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2008-2012年上海市肠炎沙门氏菌分离株毒力基因筛查与ERIC-PCR分型

食品科学 2015年第14期36卷 165-170页

作者：庄孝飞周秀娟许学斌史贤明施春雷上海交通大学农业与生物学院中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海200240 上海市疾病预防控制中心上海200336

采集上海地区2008—2012年来自临床病人和市售食品的肠炎沙门氏菌分离株90株;采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,对存在于毒力岛SPI和毒力质粒上的9种常见毒力基因携带情况进行了调查;并采用本实验优化的肠杆菌基... 详细信息

采集上海地区2008—2012年来自临床病人和市售食品的肠炎沙门氏菌分离株90株;采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法,对存在于毒力岛SPI和毒力质粒上的9种常见毒力基因携带情况进行了调查;并采用本实验优化的肠杆菌基因间保守重复序列-聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR,ERIC-PCR)方法对这些分离株进行亚分型。结果显示:毒力基因inv H、sop E、sug R的携带率为100.0%(90/90),iac P、avr A、rhu M、prg K均为98.9%(89/90),而spv B、spv C分别为85.6%(77/90)和78.9%(71/90)。优化的ERIC-PCR体系能够较好地区分8种主要沙门氏菌血清型,共17株菌,辛普森指数(D值)为0.970 6。然而,90株肠炎沙门氏菌分离株却具有一致的ERIC-PCR指纹图谱。在所调查分离株中,毒力基因的携带率较高,尤其是inv H、sop E和sug R,对人类健康存在较大威胁;ERIC-PCR虽然可用于区分沙门氏菌不同血清型,但对肠炎沙门氏菌的分型效果不佳。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力基因 ERIC-PCR分型

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肠炎沙门氏菌响应蛋清逆境的蛋白质组学分析副溶血性弧菌在虾和三文鱼两种不同介质中生长异质性的比较

肠炎沙门氏菌响应蛋清逆境的蛋白质组学分析副溶血性弧菌在虾和三...

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中国食品科学技术学会第十四届年会暨第九届中美食品业高层论坛

作者：秦晓杰史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

肠炎沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌,通常以鸡蛋及蛋制品为媒介传播致病。然而,肠炎沙门氏菌抵抗蛋清逆境(如碱性pH、铁缺乏、抑菌蛋白或肽等)的存活机制尚不完全清楚。本研究运用iTRAQ和LC-MS/MS联用技术分析肠炎沙门氏菌在蛋清中... 详细信息

肠炎沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌,通常以鸡蛋及蛋制品为媒介传播致病。然而,肠炎沙门氏菌抵抗蛋清逆境(如碱性pH、铁缺乏、抑菌蛋白或肽等)的存活机制尚不完全清楚。本研究运用iTRAQ和LC-MS/MS联用技术分析肠炎沙门氏菌在蛋清中的差异表达蛋白,并进一步通过RT-q PCR对差异蛋白的转录水平进行验证。结果显示,共鉴定到303个差异蛋白(变化倍数>1.5或<0.667,P<0.05),其中表达上调166个,表达下调137个,主要涉及铁离子获得系统,氨基酸、维生素和能量代谢,细胞膜结构和功能完整性,ABC转运,双组分调控,转录调控,翻译,DNA损伤修复,细菌趋化,致病性,其它相关蛋白和未知功能蛋白。选择铁离子获得系统及细菌趋化相关的差异表达蛋白(EntA,EntB,FepA,FepB,IroB,Fes,CheW及MotA)进行转录水平分析,结果显示与蛋白水平变化趋势是一致的。本研究揭示了肠炎沙门氏菌应对蛋清逆境时蛋白质表达模式的变化特征,为深入了解肠炎沙门氏菌在蛋清中的存活机制奠定基础。

关键词：肠炎沙门氏菌蛋清存活机制蛋白质组学

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上海市肠炎沙门氏菌毒力基因调查与ERIC-PCR分型

上海市肠炎沙门氏菌毒力基因调查与ERIC-PCR分型

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：庄孝飞施春雷中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

本研究调查了上海市不同年份的肠炎沙门氏茵（Salmonella Enteritidis）的毒力基因的携带情况,并使用分子分型方法,分析了茵株间的差异。采集2008年至2012年间,上海市不同地区包括医源性与食源性共90株肠炎沙门氏菌。所筛查的毒力基因... 详细信息

本研究调查了上海市不同年份的肠炎沙门氏茵（Salmonella Enteritidis）的毒力基因的携带情况,并使用分子分型方法,分析了茵株间的差异。采集2008年至2012年间,上海市不同地区包括医源性与食源性共90株肠炎沙门氏菌。所筛查的毒力基因分别来自于常见的毒力岛SPI-1（invH、sopE、iacP、prgK、avrA）,毒力岛SPI-3（sugR、rhuM）,毒力质粒（spvB、spvC）。结果显示,90株肠炎沙门氏菌毒力基因invH、sopE、sugR携带率为100.0%,iacP、avrA、rhuM为98.9%,prgK为97.8%,spvB、spyC携带率分别为86.7%、80.0%。通过ERIC-PCR对90株不同年份不同地区的肠炎沙门氏菌进行分型。结果显示不同地区及不同年份的肠炎菌株之间除24号菌株外其他并无差异。结论:所调查毒力基因的携带率高,尤其是invH、sopE、sugR,对人类健康存在较大的威胁。

关键词：肠炎沙门氏菌毒力基因 ERIC-PCR分型

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金黄色葡萄球菌新型耐热核酸酶编码基因(nuc2)的定点突变与功能分析

金黄色葡萄球菌新型耐热核酸酶编码基因(nuc2)的定点突变与功能分...

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：陈丽敏史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),又名葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease),是金黄色葡萄球菌特有的一个重要的毒力因子,属于非特异性核糖核酸酶。Nuc1和Nuc2是两种同时存在于金黄色葡萄球菌中的耐热核酸酶。研究表明,在体外表... 详细信息

耐热核酸酶(Thermonuclease,TNase),又名葡萄球菌核酸酶(Staphylococcal nuclease),是金黄色葡萄球菌特有的一个重要的毒力因子,属于非特异性核糖核酸酶。Nuc1和Nuc2是两种同时存在于金黄色葡萄球菌中的耐热核酸酶。研究表明,在体外表达的情况下,Nuc2的核酸酶活性与热稳定性比Nuc1要弱。本研究旨在探究F60、A62、T102和Y135这四个关键位点对Nuc2较Nuc1酶活减弱和热稳定性降低的影响。通过对新型耐热核酸酶Nuc2的编码基因进行定点突变,成功构建了5个Nuc2的单点和多点突变体并对其进行诱导表达,之后再对表达的野生型和突变型耐热核酸酶进行了特性分析。结果显示,重组蛋白的酶活大小为Nuc1>T102M/Y135V>T102M>Nuc2>F60V/A62L。由此可见,Nuc2中T102和Y135这两个氨基酸的差异是造成Nuc2较Nuc1酶活减弱和热稳定性降低的主要因素。

关键词：耐热核酸酶定点突变酶活

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沙门氏菌特异的分子检测靶点的筛选与评价

沙门氏菌特异的分子检测靶点的筛选与评价

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：周秀娟史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

沙门氏菌是重要的食源性致病菌,有多达2600个血清型,对其鉴定与血清分型是食品安全监测和临床诊断中必不可少的环节。快速和高准确率的聚合酶链式反应（PCR）具有巨大的应用潜力。本研究采用比较基因组学的方法,获得了412个沙门氏菌候... 详细信息

沙门氏菌是重要的食源性致病菌,有多达2600个血清型,对其鉴定与血清分型是食品安全监测和临床诊断中必不可少的环节。快速和高准确率的聚合酶链式反应（PCR）具有巨大的应用潜力。本研究采用比较基因组学的方法,获得了412个沙门氏菌候选检测靶点,GO分析发现,与致病性相关的基因呈现显著的富集现象。随后,对这些候选靶点的对应引物进行特异性和灵敏度的评估,得到15个具有良好性能的靶点,即:在151个沙门氏菌中有单一明亮的扩增条带,在34个非沙门氏菌中无扩增。同时,检测限分别为27.6 fg/PCR（Salmonella Enteritidis ATCC 13076）,17.8fg/PCR（Salmonella Typhimurium ATCC 14028）。另外,已验证靶点与看家基因具有高度相似的多基因聚类树,特别是在沙门氏茵血清型差异区分方面。而且,39株沙门氏菌（属于6个血清型）靶点S9对应的测序结果,进一步表明特异检测靶点具有潜在的血清分型能力。总之,15个已验证靶点可用于沙门氏菌PCR快速检测。并且它们极有可能具备检测与血清分型的双重作用。

关键词：沙门氏菌比较基因组学检测靶点血清预测

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氨基化磁珠的制备与生物应用

氨基化磁珠的制备与生物应用

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：白亚龙史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

本研究用FeO作为磁性核心,二氧化硅作为包被层,用两种主要的方法合成氨基化的硅包磁性纳米粒子,其一,先合成硅包磁性纳米粒子后氨基化修饰;其二,一壶法直接合成氨基化硅包磁性纳米粒子。通过分光光度法进行测量,一壶法比后修饰法表面带... 详细信息

本研究用FeO作为磁性核心,二氧化硅作为包被层,用两种主要的方法合成氨基化的硅包磁性纳米粒子,其一,先合成硅包磁性纳米粒子后氨基化修饰;其二,一壶法直接合成氨基化硅包磁性纳米粒子。通过分光光度法进行测量,一壶法比后修饰法表面带有更为丰富的氨基基团。电镜表征表明,氨基化硅包磁性纳米粒子表面带有一层网状结构,导致带有大量的氨基基团。氨基化磁性纳米粒子既可以非特异性地吸附生物检测物的基因组DNA,又可以特异性地分离目标检测物的特定核酸序列。实验表明,包被良好的磁性纳米粒子可以避免FeO对PCR的抑制。此外,通过表面封闭可以直接加入到检测体系（如PCR）进行检测从而减少洗脱等步骤。对比实验表明,不管是非特异性的吸附基因组DNA还是特异性的杂交分离核酸序列.表面携带更多氨基基团的硅包磁性纳米粒子具有更强的分离能力。

关键词：氨基化磁性纳米粒子分离 DNA 聚合酶链式反应

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单核细胞增生李斯特菌食品分离株菌膜形成能力及其消毒剂抗性特征

单核细胞增生李斯特菌食品分离株菌膜形成能力及其消毒剂抗性特征

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中国食品科学技术学会第十二届年会暨第八届中美食品业高层论坛

作者：周秀娟王文凯史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

单核细胞增生李斯特菌是一种具有较高致死率的食源性致病菌,能够以菌膜状态长期存在于材料表面,且菌膜状态增强了该菌对工业消毒剂的抵抗力。本研究以40株不同来源的单核细胞增生李斯特菌食品分离株为对象,研究它们的菌膜形成能力及菌... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌是一种具有较高致死率的食源性致病菌,能够以菌膜状态长期存在于材料表面,且菌膜状态增强了该菌对工业消毒剂的抵抗力。本研究以40株不同来源的单核细胞增生李斯特菌食品分离株为对象,研究它们的菌膜形成能力及菌膜状态下对消毒剂的抗性特征。结果显示:不同菌株之间的菌膜形成量存在差异,其中1/2b血清型菌株菌膜形成能力较强,冷冻处理加剧了菌膜形成能力的差异。消毒剂双氧水（HO）对菌膜的最低抑制浓度为7500-17500 ppm,消毒剂二氧化氯（ClO）对菌膜的最低抑制浓度为10-30 ppm,前者在国标推荐剂量下无法彻底灭活菌膜中的单核细胞增生李斯特菌,且灭菌效果随菌膜形成量的提高而下降;后者表现出较好的灭菌效果,且不受菌膜形成量的影响。本研究结果为控制和灭活菌膜中的单核细胞增生李斯特菌提供了指导性意见。

关键词：单核细胞增生李斯特菌菌膜消毒剂双氧水二氧化氯

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上海市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况调查及血清分型

上海市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况调查及血清分型

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：王文凯史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

本研究旨在了解上海市食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况,为制定相应的预防措施提供参考依据。采用国家标准GB/T 4789.30-2008的方法,分离、鉴定上海市食品中单核细胞增生李斯特菌,并采用多重PCR的方法,对阳性分离株进行血清分型。2... 详细信息

本研究旨在了解上海市食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况,为制定相应的预防措施提供参考依据。采用国家标准GB/T 4789.30-2008的方法,分离、鉴定上海市食品中单核细胞增生李斯特菌,并采用多重PCR的方法,对阳性分离株进行血清分型。2013年6月至2014年6月,采集上海地区8类食品样品共计608份,其中40份检出单核细胞增生李斯特菌,总检出率为6.58%。各类食品的检出率分别为:生乳5.56%(7/126),生肉10.71%(15/95),速冻食品9.90%(10/101),蔬菜2.02%(2/99),肉制品7.27%(4/55),水产品4.17%(2/48),乳制品0(0/53),豆制品0(0/30)。各类食品中单核细胞增生李斯特菌污染水平存在差异,其中,生肉、速冻食品污染较为严重,应加强监督管理。多重PCR结果显示,40株阳性分离株被分为三个血清组:1/2a或3a(n=27),8株1/2b或3b或7(n=8),1/2c或3c(n=5)。阳性分离株主要为1/2a或3a血清型(67.5%),为常见的致病血清型,存在安全隐患,应引起卫生部门的重视。

关键词：单核细胞增生李斯特菌血清型食品上海

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酒精胁迫对肠炎沙门氏菌抗逆性的影响

酒精胁迫对肠炎沙门氏菌抗逆性的影响

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：何守魁周秀娟施春雷史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

肠炎沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌。在生命周期中,肠炎沙门氏菌可能遇到温和的酒精压力。然而,亚致死环境压力可能增强细菌对致死剂量的同种或其他类型压力的耐受性。本研究旨在探究酒精胁迫能否增强肠炎沙门氏菌对酒精(15%)、低温... 详细信息

肠炎沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌。在生命周期中,肠炎沙门氏菌可能遇到温和的酒精压力。然而,亚致死环境压力可能增强细菌对致死剂量的同种或其他类型压力的耐受性。本研究旨在探究酒精胁迫能否增强肠炎沙门氏菌对酒精(15%)、低温(-20℃,4℃)、高温(55℃)和高盐(10%NaCl)的抵抗能力。结果表明,酒精(2.5%-10%,v/v)胁迫处理1h后,肠炎沙门氏菌的酒精耐受性显著提高。当酒精浓度从2.5%增加到5.0%时,肠炎沙门氏菌的酒精耐受性随之增强。但是5.0%、7.5%和10%酒精胁迫处理的肠炎沙门氏菌在酒精耐受能力上并没有显著差异。此外,5.0%酒精胁迫处理能增强肠炎沙门氏菌对-20℃的抗性,但并没提高对4℃、55℃及10%NaCl的耐受性。这些研究结果将给风险评估和沙门氏菌防控措施的建立提供理论依据和数据支持。

关键词：酒精肠炎沙门氏菌胁迫抗逆性食品安全

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影响副溶血弧菌耐热直接溶血毒素表达的外界因素

影响副溶血弧菌耐热直接溶血毒素表达的外界因素

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中国食品科学技术学会第十一届年会

作者：张茜王大鹏史贤明中美食品安全联合研究中心陆伯勋食品安全研究中心微生物代谢国家重点实验室上海交通大学

本研究旨在评价不同环境因素对于副溶血弧菌耐热直接溶血素(TDH)表达的影响。耐热直接溶血素为副溶血弧茵主要致病因子,其分泌受到多种环境因素影响,如温度,pH值,胆酸盐等。本研究通过配制不同培养基,拟筛选出影响耐热直接溶血素表达的... 详细信息

本研究旨在评价不同环境因素对于副溶血弧菌耐热直接溶血素(TDH)表达的影响。耐热直接溶血素为副溶血弧茵主要致病因子,其分泌受到多种环境因素影响,如温度,pH值,胆酸盐等。本研究通过配制不同培养基,拟筛选出影响耐热直接溶血素表达的主要因素。本实验以副溶血弧茵ATCC33846为实验对象,调节盐(NaCl)浓度,pH值,培养基种类,培养温度,培养时间,牛黄胆酸(TCA)的添加量,根据正交实验表设计25组平行试验。以25组培养基分别培养副溶血弧茵ATCC33846后,将上清与等体积的1%人血细胞混合。37℃放置2h,4500 r/min离心3min后,OD检测样品吸光值,并以H=(实验组-对照组)/(A-A)×100%计算毒素溶血率。获得到溶血率最高的培养基后,再以单因素及双因素实验确定毒素活性主要影响因素。结果显示,以含有2%Nacl,2mmol TCA且pH=7的LB为培养基,42℃培养12h时副溶血弧茵所分泌的溶血毒素溶血率最高。对各因素分析后发现,TCA的加入及温度的升高可极大促进溶血毒素的分泌,而pH值的降低亦对毒素分泌起到一定的促进作用。本研究结果显示,TCA、温度及pH值均可影响副溶血弧菌直接耐热溶血素的分泌:为了降低副溶血弧菌溶血毒素对消费者健康的影响,水产品在储运期间应避免高温和低pH值环境。

关键词：副溶血弧菌耐热直接溶血毒素盐浓度温度 pH值培养基培养时间牛黄胆酸

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