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2018年第八届药物毒理学年会

作者：景骁骐张家祺黄镇林盛雨辰季莉莉药物安全评价研究中心上海中医药大学中国上海中药标准化重点实验室和上海市复方中药重点实验室中药研究所上海中医药大学中国上海中药标准化重点实验室和上海市复方中药重点实验室中药研究所上海中医药大学中国上海药物安全评价研究中心上海中医药大学中国上海

肝窦阻塞综合征(Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的：探索核因子 E2相关因子-2(Nuclear factor erythroid 2-related f... 详细信息

肝窦阻塞综合征(Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的：探索核因子 E2相关因子-2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)抗氧化信号通路在儿茶素((+)-catechin hydrate,CAT)抑制野百合碱(Monocrotaline,MCT)诱导大鼠肝窦阻塞综合征中的作用。

关键词：儿茶素野百合碱肝窦阻塞综合征 Nrf2

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滋肾养阴颗粒的质量标准研究

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中草药 2017年第16期48卷 3338-3341页

作者：林启焰王晗雪汪毓文程雪梅谢帆李文艳王长虹上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203 上海市浦东新区公利医院上海201315

目的建立滋肾养阴颗粒(ZYG)的定性与定量方法。方法山茱萸的薄层色谱(TLC)鉴别;以氯仿-甲醇(3∶1)为展开剂,5%香草醛-硫酸为显色剂;墨旱莲、泽泻、牡丹皮的TLC鉴别:以石油醚(60~90℃)-三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1∶2)作为展开剂,采用不同的... 详细信息

目的建立滋肾养阴颗粒(ZYG)的定性与定量方法。方法山茱萸的薄层色谱(TLC)鉴别;以氯仿-甲醇(3∶1)为展开剂,5%香草醛-硫酸为显色剂;墨旱莲、泽泻、牡丹皮的TLC鉴别:以石油醚(60~90℃)-三氯甲烷-醋酸乙酯(3∶1∶2)作为展开剂,采用不同的检视方法,对ZYG中多味药材同时鉴别。采用Boston C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm,对ZYG中莫诺苷、马钱苷、金丝桃苷、特女贞苷、丹皮酚的量进行测定。结果可用莫诺苷和马钱苷对ZYG中的山茱萸进行定性鉴别;在同一展开条件下,分别在254nm下对ZYG中的牡丹皮进行鉴别;在366 nm下对ZYG中的墨旱莲进行鉴别;用5%磷钼酸乙醇为显色剂,于日光下对ZYG中的泽泻进行鉴别;所建立的2个TLC方法,各斑点清晰,Rf值适中,分离度良好。以莫诺苷、马钱苷、金丝桃苷、特女贞苷和丹皮酚为指标成分进行方法学研究,其对应的线性范围分别为4.432~110.8、4.192~104.8、4.040~101.0、4.132~103.3、4.076~101.9μg/m L,各指标成分的相关系数均大于0.999 7,平均加样回收率在96.57%~98.67%,方法的日内精密度小于2%,日间精密度小于3%。方法的稳定性与重复性良好。结论该方法准确灵敏,易于操作,专属性强,重复性好,可用于ZYG的质量控制。

关键词：滋肾养阴颗粒质量标准莫诺苷马钱苷金丝桃苷特女贞苷丹皮酚

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儿茶素通过激活Nrf2抗氧化信号通路抵御野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞综合征的研究

儿茶素通过激活Nrf2抗氧化信号通路抵御野百合碱诱导大鼠肝窦阻塞...

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2018第八届药物毒理学年会——创新技术、评估风险、保障安全

作者：景骁骐张家祺黄镇林盛雨辰季莉莉药物安全评价研究中心上海中医药大学中药标准化重点实验室和上海市复方中药重点实验室中药研究所上海中医药大学

肝窦阻塞综合征（Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS）是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的:探索核因子E2相关因子-2 （Nuclear factor erythroid 2-related... 详细信息

肝窦阻塞综合征（Hepatic sinusoidal obstruction syndrome,HSOS）是一种罕见却会危及生命的肝脏疾病。儿茶素是一种天然膳食黄酮醇化合物,其具有较强的抗氧化能力。目的:探索核因子E2相关因子-2 （Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）抗氧化信号通路在儿茶素（（+）-catechin hydrate,CAT）抑制野百合碱（Monocrotaline,MCT）诱导大鼠肝窦阻塞综合征中的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠分为4组（n=9～11）:（1）溶剂对照,（2） MCT （90mg/kg）,（3） MCT （90mg/kg）+CAT （40 mg/kg）,（4） CAT（40 mg/kg）。灌胃MCT或空白溶剂后6、30 h两次给予CAT,造模48 h后取血液和肝脏。血液分离血清检测谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）活力以及总胆汁酸（total bile acid,TBA）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）含量。肝组织分别进行病理切片、扫描电镜分析,检测肝脏谷胱甘肽抗氧化系统、基质金属蛋白酶9 （matrix metalloproteinase 9,MMP9）的表达等指标。培养原代人肝窦内皮细胞（Human hepatic sinusoidal endothelial cells,HHSECs）,分别以相关抑制剂、CAT及MCT孵育处理,同时做相关对照。MCT孵育72 h后检测细胞活力、细胞内活性氧分子（reactive oxygen species,ROS）的产生及Nrf2抗氧化系统相关基因和蛋白的表达等指标。结果:血清中AST、ALT活力以及TBA、TBIL含量,肝组织病理切片、扫描电镜分析和MMP9的表达都证明了儿茶素对野百合碱诱导的大鼠肝窦阻塞综合征有明显的改善。儿茶素抑制了野百合碱诱导的大鼠肝氧化应激损伤以及HHSEC中ROS的累积。儿茶素还能促进野百合碱诱导的大鼠及肝窦内皮细胞中Nrf2的核转位,继而上调Nrf2下游相相关基因的表达,如谷氨酸半胱氨酸连接酶催化/调节亚基（glutamate-cysteine ligase catalytic/modifier subunit,GCLC/GCLM）、醌氧化还原酶（NAD（P）H dehydrogenase（quinone 1）,NQO1）,血红素氧合酶-1 （heme oxygenase-1,HO-1）。此外,GCL的抑制剂L-buthionine-（S,R）-sulfoximine （BSO）、NQO1抑制剂diminutol （Dim）以及HO-1抑制剂zinc protoporphyrin （ZnPP）都能逆转儿茶素对野百合碱诱导内皮细胞毒性的保护作用。分子对接实验的结果提示儿茶素与Nrf2的抑制蛋白Kelch状ECH相关蛋白1 （Keap1）上Nrf2结合区域具有相互作用。结论:儿茶素对野百合碱诱导的大鼠肝窦阻塞综合征模型有明显的保护作用,而Nrf2抗氧化信号通路在其中发挥了重要作用。

关键词：儿茶素野百合碱肝窦阻塞综合征 Nrf2

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应用直接PCR技术的药用植物批量样本快速处理及分子鉴定

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药学学报 2017年第11期52卷 1763-1769页

作者：张金家徐红赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

直接PCR技术以微量样品快速裂解产物中DNA为模板,实现对目的基因的有效扩增。基于此,本文随机采集80种药用植物不同部位组织材料,以ITS序列为目的基因,用直接PCR技术进行扩增。通过反应体系优化,得到80个样品的全部ITS片段,扩增成功率为... 详细信息

直接PCR技术以微量样品快速裂解产物中DNA为模板,实现对目的基因的有效扩增。基于此,本文随机采集80种药用植物不同部位组织材料,以ITS序列为目的基因,用直接PCR技术进行扩增。通过反应体系优化,得到80个样品的全部ITS片段,扩增成功率为100%。对扩增片段测序并做Blast分析,与同种属植物ITS序列同源性为96%~100%。该方法避免了繁琐的DNA提取过程,只需取微量植物组织为起始材料,在保证结果准确、稳定的同时,提高了工作效率,为基于DNA条形码的药用植物批量样本的快速处理及分子鉴定提供了新的技术思路。

关键词：直接PCR技术 ITS DNA条形码药用植物分子鉴定

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黄药子诱导肝损伤大鼠血清脂肪酸的代谢轮廓

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药学学报 2017年第5期52卷 753-759页

作者：熊印华徐英杨莉王峥涛江西科技师范大学药学院江西南昌330013 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203

中药黄药子具有肝毒性,黄药子诱导的肝损伤大鼠的血清脂肪酸代谢轮廓尚不清楚。本文采用气相-质谱联用技术定量分析空白组、黄药子醇提物(ethanol extraction,ET)组和黄独素B(diosbulbin B,DB)组大鼠血清中16种游离脂肪酸(non-esterifie... 详细信息

中药黄药子具有肝毒性,黄药子诱导的肝损伤大鼠的血清脂肪酸代谢轮廓尚不清楚。本文采用气相-质谱联用技术定量分析空白组、黄药子醇提物(ethanol extraction,ET)组和黄独素B(diosbulbin B,DB)组大鼠血清中16种游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)和酯化脂肪酸(esterified fatty acids,EFA),借助化学计量学方法分析大鼠灌胃黄药子或黄独素B后血清中脂肪酸代谢轮廓的变化。NEFA含量测定结果显示,DB组棕榈酸、硬脂酸、棕榈油酸、油酸、异油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳三烯酸、花生四烯酸和二十二碳六烯酸含量显著降低;ET组亚油酸和二十碳三烯酸含量显著升高,花生四烯酸、二十二碳六烯酸含量显著降低。EFA含量测定结果显示,ET组和DB组棕榈酸、硬脂酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量显著降低。主成分分析表明,ET组和DB组的大鼠血清脂肪酸代谢轮廓明显偏离正常水平,且ET组偏离程度大于DB组。偏最小二乘法-判别分析表明,花生四烯酸和二十二碳六烯酸对ET和DB的肝毒性具有重要贡献,且与谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆红素具有良好的相关性,被鉴定为黄药子肝毒性的潜在生物标识物。本研究为深入研究黄药子的肝毒性的分子作用机制奠定基础。

关键词：脂肪酸黄药子黄独素B 肝毒性

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基于脂肪酸代谢轮廓分析川楝子的肝毒性研究

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中草药 2017年第15期48卷 3104-3109页

作者：熊印华刘晓杰王新堂杨莉王峥涛江西科技师范大学药学院江西南昌330013 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203

目的从脂肪酸代谢轮廓的角度评价川楝子(TF)水提醇沉物和川楝子+延胡索(TF+CR)水提醇沉物的小鼠肝毒性。方法采用气相-质谱联用技术定量分析对照组、TF组和TF+CR组小鼠血清中15种游离脂肪酸和酯化脂肪酸,结合化学计量学方法分析小鼠给... 详细信息

目的从脂肪酸代谢轮廓的角度评价川楝子(TF)水提醇沉物和川楝子+延胡索(TF+CR)水提醇沉物的小鼠肝毒性。方法采用气相-质谱联用技术定量分析对照组、TF组和TF+CR组小鼠血清中15种游离脂肪酸和酯化脂肪酸,结合化学计量学方法分析小鼠给药后脂肪酸代谢轮廓的变化和生物标识物。结果血清脂肪酸定量测定结果经主成分分析表明TF给药后小鼠的血清脂肪酸代谢轮廓明显偏离正常水平,而具有保肝作用的CR可逆转这种偏离;偏最小二乘法-判别分析表明棕榈油酸、十八碳烯酸和花生四烯酸对表征TF小鼠肝毒性具有重要贡献,可作为评价TF肝毒性的生物标识物。结论 TF肝毒性与脂肪酸的代谢轮廓密切相关。

关键词：川楝子延胡索脂肪酸肝毒性代谢轮廓棕榈油酸十八碳烯酸花生四烯酸

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维吾尔药复方木尼孜其颗粒剂的质量控制方法研究

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药物分析杂志 2017年第10期37卷 1799-1809页

作者：韦悦程娟娟程雪梅穆丹丹王峥涛王长虹上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203 新疆维吾尔药业有限责任公司乌鲁木齐830000

目的:研究复方木尼孜其颗粒(CMG)的质量控制方法,为制定其质量标准提供参考。方法:分别以甘草苷、异甘草苷、甘草酸、骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱和异株五加甲苷为定性、定量指标,建立CMG中甘草、骆驼蓬子、黑种草子3种药材的薄层鉴别及含... 详细信息

目的:研究复方木尼孜其颗粒(CMG)的质量控制方法,为制定其质量标准提供参考。方法:分别以甘草苷、异甘草苷、甘草酸、骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱和异株五加甲苷为定性、定量指标,建立CMG中甘草、骆驼蓬子、黑种草子3种药材的薄层鉴别及含量测定方法。以硅胶HSGF254为薄层色谱板,正丁醇-水-甲醇-三乙胺为展开剂,10%硫酸乙醇试剂显色后分别在日光和紫外366 nm条件下检视,进行TLC定性分析。采用C18色谱柱,以乙腈-乙酸铵为流动相,ELSD为检测器,建立HPLC定量分析方法。模拟口服给药胃肠道生理条件,以酸水处理制剂,建立指纹图谱,指认共有峰,为制剂到体内后的整体特征提供信息。结果:在建立的TLC条件下,可在紫外366 nm条件下检视去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱,在日光下检视甘草苷和异株五加甲苷。甘草苷、异甘草苷、甘草酸、骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱和异株五加甲苷质量浓度分别在14.66~469.20、3.11~99.40、12.51~400.40、22.13~708.00、18.93~605.60和12.58~402.40μg·mL^(-1)范围内呈良好线性关系,方法平均回收率及RSD分别在99.4%~101.1%和1.8%~3.0%范围内;10批样品中上述6个成分的平均含量分别为(1.37±0.23)、(0.30±0.04)、(1.72±0.23)、(4.16±0.55)、(2.27±0.36)和(2.21±0.40)mg·袋-1。CMG经酸水处理后供试液指纹图谱中18个共有峰保留时间的RSD均<0.5%,峰面积的RSD均<3.0%,除上述已指认的4个指标成分外还鉴定出4个成分:绿原酸,咖啡酸,阿魏酸,芹菜素-7-O-葡萄糖苷。结论:建立的定性及定量方法适用于CMG中多个活性成分的质量控制。

关键词：复方木尼孜其颗粒维吾尔药甘草骆驼蓬子黑种草子甘草苷异甘草苷甘草酸骆驼蓬碱去氢骆驼蓬碱异株五加甲苷中药质量控制

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正交试验优化滋肾养阴颗粒剂提取工艺

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中成药 2017年第1期39卷 213-215页

作者：林启焰谢凡程雪梅王长虹李文艳上海市浦东新区公利医院药剂科上海200135 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

目的通过正交试验法优化滋肾养阴颗粒的提取工艺。方法以莫诺苷、马钱苷、金丝桃苷、特女贞苷含有量以及浸膏得率为评价指标,加水量、提取次数、提取时间为影响因素,正交试验优化提取工艺。结果最佳条件为加16倍量水提取4次,每次2 h。... 详细信息

目的通过正交试验法优化滋肾养阴颗粒的提取工艺。方法以莫诺苷、马钱苷、金丝桃苷、特女贞苷含有量以及浸膏得率为评价指标,加水量、提取次数、提取时间为影响因素,正交试验优化提取工艺。结果最佳条件为加16倍量水提取4次,每次2 h。结论该方法稳定可靠,可用于滋肾养阴颗粒剂的制备。

关键词：滋肾养阴颗粒提取工艺正交试验

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豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

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中国药理学通报 2016年第6期32卷 779-783页

作者：邓超任改艳孙阿宁罗晓平王峥涛窦薇上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L^(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。

关键词： RAW264.7细胞 TLR4 MyD88 NF-κB iNOS 豆蔻明

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鼓槌石斛对小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变的改善作用及其机制研究

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中草药 2016年第11期47卷 1908-1913页

作者：余增洋盛雨辰周玲玉陆宾季莉莉上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海201203 上海中医药大学药物安全评价研究中心上海201203

目的观察鼓槌石斛乙醇提取物（ethanol extract of Dendrobium chrysotoxum，EEDC）对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变（NPDR）的改善作用及其机制。方法采用STZ诱导小鼠发生糖尿病,进而建立糖尿病并发症NPD... 详细信息

目的观察鼓槌石斛乙醇提取物（ethanol extract of Dendrobium chrysotoxum，EEDC）对链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变（NPDR）的改善作用及其机制。方法采用STZ诱导小鼠发生糖尿病,进而建立糖尿病并发症NPDR实验动物模型,再给予EEDC进行干预。采用视网膜组织伊文思蓝渗漏实验观察NPDR小鼠中血-视网膜屏障（BRB）的破坏情况;采用real-time PCR（RT-PCR）检测视网膜组织中白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β、肿瘤坏死因子（TNF-α）及早期生长反应因子（Egr-l）、组织因子（TF）、纤溶酶原激活物抑制剂l（Serpine l）的基因表达;进一步采用酶联免疫实验（ELISA）检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的量。结果与对照组相比,模型组小鼠视网膜组织伊文思蓝渗漏量明显增加,EEDC能够减少视网膜组织伊文思蓝渗透量;EEDC能够显著降低模型小鼠视网膜组织中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的基因表达;EEDC能够明显下调模型小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine l的量。结论 EEDC具有改善STZ诱导小鼠NPDR的作用,其机制为通过抑制NPDR小鼠视网膜和血清中增加的炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及与凝血/纤溶相关基因TF、Serpine l的基因表达,缓解BRB的破坏,从而发挥改善NPDR的作用。

关键词：鼓槌石斛糖尿病非增殖性糖尿病视网膜病变血视网膜屏障炎性因子

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