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上海中医药大学学报 2024年第3期38卷 7-14页

作者：肖亦菽陈敏谈荣慧郑小宇赵淑娟上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室教育部中药标准化重点研究室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中医药大学中药学院上海201203

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构... 详细信息

目的:克隆丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)转录因子SmERF081,分析SmERF081的靶基因。方法:以丹参转录组数据Unigene(c48961-g1)序列为参考,利用PCR扩增获得SmERF081基因序列;通过生物信息学预测SmERF081编码蛋白的理化性质、蛋白质结构等分子特征;使用MEGA 7软件构建系统进化树;对SmERF081进行异源表达和蛋白纯化;通过酵母单杂、双荧光素酶报告系统和化学发光法凝胶迁移实验(EMSA)鉴定SmERF081与SmCPS5启动子是否结合。结果:克隆得到SmERF081基因,cDNA全长453 bp(Genbank登陆号:OQ466089),编码151个氨基酸,相对分子质量16.46 kDa,等电点9.75。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,其高级结构主要由无规则卷曲构成。进化树分析表明SmERF081与拟南芥At1G28360.1、丹参SmERF8同源关系最近。原核表达结果显示,经IPTG诱导后SmERF081在大肠杆菌中成功异源表达,并通过纯化获得目的蛋白。酵母单杂、双荧光素酶报告基因检测和EMSA确认SmERF081可与丹参SmCPS5启动子结合。结论:鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF081,生物信息学分析及分子互作初步证实其靶基因为丹参SmCPS5二萜环化酶。

关键词：丹参 SmERF081 生物信息学靶基因

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中药材及其饮片质量等级标准研究进展与展望

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上海中医药杂志 2023年第1期57卷 87-95页

作者：陈倩萍谢琦李文艳王长虹上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203 上海市浦东新区公利医院药剂科上海200135

从性状评价、化学评价、生物活性、综合分析等方面综述中药材及其饮片质量等级标准的研究进展及方法,并分析了影响中药材及其饮片质量的因素,为制定科学、合理、可行的中药材及饮片质量等级标准开拓了思路。

关键词：中药中药材中药饮片质量标准辨状论质质量标志物研究进展

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高良姜素抑制胃癌MGC803细胞NF-κB通路促进自噬

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中国中药杂志 2021年第16期46卷 4167-4174页

作者：梁晓晖余明珠石海莲吴晓俊上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室上海201203

探究高良姜素对胃癌细胞MGC803能量代谢和自噬的影响及其可能的分子机制。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度高良姜素干预MGC803细胞48 h对细胞活力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测高良姜素对MG... 详细信息

探究高良姜素对胃癌细胞MGC803能量代谢和自噬的影响及其可能的分子机制。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度高良姜素干预MGC803细胞48 h对细胞活力的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测高良姜素对MGC803细胞自噬、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路、能量代谢相关蛋白的表达;实时荧光定量核酸扩增检测(Real-time quantitative PCR,qPCR)法检测高良姜素对MGC803细胞能量代谢相关蛋白mRNA表达的影响;自噬小体检测试剂盒检测高良姜素对MGC803细胞自噬体的作用;透射电子显微镜观察高良姜素对MGC803细胞自噬体和溶酶体的影响。裸鼠皮下注射MGC803细胞制备胃癌移植瘤模型,随机分组后,模型组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠,高良姜素组每天灌胃给予高良姜素(120 mg·kg^(-1)),阳性对照组腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)(50 mg·kg^(-1),1周2次),每3 d相同时间同一人用游标卡尺精确测量肿瘤大小及裸鼠体质量,给药21 d后处死动物,剥离肿瘤并称重,计算抑瘤率。结果显示,与对照组相比,高良姜素能够抑制MGC803细胞的活力;高良姜素可上调MGC803细胞Ⅱ型微管相关蛋白1轻链3B(microtuble-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)的蛋白表达,同时可抑制NF-κB通路相关蛋白的磷酸化水平;高良姜素促进MGC803细胞中自噬小体的形成;高良姜素对MGC803细胞能量代谢相关蛋白的表达水平无明显影响;120 mg·kg^(-1)高良姜素显著抑制荷瘤裸鼠胃癌肿瘤质量和体积的增长,并能够显著上调LC3BⅡ蛋白表达,同时可抑制NF-κB通路相关蛋白的磷酸化水平。结果表明,高良姜素体内外均能够抑制胃癌细胞MGC803的生长,其作用机制可能与其抑制NF-κB通路、促进自噬有关。

关键词：高良姜素胃癌自噬 NF-κB LC3B

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中药通过肠道菌群改善肥胖症及其相关代谢性疾病的作用机制研究进展

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上海中医药杂志 2023年第2期57卷 1-7页

作者：王紫轩薛琼雯罗亦轩蒋嘉瑞徐书杨杨莉王峥涛丁丽丽上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室暨国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

肥胖症及其相关代谢性疾病的发病率逐年增长,引发了全球性的公共健康问题。越来越多的研究发现肥胖症的发生发展与肠道菌群的结构及功能变化密切相关,两者关系的失衡被认为是代谢障碍的标志之一。中医药在治疗多种糖脂代谢紊乱引起的代... 详细信息

肥胖症及其相关代谢性疾病的发病率逐年增长,引发了全球性的公共健康问题。越来越多的研究发现肥胖症的发生发展与肠道菌群的结构及功能变化密切相关,两者关系的失衡被认为是代谢障碍的标志之一。中医药在治疗多种糖脂代谢紊乱引起的代谢性疾病中积累了丰富的经验,其在减重、改善糖脂代谢方面效果显著。但中药及其复方的有效成分口服生物利用度低,很难在靶器官达到起效浓度,而肠道可能是其主要作用器官。围绕肥胖症及其相关代谢性疾病与肠道菌群的相互作用,综述中药通过调节肠道菌群改善肥胖症、Ⅱ型糖尿病、代谢相关脂肪性肝病等代谢性疾病的研究进展,旨在为中药防治肥胖症等代谢性疾病提供理论依据,并为靶向肠道菌群抗肥胖及其并发症的药物研发提供参考策略。

关键词：肥胖代谢性疾病中药肠道菌群糖脂代谢 Ⅱ型糖尿病代谢相关脂肪性肝病

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中药品质调控与资源可持续利用的思考与方法探讨

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上海中医药大学学报 2024年第1期38卷 8-17页

作者：肖莹邱实陈瑞兵管芹陈万生上海中医药大学中药研究所中药新资源与品质评价国家中医药管理局重点研究室中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203 海军军医大学药学院上海200433

高品质中药资源是中医药全产业链健康发展的物质载体和战略基石。当前,大宗药材品质退化、珍稀濒危资源匮乏,优质中药资源需求和供给矛盾日益突出,成为制约中医药高质量发展的瓶颈问题。作者团队长期从事中药品质调控与资源可持续利用... 详细信息

高品质中药资源是中医药全产业链健康发展的物质载体和战略基石。当前,大宗药材品质退化、珍稀濒危资源匮乏,优质中药资源需求和供给矛盾日益突出,成为制约中医药高质量发展的瓶颈问题。作者团队长期从事中药品质调控与资源可持续利用研究。该文结合研究实例,从“道地药材品质形成机制研究、中药活性成分生源途径解析、中药材优良品种的培育、中药活性成分异源生物制造”几个方面阐述中药品质调控与资源可持续利用的思路和方法,为本领域相关研究提供参考和借鉴。

关键词：中药资源中药品质品质调控资源可持续利用

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川乌药理作用、毒性、质量控制方法研究进展

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中成药 2021年第3期43卷 722-729页

作者：陈良妮程雪梅陈勇王长虹广西中医药大学药学院广西南宁530000 上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

川乌在治疗风湿性关节炎方面有较好的效果,现代药理发现它还具有抗肿瘤作用,但其毒性较强,能引起严重的心脏毒性和神经毒性。目前,液质谱联用、一测多评等现代分析检测技术和数据处理方法越来越多应用到川乌安全性、有效性的质量控制中... 详细信息

川乌在治疗风湿性关节炎方面有较好的效果,现代药理发现它还具有抗肿瘤作用,但其毒性较强,能引起严重的心脏毒性和神经毒性。目前,液质谱联用、一测多评等现代分析检测技术和数据处理方法越来越多应用到川乌安全性、有效性的质量控制中。本文对川乌药理、毒性、质量控制方法的文献进行综述,以期为该药材深入研究提供参考。

关键词：川乌药理作用毒性质量控制方法

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冬凌草配方颗粒超高效液相色谱指纹图谱及多指标成分含量测定方法的建立

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上海中医药杂志 2022年第8期56卷 90-95,117页

作者：党蕊安定邦孙鑫谢琦管辉达程雪梅王长虹上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

目的建立冬凌草配方颗粒的超高效液相色谱(UPLC)法指纹图谱,且对冬凌草配方颗粒中多成分含量进行测定。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈、0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速... 详细信息

目的建立冬凌草配方颗粒的超高效液相色谱(UPLC)法指纹图谱,且对冬凌草配方颗粒中多成分含量进行测定。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈、0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min,检测波长350 nm,柱温为30℃,进样量为3μL。结果建立了10批冬凌草配方颗粒的指纹图谱,得到8个共有峰,并指认了4个成分峰,分别是咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、胡麻素,相似度在0.999~1.000之间。4种指标成分在各自浓度范围内呈良好的线性关系(R~2=0.9997~1.0000),平均加样回收率为90.27%~110.64%,RSD为0.07%~2.16%。结论该法重复性好,稳定可行,符合指纹图谱的分析要求,同时测定4种指标成分的含量作为其质量控制方法。

关键词：冬凌草配方颗粒超高效液相色谱指纹图谱含量测定中药研究

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基于超高效液相色谱指纹图谱和含量测定的党参和蜜麸炒党参配方颗粒质量评价

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上海中医药杂志 2022年第7期56卷 83-88页

作者：陈倩萍谢琦党蕊孙鑫安定邦程雪梅李文艳王长虹上海中医药大学中药研究所上海市复方中药重点实验室中药标准化教育部重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203

目的建立党参和蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和含量测定方法,并对其质量进行评价。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B进... 详细信息

目的建立党参和蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和含量测定方法,并对其质量进行评价。方法采用沃特世(Waters)ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以乙腈为流动相A,以0.1%甲酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,检测波长为268 nm,进样量为3μL。结果建立了蜜麸炒党参配方颗粒UPLC指纹图谱和含量测定方法,党参炔苷在2.4~100.0 mg·L^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.999 7),加样回收率(50%、100%、150%)分别为97.72%、96.23%、98.60%,平均加样回收率为97.52%,RSD为1.76%。方法的精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于3%。指纹图谱确定了9个共有峰,并指认了党参炔苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷宁、党参炔醇4个色谱峰。28批党参和蜜麸炒党参配方颗粒的党参炔苷含量介于0.06~0.39 mg·g^(-1)。根据主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)结果能明显区分党参和蜜麸炒党参配方颗粒,且不同企业的党参配方颗粒存在一定的差异。结论该法操作简便、检测效率高、专属性强,能同时用于蜜麸炒党参配方颗粒和党参配方颗粒的质量评价。

关键词：党参蜜麸炒党参配方颗粒超高效液相色谱中药研究

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EGF诱导DDP耐药SKOV3细胞死亡作用

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上海中医药大学学报 2024年第5期38卷 18-27页

作者：王永祥张司明赵丽杰陈秀慧余明珠马庆良石海莲上海中医药大学附属曙光医院妇产科上海每201203 上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点研究室上海中医药大学中药研究所上海201203 上海交通大学医学院附属新华医院妇产科上海200092

目的:考察表皮生长因子(EGF)对人卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞生长的体内外抑制作用。方法:酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测EGF含量;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测EGF对人卵巢上皮性癌细胞细胞活力的影响;裸鼠皮下注射SKOV3-DDP耐药细胞制备DD... 详细信息

目的:考察表皮生长因子(EGF)对人卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞生长的体内外抑制作用。方法:酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测EGF含量;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测EGF对人卵巢上皮性癌细胞细胞活力的影响;裸鼠皮下注射SKOV3-DDP耐药细胞制备DDP耐药卵巢癌移植瘤模型,随机分组后,EGF组和EGF+DDP组裸鼠每日灌胃EGF,Model组和DDP组裸鼠每日灌胃ddH_(2)O。1周后,DDP组和EGF+DDP组裸鼠腹腔注射DDP,Model组和EGF组小鼠每天注射0.9%NaCl溶液。同时,每日察看裸鼠的生长状态,每3 d相同时间测量一次肿瘤大小及裸鼠体重,给药37 d后处理动物,收集肿瘤并称重。结果:蓓丽雅泰国野葛根片(TPMT)能显著降低卵巢癌顺铂耐药患者的CA125水平。TPMT含有EGF(每片含45.763 ng)。与对照组相比,EGF能够促进A2780-DDP耐药细胞的细胞活力,但是能够抑制SKOV3-DDP耐药细胞的细胞活力。EGF(14 ng/kg)有抑制SKOV3-DDP低剂量(0.1μg/mL)耐药细胞移植瘤生长的趋势,但是无统计学差异。EGF(28 ng/kg)能够显著抑制SKOV3-DDP高剂量(2μg/mL)耐药细胞移植瘤的生长,甚至逆转了对顺铂的耐药性,与临床上观察到的结果一致。RNAseq后,Top20差异表达基因结果表明,EGF增强了ID4、ENSG00000283602、UQCRFS1P1、ENSG000000227632、ENSG0000267436、TMEM252、SDHAP1、ENSG_0000273276、RASAL3、ENSG_000256349 mRNA表达,并抑制了SKOV3/DDP细胞异种移植瘤组织中ENSG_0000280800、ENSG_00000281181、PSMD6-AS2、AP4B1-AS1、ENSG_10000263603、PFN1P8、ENSg_0000273047、LINC02754、SLC23A3、ENSG00001258757 mRNA的表达。KEGG分析表明,EGF通过调节TGF-β信号通路、调节干细胞多能性的信号通路、Ras信号通路,抑制SKOV3/DDP细胞皮下移植瘤的生长。结论:EGF在临床治疗顺铂耐药卵巢癌中具有重大价值,但可能有卵巢癌细胞分型和分子分型依赖性,并不能逆转所有的卵巢癌顺铂耐药。

关键词：表皮生长因子卵巢癌顺铂耐药

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蒙药砂蓝刺头定性与定量质量控制方法研究

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中草药 2021年第6期52卷 1759-1764页

作者：曹岚岚程雪梅杨立国王秀兰奥·乌力吉王长虹上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海中药标准化研究中心上海201203 内蒙古民族大学蒙医药学院蒙药研发国家地方联合工程研究中心内蒙古通辽028000

目的建立砂蓝刺头Echinops gmelini的质量控制方法。方法采用薄层色谱法,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1∶1∶0.8)为展开剂对砂蓝刺头花中1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮(MMQ)进行定性鉴别;建立砂蓝刺头HPL... 详细信息

目的建立砂蓝刺头Echinops gmelini的质量控制方法。方法采用薄层色谱法,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1∶1∶0.8)为展开剂对砂蓝刺头花中1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮(MMQ)进行定性鉴别;建立砂蓝刺头HPLC指纹图谱,并对MMQ的含量测定方法进行研究。结果建立的TLC方法对照品斑点清晰,分离度好;建立的指纹图谱分析方法能够区分砂蓝刺头与近源植物,标定了8个特征峰,并指认出其中4个成分。定量方法测定结果显示MMQ在2.024~151.800μg/mL呈良好线性关系,平均加样回收率为101.54%,RSD为1.46%。7批样品中MMQ的质量分数为0.13%~0.53%。结论建立的质量控制方法科学、可靠,可为砂蓝刺头质量标准的建立提供实验依据。

关键词：砂蓝刺头花质量控制薄层色谱法高效液相色谱法 1-甲基-4-甲氧基-8-(β-D-葡萄吡喃型糖苷)-2(1H)-喹啉酮

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