则促进了其性腺的分化进程。同时在投喂AI+MT时,cyp19a1a和fshr的表达量被显著抑制。综上,我们的研究发现cyp19a1a在斜带石斑鱼早期性分化中起着关键性作用,而且可能受到fsh/fshr信号调控。

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斜带石斑鱼性别相关的表观遗传学修饰研究

斜带石斑鱼性别相关的表观遗传学修饰研究

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第八届全国石斑鱼类繁育与养殖产业化论坛第二届鱼类工业化养殖学术研讨会

作者：余泽庶刘云张勇林浩然中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室广州510275

基因组的表观遗传修饰在基因的表达调控中发挥广泛而重要的作用，其中比较关键的是DNA甲基化和组蛋白的甲基化、乙酰化修饰，其他的还有DNA与组蛋白的糖基化、磷酸化修饰等.DNA甲基化通常与基因表达的下调相关.组蛋白修饰根据修饰位点...

基因组的表观遗传修饰在基因的表达调控中发挥广泛而重要的作用，其中比较关键的是DNA甲基化和组蛋白的甲基化、乙酰化修饰，其他的还有DNA与组蛋白的糖基化、磷酸化修饰等.DNA甲基化通常与基因表达的下调相关.组蛋白修饰根据修饰位点和修饰方式可分为几类，其中组蛋白H3的第4位赖氨酸上三甲基化(H3K4me3)和组蛋白H3的第27位赖氨酸上的乙酰化(H3K27ac)修饰被认为与转录激活相关;组蛋白H3的第27位赖氨酸上三甲基化(H3K27me3)和组蛋白H3的第9位赖氨酸上三甲基化(H3K9me3)被认为与转录抑制相关.

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