检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验方剂学杂志 2025年第11期31卷 1-9页

作者：任涵赵婉竹王舒舒蔡瑞张远红黄圣意黄金玲安徽中医药大学中西医结合学院安徽中医药大学中医学院中药复方安徽省重点实验室

目的：探讨苓桂术甘汤对心肌梗死（MI）后心室重构（VR）小鼠及其对Ras同源基因家族成员A（Rho A）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响。方法：通过手术结扎左前降支冠状动脉法建立小鼠心肌梗死模型，共60只，分为假... 详细信息

目的：探讨苓桂术甘汤对心肌梗死（MI）后心室重构（VR）小鼠及其对Ras同源基因家族成员A（Rho A）/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响。方法：通过手术结扎左前降支冠状动脉法建立小鼠心肌梗死模型，共60只，分为假手术组，模型组，苓桂术甘汤低、中、高剂量组(2.34、4.68、9.36 g·kg-1)及卡托普利组(3.25 mg·kg-1)，每组10只。灌胃4周后使用小动物多普勒超声检测各组小鼠心功能水平；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠心肌组织形态学变化；马松（Masson）染色计算小鼠心肌组织胶原纤维沉积率；小麦胚芽凝集素（WGA）染色比较各组小鼠心肌细胞横截面积；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测纤维化相关蛋白，包括α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、Ⅲ型胶原蛋白（ColⅢ）、基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）；细胞凋亡相关蛋白，包括B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Bcl-2、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、切割型胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）的表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测通路相关基因Rho A、ROCK1、ROCK2 m RNA表达；Western blot检测Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平。结果：与假手术组比较，模型组小鼠心功能水平显著下降，心肌组织形态学发生明显变化，心肌细胞横截面积显著增大（P<0.01）；纤维化相关蛋白α-SMA、MMP-2、ColⅠ、ColⅢ表达显著上调（P<0.01）,TIMP1蛋白表达显著下降（P<0.01）；细胞凋亡相关蛋白Bax的表达显著上调（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下降（P<0.01）;Rho A、ROCK1、ROCK2的m RNA和蛋白表达显著上调（P<0.01）。与模型组比较，苓桂术甘汤低、中、高组及卡托普利组明显逆转了模型组的上述实验结果（P<0.05,P<0.01），且呈剂量依赖性。结论：苓桂术甘汤可显著减轻小鼠心肌梗死后心肌纤维化、心肌肥大及心肌细胞凋亡，有效逆转心室重构，其机制可能与调控Rho A/ROCK信号通路有关。

关键词：心室重构心肌梗死苓桂术甘汤 Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路心肌纤维化

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脑络欣通方预处理的骨髓间充质干细胞外泌体促进氧糖剥夺再灌注神经干细胞增殖

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安徽中医药大学学报 2025年第1期44卷 102-108页

作者：刘明明张涵智江慧慧赵雨彤洪璐陈卫东何玲王妍妍安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012 新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038

目的观察脑络欣通方(Naoluo Xintong Decoction,NLXTD)预处理后的骨髓间充质干细胞外泌体(bone marrow mesenchymal stem cells derived exosomes,BMSCs-Exos)对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤条件下C17.2小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响。方法利用全骨髓法提取原代小鼠BMSCs,采用流式细胞术对BMSCs的表面标志物进行鉴定;收集BMSCs细胞上清并用差速离心法分离Exos,之后运用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot法进行鉴定;免疫荧光法鉴定C17.2小鼠NSCs,建立OGD/R损伤的NSCs模型,通过观察细胞状态以及利用EdU法检测NLXTD-Exos对NSCs的促增殖作用。结果提取的Exos呈典型茶托状结构。与对照组比较,模型组NSCs脱落较多,EdU阳性细胞率显著降低(P<0.05);与模型组比较,Exos组和NLXTD-Exos组细胞状态改善,漂浮细胞减少,EdU阳性细胞率显著升高(P<0.05);且NLXTD-Exos组的EdU阳性细胞率显著高于Exos组(P<0.05)。结论NLXTD预处理可提高BMSCs-Exos对OGD/R损伤的NSCs增殖的促进作用。

关键词：脑络欣通方外泌体氧糖剥夺再灌注神经干细胞

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不同等级茯苓块、茯苓片的外观性状与内在成分的相关性研究

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中南药学 2025年第1期23卷 78-83页

作者：黄佳静房悦王妍妍张越王雷俞年军彭代银陈卫东安徽中医药大学合肥230012 省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012 中药复方安徽省重点实验室合肥230012 直接口服中药饮片亳州市重点实验室安徽亳州236800 中药资源保护与开发研究所合肥230012 中药饮片制造新技术安徽省重点实验室合肥230012

目的探究不同等级茯苓块、茯苓片外观性状与内在成分之间的关系,为茯苓质量评价提供科学依据。方法依据2020年版《中国药典》规定,收集不同等级的茯苓块及茯苓片,通过市场调研将茯苓块分为选货一等、选货二等和统货,茯苓片分为选货和统... 详细信息

目的探究不同等级茯苓块、茯苓片外观性状与内在成分之间的关系,为茯苓质量评价提供科学依据。方法依据2020年版《中国药典》规定,收集不同等级的茯苓块及茯苓片,通过市场调研将茯苓块分为选货一等、选货二等和统货,茯苓片分为选货和统货,按照药典要求测定浸出物和总灰分含量,同时测定活性成分水溶性多糖、碱溶性多糖及总三萜酸的含量,并对内在指标进行相关性分析。结果茯苓块选货一等的浸出物、总灰分、水溶性多糖和总三萜酸含量显著低于统货,而碱溶性多糖含量显著高于统货;茯苓片选货的浸出物、总灰分、水溶性多糖显著低于统货,总三萜酸含量差异无统计学意义,而碱溶性多糖含量显著高于统货。相关性分析显示,碱溶性多糖含量与总灰分、水溶性多糖含量成显著负相关。结论市场上不同等级茯苓饮片的划分依据与水溶性多糖和总三萜酸含量无关,而与碱溶性多糖含量有关,本研究为茯苓的质量评价提供了参考。

关键词：茯苓块茯苓片外观性状等级内在成分

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NF-κB对纤溶酶调控小鼠集合管M-1细胞γ-ENaC表达的影响

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中国病理生理杂志 2025年第4期 723-731页

作者：张文馨李蕾葛皖粤许在平王运来许钒安徽中医药大学药学院安徽省中药复方重点实验室

目的：探讨纤溶酶对小鼠肾皮质集合管上皮细胞(M-1细胞)上皮钠离子通道γ亚基(epithelial sodium channel γ-subunit, γ-ENaC)激活的影响及核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)的作用。方法：本研究以小鼠M-1细胞为对象，设计三个... 详细信息

目的：探讨纤溶酶对小鼠肾皮质集合管上皮细胞(M-1细胞)上皮钠离子通道γ亚基(epithelial sodium channel γ-subunit, γ-ENaC)激活的影响及核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)的作用。方法：本研究以小鼠M-1细胞为对象，设计三个实验部分：第一部分将细胞分为对照组、纤溶酶组、纤溶酶+BAY 11-7082(NF-κB抑制剂)组以探讨纤溶酶对炎症因子及γ-ENaC的作用；第二部分分为对照组、BAY 11-7082组、BAY 11-7082+纤溶酶组，用BAY 11-7082预先处理M-1细胞，以探讨纤溶酶调控γ-ENaC表达中NF-κB的作用；第三部分分为对照组、纤溶酶组、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)组，用纤溶酶或IL-6处理M-1细胞，以探讨NF-κB下游的IL-6对γ-ENaC的调控作用。药物干预后，ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)和IL-1β水平，Western blot检测磷酸化核因子κB抑制蛋白α (phosphorylated inhibitor of nuclear factor-κB α,p-IκBα)/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65和γ-ENaC蛋白水平，免疫荧光染色检测γ-ENaC膜上分布情况。结果：与对照组相比，10 mg/L纤溶酶作用24 h后细胞上清液IL-6、TNF-α、MCP-1和IL-1β含量上升(n=3,P<0.01),p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65和γ-ENaC蛋白表达升高(n=5,P<0.01)，膜上γ-ENaC分布增加。与纤溶酶组相比，纤溶酶与BAY 11-7082共培养后各组细胞IL-6、TNF-α、MCP-1和IL-1β含量下降(n=3,P<0.05或P<0.01),p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65和γ-ENaC蛋白表达降低(n=5,P<0.05或P<0.01)，膜上γ-ENaC分布减少。单纯给予BAY 11-7082组与对照组相比，p-NF-κB p65/NF-κB p65表达降低(n=5,P<0.05或P<0.01),γ-ENaC没有明显变化，再给予纤溶酶刺激后，p-IκBα/IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65及γ-ENaC表达升高(n=5,P<0.05)，膜上分布增加。NF-κB下游中的IL-6干预24 h后细胞γ-ENaC蛋白表达增加(n=5,P<0.05),γ-ENaC膜上分布增加。结论：纤溶酶调控小鼠M-1细胞γ-ENaC表达与NF-κB激活后引起炎症因子异常升高有关。

关键词：上皮钠离子通道γ亚基纤溶酶核因子κB 炎症因子

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基于BTLA/HVEM通路研究茯苓多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

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中南药学 2025年第05期 1183-1189页

作者：房悦黄佳静张越张艳艳王雷俞年军彭代银陈卫东王妍妍安徽中医药大学省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心安徽中医药大学第一附属医院中药复方安徽省重点实验室中药资源保护与开发研究所

目的探讨茯苓多糖（PCP）对免疫抑制小鼠的免疫调节作用及其潜在机制。方法采用物理化学方法分析PCP，并进行结构表征；建立环磷酰胺（CTX）诱导的免疫抑制小鼠模型，评价PCP对免疫抑制模型小鼠免疫器官、免疫细胞和免疫因子的调节作... 详细信息

目的探讨茯苓多糖（PCP）对免疫抑制小鼠的免疫调节作用及其潜在机制。方法采用物理化学方法分析PCP，并进行结构表征；建立环磷酰胺（CTX）诱导的免疫抑制小鼠模型，评价PCP对免疫抑制模型小鼠免疫器官、免疫细胞和免疫因子的调节作用。结果 PCP分子量约为13.10 kDa，主要由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖组成。PCP对CTX诱导的免疫抑制小鼠具有免疫保护作用。PCP能增加免疫抑制模型小鼠体重，改善其脾脏和胸腺损伤，提高脏器指数；能提高T淋巴细胞CD4+/CD8+比值，提高小鼠血清白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干扰素-γ（IFN-γ）的表达；能降低免疫抑制小鼠脾脏组织中B/T淋巴细胞弱化因子（BTLA）和疱疹病毒侵入介质（HVEM）的表达，促进T淋巴细胞的增殖和分化。结论 PCP可能通过抑制BTLA/HVEM通路，提高免疫抑制小鼠的免疫功能，本研究提示PCP可作为新型免疫调节剂进行深入研究。

关键词：茯苓多糖环磷酰胺免疫调节剂 BTLA/HVEM

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基于JAK2/STAT3通路介导的星形胶质细胞A1/A2表型转化探讨桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用

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中国实验方剂学杂志 2025年第7期31卷 25-34页

作者：王慧芳陈新茹陈梦圆周娴韩岚陈卫东季兆洁安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省中药复方重点实验室合肥230012 省部共建安徽道地中药材品质提升协同创新中心合肥230012

目的:探讨桃红四物汤对脑缺血再灌注大鼠的影响是否与调节星型胶质细胞极化有关及相关机制研究。方法:将84只雄性SD大鼠随机平均分为假手术组,模型组,桃红四物汤低、中、高剂量组,磷酸川芎嗪片组和AG490组。除假手术组外均进行MCAO/R造... 详细信息

目的:探讨桃红四物汤对脑缺血再灌注大鼠的影响是否与调节星型胶质细胞极化有关及相关机制研究。方法:将84只雄性SD大鼠随机平均分为假手术组,模型组,桃红四物汤低、中、高剂量组,磷酸川芎嗪片组和AG490组。除假手术组外均进行MCAO/R造模,给药7 d。采用Longa评分法进行神经功能缺损评分,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮质补体成分3(C3)、S100钙结合蛋白A10(S100A10)、非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)相关mRNA和蛋白表达差异,血管内皮生长因子-A(VEGF-A)蛋白表达差异,炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达水平;免疫荧光双染检测GFAP和C3、S100A10共定位情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测VEGF表达情况。结果:与假手术组比较,模型组脑梗死体积、神经功能损伤显著升高(P<0.01),蛋白C3上升而S100A10降低,信号通路相关蛋白明显升高(P<0.05,P<0.01),VEGF-A蛋白显著降低(P<0.01),相关炎症因子mRNA表达显著升高(P<0.01);共定位荧光强度GFAP和C3显著上升(P<0.01),GFAP和S100A10显著下降(P<0.01),VEGF含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,桃红四物汤中、高剂量和磷酸川芎嗪片组脑梗死体积、神经功能损伤显著降低(P<0.01);桃红四物汤低、中、高剂量,磷酸川芎嗪片组蛋白表达C3降低而S100A10显著升高(P<0.01);桃红四物汤高剂量组,AG490组蛋白及mRNA表达C3、通路相关明显降低(P<0.05,P<0.01),S100A10显著升高(P<0.01),VEGF-A蛋白显著上升(P<0.01),相关炎症因子mRNA表达显著降低(P<0.01);共定位荧光强度GFAP和C3显著降低(P<0.01),GFAP和S100A10显著升高(P<0.01);VEGF含量显著上升(P<0.01)。结论:桃红四物汤发挥对脑缺血再灌注大鼠脑保护作用,其机制与下调JAK2/STAT3信号通路,促进星形胶质细胞A2型极化,进而减轻炎性因子释放及促进VEGF生成有关。

关键词：桃红四物汤脑缺血再灌注炎症因子星形胶质细胞非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3) 血管内皮生长因子

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经典名方开心散基准样品HPLC指纹图谱及多指标成分含量测定研究

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中南药学 2025年第4期23卷 1109-1116页

作者：李大伟单晓晓汪海宣张晓倩杨璇陶稳稳黄顺旺张彩云安徽中医药大学药学院合肥230012 药物制剂技术与应用安徽省重点实验室安徽省教育厅现代药物制剂工程技术研究中心安徽省道地中药材品质提升创新协同中心合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所中药复方安徽省重点实验室合肥230012 合肥市食品药品安全检验检测中心合肥230094 合肥创新医药技术有限公司合肥231000

目的建立经典名方开心散基准样品的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及其6种指标性成分的定量分析方法,为其质量标准的初步拟定提供参考。方法根据开心散处方比例,混合制备15批开心散基准样品,采用HPLC法建立其指纹图谱,同时定量测定指标性... 详细信息

目的建立经典名方开心散基准样品的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及其6种指标性成分的定量分析方法,为其质量标准的初步拟定提供参考。方法根据开心散处方比例,混合制备15批开心散基准样品,采用HPLC法建立其指纹图谱,同时定量测定指标性成分远志[口山]酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、β-细辛醚、α-细辛脑的含量。结果15批开心散基准样品的HPLC指纹图谱的相似度均大于0.9,在203 nm色谱条件下共识别出8个特征峰。所测定的6种指标性成分(含量范围)依次为远志[口山]酮Ⅲ(0.1802~0.3969 mg·g^(-1))、3,6'-二芥子酰基蔗糖(1.0032~2.0445mg·g^(-1))、人参皂苷Re(0.9586~1.5035 mg·g^(-1))、人参皂苷Rb_(1)(0.4144~0.8271mg·g^(-1))、β-细辛醚(2.3851~3.4561mg·g^(-1))、α-细辛脑(0.0286~0.0346 mg·g^(-1))。结论本研究成功建立了开心散HPLC指纹图谱及多指标成分含量测定方法,可为开心散制剂开发提供质量控制标准参考。

关键词：开心散经典名方指纹图谱含量测定质量标准

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五子衍宗丸干预线粒体通透性转换孔抑制精子凋亡的机制

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中国实验方剂学杂志 2020年第21期26卷 34-39页

作者：刘红娟吴德玲童小慧李莉王桐生安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室合肥230012

目的:研究五子衍宗丸对电压依赖性阴离子通道1(VDAC1),腺嘌呤核苷酸转位酶(ANT),环孢菌素A结合蛋白D(CypD)等蛋白表达影响,分析其干预精子线粒体通透性转换孔(mPTP)开放的机制。方法:将40只大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(生精胶囊,1... 详细信息

目的:研究五子衍宗丸对电压依赖性阴离子通道1(VDAC1),腺嘌呤核苷酸转位酶(ANT),环孢菌素A结合蛋白D(CypD)等蛋白表达影响,分析其干预精子线粒体通透性转换孔(mPTP)开放的机制。方法:将40只大鼠随机分为正常组,模型组,阳性组(生精胶囊,1.6 g·kg-1·d-1),五子衍宗丸组(4.0 g·kg-1·d-1)。除正常组外其余各组灌服雷公藤多苷(30 mg·kg-1),连续8周,建立少弱精子症模型,从造模的第5周开始,各组按剂量灌胃给药,连续给药4周,末次给药后禁食12 h,3%水合氯醛麻醉动物,摘取睾丸和附睾组织。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠睾丸组织VDAC1,ANT,CypD,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达;透射电镜观察精子线粒体的超微结构;原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠VDAC1,CypD,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2显著升高(P<0.01);与模型组比较,生精胶囊组、五子衍宗丸组的VDAC1,CypD,Caspase-3,Caspase-9蛋白表达显著下降,Bax/Bcl-2显著降低(P<0.01);各组间ANT,Bcl-2蛋白表达无明显变化。电镜检查显示,模型组大鼠精子线粒体大小不一,排列紊乱,出现大量肿胀和空泡,生精胶囊组和五子衍宗丸组精子线粒体结构较完整,排列较整齐,肿胀和空泡现象明显减少;TUNEL检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠生精细胞凋亡率显著增加(P<0.01);与模型组比较,生精胶囊组、五子衍宗丸组细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:五子衍宗丸可能通过抑制VDAC1,CypD,Bax蛋白表达,降低mPTP的通透性,阻止Caspase凋亡蛋白家族的级联激活反应,发挥抗生殖细胞凋亡作用。

关键词：五子衍宗丸少弱精子症生殖细胞凋亡线粒体通透性转换孔

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当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第2期25卷 14-19页

作者：蒋沙莎潘永福杨沫王运来尹丹丹许钒安徽中医药大学药学院中药复方安徽省重点实验室

目的:探究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对大鼠肝星状细胞HSC-T6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)含药血清对其的干预作用。方法:将HSC-T6细胞种板后,各组每孔加入DMEM和终体积分数分别为2. 5%,5%,10%,15%,20%的空白大鼠血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定HSC-T6细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;将细胞分为空白血清组(5%,10%,15%)和当归芍药散含药血清组(5%,10%,15%),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1的含量;细胞分为空白血清组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1 mRNA的水平;将细胞分为空白血清组(10%),模型组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),Y-27632抑制剂组(100μmol·L^-1),除空白血清组外,其余各组均加入10 nmol·L^-1ET-1诱导HSC-T6细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ET-1诱导的HSC-T6细胞中p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。结果:选用血清浓度为5%,10%,15%作为含药血清浓度。与空白血清组比较,当归芍药散含药血清组明显降低基础状态下ET-1含量,ET-1 mRNA相对含量(P <0. 05,P <0. 01)。与空白血清组比较,模型组细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达水平均显著升高(P <0. 01);与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组及Y-27632抑制剂组均可明显下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达(P <0. 05,P <0. 01)。结论:当归芍药散含药血清可能通过下调ET-1的含量,抑制ET-1的自分泌,从而下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。

关键词：当归芍药散含药血清 HSC-T6细胞内皮素-1(ET-1) 磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(p-MLCⅡ)

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加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移

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中国实验方剂学杂志 2021年第4期27卷 37-46页

作者：丁芮葛瑞瑞王恩宇洪星辉王靓周鹏邵菁方海雁施慧王景辉黄金玲安徽中医药大学合肥230012 中药复方安徽省重点实验室合肥230012

目的:观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)及侵袭迁移能力的影响,探讨其调控Wnt5a/Ca^(2+)/活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。方法:用TGF-β1(10μg·L^(-1))诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型,分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力,EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca^(2+)浓度。结果:TGF-β1能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力(P<0.01),下调上皮细胞黏附分子(E-cadherin)水平(P<0.01),上调间质细胞标志蛋白(N-cadherin),转录因子(Snail)和细胞骨架蛋白(Vimentin)表达(P<0.01),并诱导细胞Wnt5a,钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN),活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells1,NFAT1)总蛋白,磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca^(2+)胞内蓄积(P<0.01);而加味小陷胸汤(10,20,40 mg·L^(-1))均可明显抑制这一现象,且40 mg·L^(-1)效果最佳(P<0.05,P<0.01);Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路特异性抑制剂(R)-(+)-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L^(-1)均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-β1介导后的侵袭迁移,上调E-cadherin水平,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Wnt5a,CaN,NFAT1蛋白表达及减少Ca^(2+)在胞内蓄积(P<0.05,P<0.01),且(R)-(+)-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L^(-1)抑制作用效果更强(P<0.05,P<0.01)。结论:以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的EMT,进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。

关键词：加味小陷胸汤水提物人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化侵袭迁移 Wnt5a/Ca^(2+)/NFAT信号通路

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