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上海中医药大学学报 2024年第3期38卷 7-14页

作者：肖亦菽陈敏谈荣慧郑小宇赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室教育部中药标准化重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学中药学院上海201203

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构... 详细信息

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构等分子特征;使用MEGA 7软件构建系统进化树;对SmERF081进行异源表达和蛋白纯化;通过酵母单杂、双荧光素酶报告系统和化学发光法凝胶迁移实验(EMSA)鉴定SmERF081与SmCPS5启动子是否结合。结果:克隆得到SmERF081基因,cDNA全长453 bp(Genbank登陆号:OQ466089),编码151个氨基酸,相对分子质量16.46 kDa,等电点9.75。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,其高级结构主要由无规则卷曲构成。进化树分析表明SmERF081与拟南芥At1G28360.1、丹参SmERF8同源关系最近。原核表达结果显示,经IPTG诱导后SmERF081在大肠杆菌中成功异源表达,并通过纯化获得目的蛋白。酵母单杂、双荧光素酶报告基因检测和EMSA确认SmERF081可与丹参SmCPS5启动子结合。结论:鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF081,生物信息学分析及分子互作初步证实其靶基因为丹参SmCPS5二萜环化酶。

关键词：丹参 SmERF081 生物信息学靶基因

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斜率校正一测多评法同时测定茯苓中3种三萜酸成分的含量

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上海中医药杂志 2023年第7期57卷 66-71页

作者：赵鑫谷丽华杨莉王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海201203 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

目的建立新的一测多评法同时测定茯苓中3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸和茯苓酸的含量。方法以Agilent ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5µm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相等度洗脱;流速:0.8 mL/min... 详细信息

目的建立新的一测多评法同时测定茯苓中3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸和茯苓酸的含量。方法以Agilent ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5µm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相等度洗脱;流速:0.8 mL/min;进样量:10µL;柱温:30℃;检测波长为210 nm。以茯苓酸为内参计算其他两个成分的校正因子。结果以茯苓酸为内参,3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸和去氢茯苓酸的校正因子分别为0.71和1.43;一测多评法测定结果与外标法测定结果无明显差异[相对误差(RE)<5%]。结论建立的一测多评方法简便准确,可用于茯苓药材中多指标成分的含量测定,为茯苓药材质量评价提供参考。

关键词：一测多评法茯苓茯苓酸含量测定中药研究

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中药通过肠道菌群改善肥胖症及其相关代谢性疾病的作用机制研究进展

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上海中医药杂志 2023年第2期57卷 1-7页

作者：王紫轩薛琼雯罗亦轩蒋嘉瑞徐书杨杨莉王峥涛丁丽丽上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室暨国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

肥胖症及其相关代谢性疾病的发病率逐年增长,引发了全球性的公共健康问题。越来越多的研究发现肥胖症的发生发展与肠道菌群的结构及功能变化密切相关,两者关系的失衡被认为是代谢障碍的标志之一。中医药在治疗多种糖脂代谢紊乱引起的代... 详细信息

肥胖症及其相关代谢性疾病的发病率逐年增长,引发了全球性的公共健康问题。越来越多的研究发现肥胖症的发生发展与肠道菌群的结构及功能变化密切相关,两者关系的失衡被认为是代谢障碍的标志之一。中医药在治疗多种糖脂代谢紊乱引起的代谢性疾病中积累了丰富的经验,其在减重、改善糖脂代谢方面效果显著。但中药及其复方的有效成分口服生物利用度低,很难在靶器官达到起效浓度,而肠道可能是其主要作用器官。围绕肥胖症及其相关代谢性疾病与肠道菌群的相互作用,综述中药通过调节肠道菌群改善肥胖症、Ⅱ型糖尿病、代谢相关脂肪性肝病等代谢性疾病的研究进展,旨在为中药防治肥胖症等代谢性疾病提供理论依据,并为靶向肠道菌群抗肥胖及其并发症的药物研发提供参考策略。

关键词：肥胖代谢性疾病中药肠道菌群糖脂代谢 Ⅱ型糖尿病代谢相关脂肪性肝病

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一测多评法结合双波长法分析不同产地、栽培和加工铁皮石斛黄酮类成分的含量

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中国中药杂志 2021年第14期46卷 3605-3613页

作者：丁玉莲林李雁陈丹青徐红王峥涛上海中医药大学中药研究所教育部中药标准化重点实验室中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海中药标准化研究中心上海201203 上海上药神象健康药业有限公司上海200336

建立HPLC一测多评法结合双波长法同时测定铁皮石斛中6种黄酮类成分的含量,比较不同产地、栽培和加工的铁皮石斛茎中黄酮类成分的含量,明确引起铁皮石斛黄酮类成分差异性的主要因素。采用资生堂Capcell PAK MGⅡC18色谱柱(4.6 mm×25... 详细信息

建立HPLC一测多评法结合双波长法同时测定铁皮石斛中6种黄酮类成分的含量,比较不同产地、栽培和加工的铁皮石斛茎中黄酮类成分的含量,明确引起铁皮石斛黄酮类成分差异性的主要因素。采用资生堂Capcell PAK MGⅡC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相,以芦丁为内标物,检测波长340 nm,建立其对维采宁-2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和牡荆素葡萄糖苷的相对校正因子,并进行含量测定,实现一测多评,同时在290 nm波长下,建立柚皮素的含量测定方法。结果表明5种黄酮类成分的一测多评法与常规外标的含量测定结果无显著性差异,结合柚皮素的测定结果,可实现铁皮石斛中6中黄酮类成分的同时测定。对82个铁皮石斛样品进行含量测定并进行主成分分析和判别分析,结果表明仿野生铁皮石斛的黄酮类含量明显高于大棚床栽铁皮石斛,不同地区的仿野生铁皮石斛黄酮类成分以产自江西、贵州、浙江和福建的含量较高,大棚床栽铁皮石斛以产自福建、浙江的黄酮含量较高,柚皮素的含量与加工温度呈正相关,其他5个黄酮成分与加工温度呈负相关。主成分分析显示仿野生铁皮石斛和大棚床栽的铁皮石斛可大致分为两类,大棚床栽的铁皮石斛按产地被分为4类,仿野生铁皮石斛中贵州产地的样品基本聚集在一起,其他产地的没有明显规律。所建立的铁皮石斛含量方法简化了其多指标性黄酮类成分的测定方法,可为有效的控制铁皮石斛整体质量控制及其种植栽培、产地加工提供依据。

关键词：铁皮石斛黄酮含量高效液相色谱法一测多评(QAMS) 产地栽培方式加工方式

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川乌药理作用、毒性、质量控制方法研究进展

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中成药 2021年第3期43卷 722-729页

作者：陈良妮程雪梅陈勇王长虹广西中医药大学药学院广西南宁530000 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

川乌在治疗风湿性关节炎方面有较好的效果,现代药理发现它还具有抗肿瘤作用,但其毒性较强,能引起严重的心脏毒性和神经毒性。目前,液质谱联用、一测多评等现代分析检测技术和数据处理方法越来越多应用到川乌安全性、有效性的质量控制中... 详细信息

川乌在治疗风湿性关节炎方面有较好的效果,现代药理发现它还具有抗肿瘤作用,但其毒性较强,能引起严重的心脏毒性和神经毒性。目前,液质谱联用、一测多评等现代分析检测技术和数据处理方法越来越多应用到川乌安全性、有效性的质量控制中。本文对川乌药理、毒性、质量控制方法的文献进行综述,以期为该药材深入研究提供参考。

关键词：川乌药理作用毒性质量控制方法

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薄层色谱常用固定相及其在中药鉴别中的应用优势探讨和展望

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药物分析杂志 2025年第1期45卷 39-50页

作者：斯子豪金武燮潘丽张鹏森谷丽华吴立宏杨莉王峥涛上海中医药大学中药研究所、中药标准化教育部重点实验室、国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

薄层色谱法作为一种平面色谱技术,具有经济、灵活,高通量,直观等特点,被广泛用于多个领域的成分分离分析。其中固定相类型是影响薄层色谱结果的一个重要因素,以《中华人民共和国药典》为例,目前使用的薄层色谱固定相包括硅胶、聚酰胺和... 详细信息

薄层色谱法作为一种平面色谱技术,具有经济、灵活,高通量,直观等特点,被广泛用于多个领域的成分分离分析。其中固定相类型是影响薄层色谱结果的一个重要因素,以《中华人民共和国药典》为例,目前使用的薄层色谱固定相包括硅胶、聚酰胺和纤维素。本文对薄层色谱这3种固定相的特点和应用现状进行了论述。针对野菊花、葶苈子、菟丝子、木蝴蝶、肉苁蓉、蒲黄和儿茶7味中药材为代表的聚酰胺或纤维素薄层方法存在的不足,平行建立了以硅胶为固定相的薄层色谱鉴别方法。该方法斑点丰富,分离度良好,说明硅胶固定相薄层板对部分黄酮、酚酸类成分具有分析优势,该研究结果为相关中药的标准提升提供了参考。本文同时依据薄层色谱法的要素组成探讨了薄层色谱技术的未来发展趋势。

关键词：薄层色谱硅胶聚酰胺纤维素中药鉴定质量控制定性鉴别

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中华大蟾蜍细胞色素P450还原酶基因克隆、表达与功能鉴定

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上海中医药大学学报 2024年第1期38卷 27-33页

作者：肖传光胡耀廷杨莉赵淑娟王峥涛上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCP... 详细信息

目的:从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans Cantor)肝脏组织中克隆细胞色素P450还原酶基因(BgCPR,GenBank登录号:OQ572435)进行生物信息学分析,并进行功能验证。方法:基于中华大蟾蜍转录组数据库挖掘BgCPR基因序列,使用SnapGene软件设计BgCPR基因两端特异性引物,以蟾蜍肝脏组织总RNA逆转录成的cDNA为模板进行PCR扩增。利用生物信息学分析BgCPR蛋白理化性质、空间结构并构建系统进化树;基于CRISPR/Cas9基因编辑系统将蟾蜍BgCPR基因表达框经同源重组整合进入酿酒酵母基因组,利用聚乙二醇法制备转化子微粒体,验证其对细胞色素C的还原功能。结果:克隆得到全长2043 bp的BgCPR基因cDNA,编码680个氨基酸,相对分子质量77852 Da。结构预测显示,BgCPR蛋白为非分泌蛋白;有一段跨膜螺旋区,位于蛋白的第24~46位氨基酸之间;亚细胞定位预测显示该蛋白定位于内质网上。采用体外酶活实验证明其具有传递电子功能。结论:本研究克隆得到中华大蟾蜍BgCPR基因,并构建了表达具有生物活性的BgCPR的酿酒酵母工程细胞,为进一步研究蟾蜍CYP450基因功能乃至解析蟾蜍二烯内酯类化合物的生物合成途径奠定了基础。

关键词：中华大蟾蜍细胞色素P450还原酶细胞色素P450 蟾蜍二烯内酯

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冬凌草配方颗粒超高效液相色谱指纹图谱及多指标成分含量测定方法的建立

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上海中医药杂志 2022年第8期56卷 90-95,117页

作者：党蕊安定邦孙鑫谢琦管辉达程雪梅王长虹上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

目的建立冬凌草配方颗粒的超高效液相色谱(UPLC)法指纹图谱,且对冬凌草配方颗粒中多成分含量进行测定。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈、0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速... 详细信息

目的建立冬凌草配方颗粒的超高效液相色谱(UPLC)法指纹图谱,且对冬凌草配方颗粒中多成分含量进行测定。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈、0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min,检测波长350 nm,柱温为30℃,进样量为3μL。结果建立了10批冬凌草配方颗粒的指纹图谱,得到8个共有峰,并指认了4个成分峰,分别是咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、胡麻素,相似度在0.999~1.000之间。4种指标成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系(R~2=0.9997~1.0000),平均加样回收率为90.27%~110.64%,RSD为0.07%~2.16%。结论该法重复性好,稳定可行,符合指纹图谱的分析要求,同时测定4种指标成分的含量作为其质量控制方法。

关键词：冬凌草配方颗粒超高效液相色谱指纹图谱含量测定中药研究

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基于超高效液相色谱指纹图谱和含量测定的党参和蜜麸炒党参配方颗粒质量评价

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上海中医药杂志 2022年第7期56卷 83-88页

作者：陈倩萍谢琦党蕊孙鑫安定邦程雪梅李文艳王长虹上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

目的建立党参和蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和含量测定方法,并对其质量进行评价。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B进... 详细信息

目的建立党参和蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和含量测定方法,并对其质量进行评价。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,检测波长为268 nm,进样量为3μL。结果建立了蜜麸炒党参配方颗粒UPLC指纹图谱和含量测定方法,党参炔苷在2.4~100.0 mg·L^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.999 7),加样回收率(50%、100%、150%)分别为97.72%、96.23%、98.60%,平均加样回收率为97.52%,RSD为1.76%。方法的精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于3%。指纹图谱确定了9个共有峰,并指认了党参炔苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷宁、党参炔醇4个色谱峰。28批党参和蜜麸炒党参配方颗粒的党参炔苷含量介于0.06~0.39 mg·g^(-1)。根据主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)结果能明显区分党参和蜜麸炒党参配方颗粒,且不同企业的党参配方颗粒存在一定的差异。结论该法操作简便、检测效率高、专属性强,能同时用于蜜麸炒党参配方颗粒和党参配方颗粒的质量评价。

关键词：党参蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱中药研究

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蒙药砂蓝刺头定性与定量质量控制方法研究

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中草药 2021年第6期52卷 1759-1764页

作者：曹岚岚程雪梅杨立国王秀兰奥·乌力吉王长虹上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203 内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药研发国家地方联合工程研究中心内蒙古通辽028000

目的建立砂蓝刺头Echinops gmelini的质量控制方法。方法采用薄层色谱法,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1∶1∶0.8)为展开剂对砂蓝刺头花中1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮(MMQ)进行定性鉴别;建立砂蓝刺头HPL... 详细信息

目的建立砂蓝刺头Echinops gmelini的质量控制方法。方法采用薄层色谱法,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1∶1∶0.8)为展开剂对砂蓝刺头花中1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮(MMQ)进行定性鉴别;建立砂蓝刺头HPLC指纹图谱,并对MMQ的含量测定方法进行研究。结果建立的TLC方法对照品斑点清晰,分离度好;建立的指纹图谱分析方法能够区分砂蓝刺头与近源植物,标定了8个特征峰,并指认出其中4个成分。定量方法测定结果显示MMQ在2.024~151.800μg/mL呈良好线性关系,平均加样回收率为101.54%,RSD为1.46%。7批样品中MMQ的质量分数为0.13%~0.53%。结论建立的质量控制方法科学、可靠,可为砂蓝刺头质量标准的建立提供实验依据。

关键词：砂蓝刺头花质量控制薄层色谱法高效液相色谱法 1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮

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