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高等学校化学学报 2014年第10期35卷 2119-2123页

作者：鲍斌王辉俊王宏伟施松善王顺春上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海201203

以禹州漏芦为原料,经沸水提取、乙醇沉淀、DEAE-Cellulose和SuperdexTM75凝胶柱层析分离纯化,得到一种水溶性的酸性均一多糖(EPS-2A).采用单糖组成、甲基化及绝对构型等方法对其进行了结构解析.结果表明,该均一多糖主要由D-半乳糖醛酸组... 详细信息

以禹州漏芦为原料,经沸水提取、乙醇沉淀、DEAE-Cellulose和SuperdexTM75凝胶柱层析分离纯化,得到一种水溶性的酸性均一多糖(EPS-2A).采用单糖组成、甲基化及绝对构型等方法对其进行了结构解析.结果表明,该均一多糖主要由D-半乳糖醛酸组成,并含有少量的Rha和Ara.该均一多糖经不同条件硫酸衍生化后的衍生物(Sul-2A-1和Sul-2A-2)与阳性药肝素[CH50=(103.0±9.0)μg/mL(mean±SD,n=3),CH50为出现50%溶血时的样品浓度]相比,均表现出很强的抗补体活性[Sul-2A-1的CH50=(74.1±4.6)μg/mL;Sul-2A-2的CH50=(35.7±2.8)μg/mL].

关键词：禹州漏芦多糖结构分析硫酸衍生化抗补体

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铁皮石斛联苄类化学成分的研究

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中国中药杂志 2021年第15期46卷 3853-3858页

作者：周宇娟王俊豪徐红侴桂新王峥涛上海中医药大学中药研究所教育部中药标准化重点实验室中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海中药标准化研究中心上海201203

研究铁皮石斛乙酸乙酯部分中联苄类化学成分。运用大孔树脂、MCI、硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)、ODS等柱色谱、制备薄层色谱及制备高效液相色谱等技术进行化合物的分离纯化,根据1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱数据和理化性质鉴定化合物的结... 详细信息

研究铁皮石斛乙酸乙酯部分中联苄类化学成分。运用大孔树脂、MCI、硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)、ODS等柱色谱、制备薄层色谱及制备高效液相色谱等技术进行化合物的分离纯化,根据1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构。从铁皮石斛乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到了15个联苄类化合物,分别鉴定为dendrocandin X(1)、3,4′-二羟基-4,5-二甲氧基联苄(2)、6″-de-O-methyldendrofindlaphenol A(3)、3,4-二羟基-4′,5-二甲氧基联苄(4)、dendrosinen B(5)、3,4,4′-三羟基-5-甲氧基联苄(6)、3,3′-二羟基-4,5-二甲氧基联苄(7)、3,4′-二羟基-5-甲氧基联苄(8)、杓唇石斛素(9)、石斛酚(10)、4,4′-二羟基-3,5-二甲氧基联苄(11)、3,4′,5-三羟基-3′-甲氧基联苄(12)、3-O-methylgigantol(13)、dendrocandin U(14)和dendrocandin N(15)。化合物1为新化合物,化合物2首次在石斛属中分离得到,化合物37首次在铁皮石斛中分离得到。

关键词：铁皮石斛化学成分联苄 dendrocandin X

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铁皮石斛醋酸乙酯部位化学成分研究

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中草药 2021年第17期52卷 5218-5225页

作者：周宇娟王俊豪薛亚甫徐红侴桂新王峥涛上海中医药大学中药研究所教育部中药标准化重点实验室中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海中药标准化研究中心上海201203

目的进一步研究铁皮石斛Dendrobium officinale活性醋酸乙酯部位的化学成分。方法运用大孔树脂、MCI、硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)、ODS等柱色谱、制备薄层色谱及制备高效液相色谱法等分离技术,进行化合物的分离纯化,根据^(1)H-NMR、^(1... 详细信息

目的进一步研究铁皮石斛Dendrobium officinale活性醋酸乙酯部位的化学成分。方法运用大孔树脂、MCI、硅胶、凝胶(Sephadex LH-20)、ODS等柱色谱、制备薄层色谱及制备高效液相色谱法等分离技术,进行化合物的分离纯化,根据^(1)H-NMR、^(13)C-NMR、MS等波谱数据和理化性质鉴定化合物的结构。结果从铁皮石斛乙醇提取物的醋酸乙酯部位分离得到了34个化合物,分别鉴定为moscatin(1)、黑麦草内酯(2)、柚皮素(3)、橙皮苷(4)、甘草素(5)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-l-propanol(6)、异甘草素(7)、(E)-4-hydroxycinnamic acid(8)、(Z)-4-hydroxycinnamic acid(9)、coniferyl p-coumarate(10)、sinapyl p-coumarate(11)、tinosporaic acid A(12)、N-trans-coumaroyltyramine(13)、N-trans-feruloyltyramine(14)、丁香脂素(15)、pinoresinol(16)、梣皮树脂醇(17)、lirioresionol(18)、2(5H)-Furanone 5-hydroxy-3,4-dimethyl-5-pentyl(19)、丁香酸(20)、十六烷酸(21)、对羟基苯甲酸(22)、对羟基苯甲醛(23)、阿魏酸(24)、二氢松柏醇(25)、十七烷(26)、4-羟基-3,5-二甲氧基反式肉桂醛(27)、dihydro-p-cinnamic acid(28)、(+)-(4S)-(2E)-4-羟基-2-壬烯酸(29)、1,3-benzenediol(30)、对羟基苯酚(31)、水杨酸(32)、对羟基苯乙酮(33)和香草醛(34)。结论化合物2首次从石斛属植物中分离得到,化合物3~7均为首次从铁皮石斛中分离得到。

关键词：铁皮石斛 loliolide 柚皮素 hesperetin 甘草素 2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-l-propanol 异甘草素

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应用直接PCR技术的药用植物批量样本快速处理及分子鉴定

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药学学报 2017年第11期52卷 1763-1769页

作者：张金家徐红赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

直接PCR技术以微量样品快速裂解产物中DNA为模板,实现对目的基因的有效扩增。基于此,本文随机采集80种药用植物不同部位组织材料,以ITS序列为目的基因,用直接PCR技术进行扩增。通过反应体系优化,得到80个样品的全部ITS片段,扩增成功率为... 详细信息

直接PCR技术以微量样品快速裂解产物中DNA为模板,实现对目的基因的有效扩增。基于此,本文随机采集80种药用植物不同部位组织材料,以ITS序列为目的基因,用直接PCR技术进行扩增。通过反应体系优化,得到80个样品的全部ITS片段,扩增成功率为100%。对扩增片段测序并做Blast分析,与同种属植物ITS序列同源性为96%~100%。该方法避免了繁琐的DNA提取过程,只需取微量植物组织为起始材料,在保证结果准确、稳定的同时,提高了工作效率,为基于DNA条形码的药用植物批量样本的快速处理及分子鉴定提供了新的技术思路。

关键词：直接PCR技术 ITS DNA条形码药用植物分子鉴定

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丹参SmHPPR1基因调控丹酚酸生物合成的研究

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药学学报 2023年第9期58卷 2818-2828页

作者：谈荣慧赵望张金家赵淑娟上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

丹参是临床上治疗心脑血管疾病的常用中药,其主要水溶性活性成分为迷迭香酸和丹酚酸B,由苯丙烷类代谢途径产生。4-羟基苯丙酮酸还原酶(HPPR)是苯丙烷代谢途径中的关键酶。本课题组前期在丹参中克隆了SmHPPR1基因并构建了植物表达载体。... 详细信息

丹参是临床上治疗心脑血管疾病的常用中药,其主要水溶性活性成分为迷迭香酸和丹酚酸B,由苯丙烷类代谢途径产生。4-羟基苯丙酮酸还原酶(HPPR)是苯丙烷代谢途径中的关键酶。本课题组前期在丹参中克隆了SmHPPR1基因并构建了植物表达载体。在此基础上,获得了携带SmHPPR1的转基因拟南芥阳性植株并测定4-羟基苯乳酸的含量;诱导了过表达SmHPPR1丹参毛状根并进行有效成分含量测定和转录组分析。结果显示:携带SmHPPR1的T1代转基因拟南芥中4-羟基苯乳酸含量为0.594 mg·g^(-1);SmHPPR1-OE-3毛状根中的迷迭香酸、丹酚酸B、总丹酚酸含量分别是control-3毛状根的1.09、1.29、1.15倍,丹参素是control-3毛状根的36.26%;转录组分析显示,SmHPPR1过表达引起了SmTAT2表达量上调;蛋白-蛋白相互作用表明CYT(TR74706_c0_g1)、NADP^(+)(TR26565_c0_g1)和NADP^(+)(TR68771_c0_g1)是网络的中心节点并参与代谢过程、细胞过程等。以上研究表明,SmHPPR1在携带SmHPPR1的转基因拟南芥中能催化4-羟基苯丙酮酸还原为4-羟基苯乳酸;丹参毛状根中过表达SmHPPR1可以通过协同调控其他途径基因来提高丹酚酸的含量。

关键词：丹参 4-羟基苯丙酮酸还原酶丹酚酸迷迭香酸生物合成

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高良姜素抑制胃癌MGC803细胞NF-κB通路促进自噬

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中国中药杂志 2021年第16期46卷 4167-4174页

作者：梁晓晖余明珠石海莲吴晓俊上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室上海201203

探究高良姜素对胃癌细胞MGC803能量代谢和自噬的影响及其可能的分子机制。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度高良姜素干预MGC803细胞48 h对细胞活力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测高良姜素对MG... 详细信息

探究高良姜素对胃癌细胞MGC803能量代谢和自噬的影响及其可能的分子机制。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度高良姜素干预MGC803细胞48 h对细胞活力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测高良姜素对MGC803细胞自噬、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路、能量代谢相关蛋白的表达;实时荧光定量核酸扩增检测(Real-time quantitative PCR,qPCR)法检测高良姜素对MGC803细胞能量代谢相关蛋白mRNA表达的影响;自噬小体检测试剂盒检测高良姜素对MGC803细胞自噬体的作用;透射电子显微镜观察高良姜素对MGC803细胞自噬体和溶酶体的影响。裸鼠皮下注射MGC803细胞制备胃癌移植瘤模型,随机分组后,模型组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠,高良姜素组每天灌胃给予高良姜素(120 mg·kg^(-1)),阳性对照组腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)(50 mg·kg^(-1),1周2次),每3 d相同时间同一人用游标卡尺精确测量肿瘤大小及裸鼠体质量,给药21 d后处死动物,剥离肿瘤并称重,计算抑瘤率。结果显示,与对照组相比,高良姜素能够抑制MGC803细胞的活力;高良姜素可上调MGC803细胞Ⅱ型微管相关蛋白1轻链3B(microtuble-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)的蛋白表达,同时可抑制NF-κB通路相关蛋白的磷酸化水平;高良姜素促进MGC803细胞中自噬小体的形成;高良姜素对MGC803细胞能量代谢相关蛋白的表达水平无明显影响;120 mg·kg^(-1)高良姜素显著抑制荷瘤裸鼠胃癌肿瘤质量和体积的增长,并能够显著上调LC3BⅡ蛋白表达,同时可抑制NF-κB通路相关蛋白的磷酸化水平。结果表明,高良姜素体内外均能够抑制胃癌细胞MGC803的生长,其作用机制可能与其抑制NF-κB通路、促进自噬有关。

关键词：高良姜素胃癌自噬 NF-κB LC3B

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鼓槌石斛改善糖尿病性视网膜病活性及其机制

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国际药学研究杂志 2016年第2期43卷 301-306页

作者：余增洋陆宾季莉莉王峥涛上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海201203

目的观察鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)乙醇提取物(DC)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导小鼠糖尿病性视网膜病(DR)的改善作用,并研究其可能的机制。方法采用STZ诱导C57小鼠发生糖尿病(DM),进而诱导产生DR,并给予DM小鼠D... 详细信息

目的观察鼓槌石斛(Dendrobium chrysotoxum Lindl.)乙醇提取物(DC)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导小鼠糖尿病性视网膜病(DR)的改善作用,并研究其可能的机制。方法采用STZ诱导C57小鼠发生糖尿病(DM),进而诱导产生DR,并给予DM小鼠DC干预。通过视网膜血管免疫荧光染色和视网膜组织苏木精-伊红(HE)染色来检测视网膜血管新生情况;采用实时PCR和酶联免疫分析(ELISA)分别检测视网膜组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通路基因表达情况和玻璃体、血清中VEGF含量。结果 DC不同剂量均能够明显降低STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜血管新生程度;研究其机制发现,DC能降低STZ诱导的糖尿病小鼠视网膜内增加的低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α),VEGF及其受体VEGFR1和VEGFR2的基因表达,并能降低STZ诱导的糖尿病小鼠玻璃体和血清中增加的VEGF含量。结论 DC具有改善DR的药效活性,其机制为抑制VEGF信号通路的基因表达,并降低玻璃体和血清中的VEGF水平,进而抑制DR病变过程中的视网膜血管新生。

关键词：糖尿病性视网膜病鼓槌石斛血管新生血管内皮细胞生长因子

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基于胆汁酸代谢网络分析中药黄药子的肝毒性

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药学学报 2011年第1期46卷 39-44页

作者：徐英陈崇崇杨莉王君明季莉莉王峥涛胡之璧上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海201210 上海中药标准化研究中心上海201210

本文采用超高效液相色谱质谱联用(UPLC-MS)胆汁酸代谢网络分析方法评价黄药子乙醇提取物(ethanol extraction,ET)和单体化合物黄独素B(diosbulbin B,DB)致小鼠的肝毒性。通过小鼠毒性实验,ET和DB给药组小鼠都可见明显的肝脏毒性。血清... 详细信息

本文采用超高效液相色谱质谱联用(UPLC-MS)胆汁酸代谢网络分析方法评价黄药子乙醇提取物(ethanol extraction,ET)和单体化合物黄独素B(diosbulbin B,DB)致小鼠的肝毒性。通过小鼠毒性实验,ET和DB给药组小鼠都可见明显的肝脏毒性。血清胆汁酸含量测定结果经主成分分析后,空白组和给药组区分明显,ET和DB给药组矢量方向一致,但两者之间也有一定距离,提示DB是黄药子致肝毒性的主要毒性成分之一。经偏最小二乘法-判别分析后,结果表明牛磺酸结合型胆汁酸对表征ET和DB致小鼠肝毒性具有重要的贡献,且以牛磺酸结合型为主的胆汁酸与ALT和AST具有很好的相关性,因此以牛磺酸结合型为主的胆汁酸可作为评价黄药子致小鼠肝毒性的生物标识物。本研究为进一步深入评价黄药子致肝毒性及致毒机制研究奠定了基础。

关键词：胆汁酸黄药子黄独素B 主成分分析偏最小二乘法-判别分析相关分析

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基于ITS序列鉴别石斛类药材

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中国中药杂志 2014年第20期39卷 3928-3935页

作者：叶子卢叶王峥涛徐红胡之璧教育部中药标准化重点实验室中药新资源与质量标准综合评价国家中医药管理局重点研究室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

获得高质量的DNA是中药石斛分子鉴别的关键所在。研究比较DNA提取方法(试剂盒提取、CTAB法),从石斛类药材中提取可用于PCR扩增的基因组DNA,基于ITS序列分析进行药材基原鉴别。结果表明,采用改良CTAB法(大量提取),从22批石斛类药材中富... 详细信息

获得高质量的DNA是中药石斛分子鉴别的关键所在。研究比较DNA提取方法(试剂盒提取、CTAB法),从石斛类药材中提取可用于PCR扩增的基因组DNA,基于ITS序列分析进行药材基原鉴别。结果表明,采用改良CTAB法(大量提取),从22批石斛类药材中富集并提取到基因组DNA,通过克隆测序获得ITS序列,同研究积累的石斛属植物ITS序列资料与Genbank序列数据库进行比对分析,根据序列相似性程度从12批黄草药材中鉴定石斛14种,近似种5种;从10批枫斗中鉴定石斛6种,近似种3种。该方法弥补了传统生药学鉴定方法在石斛类药材鉴别上的局限性,具有一定的应用前景。

关键词：石斛 DNA提取分子鉴别

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蟾蜍二烯酸内酯类成分的生物转化和生物合成研究进展

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中草药 2021年第15期52卷 4741-4751页

作者：陈文杰胡耀廷王如锋赵淑娟王峥涛上海中医药大学中药研究所上海201203 中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室上海201203 中药标准化教育部重点实验室上海201203 上海市中药复方重点实验室上海201203

蟾蜍二烯酸内酯类化合物是名贵中药蟾酥的主要活性成分,具有显著的抗肿瘤、强心、镇痛和抗炎等药理活性。目前,蟾蜍二烯酸内酯成分的主要来源方法是从蟾蜍类药材中直接提取,但此方法成本高、收益低,且药用资源十分短缺,相关新药开发与... 详细信息

蟾蜍二烯酸内酯类化合物是名贵中药蟾酥的主要活性成分,具有显著的抗肿瘤、强心、镇痛和抗炎等药理活性。目前,蟾蜍二烯酸内酯成分的主要来源方法是从蟾蜍类药材中直接提取,但此方法成本高、收益低,且药用资源十分短缺,相关新药开发与应用研究严重受阻。近年来,中药活性成分的生物合成在中药资源保护方面发挥起越来越重要的作用。基于合成生物学原理,设计和改造微生物菌株发酵生产天然产物的方法已被广泛使用。该方法的应用需要建立在目标产物生物合成途径完全解析的基础之上。基于此,总结近年来蟾蜍二烯酸内酯的生物转化以及生物合成途径解析方面的研究进展,并进一步推测蟾蜍二烯酸内酯类的生物合成途径,并进一步展望与其相关的生物合成发展方向。

关键词：蟾酥蟾蜍二烯酸内酯类生物转化生物合成微生物转化

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