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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 629-634页

作者：卿玉波魏红江姜河海信吉阁李红许成盛查星琴潘伟荣曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明650201

本研究旨在开发出一种对COCs损伤小且采集效率和卵母细胞成熟率高的卵母细胞采集方法。从屠宰场采集来的卵巢运回实验室后随机分为3组,分别用抽吸法、解剖法和刀切过滤法3种方法采集COCs,然后进行体外成熟培养,通过对COCs采集效率、COC... 详细信息

本研究旨在开发出一种对COCs损伤小且采集效率和卵母细胞成熟率高的卵母细胞采集方法。从屠宰场采集来的卵巢运回实验室后随机分为3组,分别用抽吸法、解剖法和刀切过滤法3种方法采集COCs,然后进行体外成熟培养,通过对COCs采集效率、COCs完整性及卵母细胞体外成熟率的比较,研究解剖法、刀切过滤法和抽吸法3种采集方法对猪卵母细胞的采集效率和成熟率的影响。结果表明:每个卵巢采集COCs个数,刀切过滤法显著高于解剖法和抽吸法(P<0.05),而解剖法仅为1.55个,显著低于抽吸法(P<0.05);采集效率抽吸法最佳,采集和挑选单个COCs的时间显著低于解剖法和刀切过滤法(P<0.05),刀切过滤法次之,但显著低于解剖法(P<0.05);A、B级COCs比例,解剖法高达99.23%,显著高于其他2种方法(P<0.05),刀切过滤法与抽吸法差异不显著(P>0.05);卵母细胞的成熟率,解剖法和刀切过滤法都达到80%,二者间差异不显著(P>0.05),但显著高于抽吸法(P<0.05);100个成熟卵母细胞所需的卵巢数量,刀切过滤法最少,仅为17.4个,而解剖法和抽吸法分别高达80.6和90.3个;需要的总采集时间(采集和挑选的时间),刀切过滤法最低,仅为126.6min,而解剖法最高,为758.9min。综上所述,与抽吸法和解剖法相比,刀切过滤法是一种高效、快速的卵母细胞采集方法。

关键词：猪卵母细胞体外成熟培养抽吸法解剖法刀切过滤法

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版纳微型猪近交系RNF4基因克隆、多组织qPCR表达及功能生物信息学分析

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东北农业大学学报 2017年第3期48卷 24-30页

作者：张霞曾日彬霍金龙王配陈园园王淑燕云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201

RNF4基因调节精细胞分化和增殖过程,文章以Gen Bank下载的猪及近缘物种RNF4 mRNA序列为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)RNF4基因。应用qPCR分析15个重要组织mRNA表达谱,并对蛋白质序列作功能生物信息学分析,构建多物种... 详细信息

RNF4基因调节精细胞分化和增殖过程,文章以Gen Bank下载的猪及近缘物种RNF4 mRNA序列为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)RNF4基因。应用qPCR分析15个重要组织mRNA表达谱,并对蛋白质序列作功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得BMI RNF4 573 bp编码区序列(Gen Bank登录号:KU705638,对应氨基酸登录号:AOC89056),编码190个氨基酸,蛋白质分子质量(Mw)为21.43 ku,等电点(pI)为6.95。多组织荧光定量表达分析表明RNF4基因在尿道球腺、睾丸、肝、肺中高水平表达;在其他11个组织中呈中低水平表达。功能生物信息学分析表明RNF4蛋白质存在1个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列;N末端疏水,C末端疏水;有4类功能活性位点,位于细胞核概率为94.1%。系统进化分析表明,BMI与狗亲缘关系最近。结果为研究RNF4基因在猪精细胞分化和增殖方面作用奠定基础。

关键词： RING指环版纳微型猪近交系组织表达生物信息学

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猪SLA-Ⅱ类基因的研究概况

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云南农业大学学报（自然科学版） 2009年第5期24卷 759-763页

作者：潘伟荣张清政霍金龙查星琴牛自兵曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201

猪主要组织相容性复合体又称SLA,即为猪白细胞抗原,其编码基因位于猪的第7号染色体上,是一组紧密连锁、高度多态的基因群,包括多个不同位点,是编码移植抗原,控制免疫细胞各亚群间协同作用的一个基因复合体。它不仅与移植排斥有关,而且... 详细信息

猪主要组织相容性复合体又称SLA,即为猪白细胞抗原,其编码基因位于猪的第7号染色体上,是一组紧密连锁、高度多态的基因群,包括多个不同位点,是编码移植抗原,控制免疫细胞各亚群间协同作用的一个基因复合体。它不仅与移植排斥有关,而且广泛参与免疫应答的诱导和调节,在遗传、进化、行为、保护及生态等方面都具有重要的科学意义。就SLA-Ⅱ类区域基因目前的研究现状,对它的位置、分类、功能、多态、表达及应用等方面进行了系统阐述。

关键词：猪 MHC SLA 移植排斥免疫应答 SLA-Ⅱ类基因

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猪卵母细胞线粒体分布及线粒体DNA拷贝数变化

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畜牧兽医学报 2011年第5期42卷 635-640页

作者：成文敏霍金龙信吉阁潘伟荣黄言魏红江曾养志云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室昆明650201

本研究旨在观察猪卵母细胞线粒体分布及线粒体DNA拷贝数变化,以期作为判定哺乳动物卵母细胞胞质成熟的指标,同时也为今后克隆技术的发展和相关基因表达调控的研究提供基础。运用线粒体分子探针标记技术检测体外成熟不同时期卵母细胞中... 详细信息

本研究旨在观察猪卵母细胞线粒体分布及线粒体DNA拷贝数变化,以期作为判定哺乳动物卵母细胞胞质成熟的指标,同时也为今后克隆技术的发展和相关基因表达调控的研究提供基础。运用线粒体分子探针标记技术检测体外成熟不同时期卵母细胞中线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测其线粒体DNA拷贝数的变化趋势,揭示线粒体分布、线粒体DNA拷贝数变化与卵母细胞发育潜能的关系。结果表明,猪卵母细胞成熟前后,线粒体分布由未成熟的周边分布变为成熟后的均匀分布,并且线粒体簇变大,着色变深。卵母细胞成熟0、11、22h的mtDNA拷贝数分别为(2 519.52±940.39)、(3 421.47±345.71)和(9 747.58±1 928.24),他们之间无显著性差异(P>0.05)。卵母细胞成熟33h的mtDNA拷贝数为(39 913.61±1 180.26),显著高于成熟0、11和22h的mtDNA拷贝数(P<0.05)。卵母细胞成熟44h的mtDNA拷贝数为(130 074.30±78 119.45),显著高于成熟33h的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,随着卵母细胞成熟进程的推进,线粒体活性增强,线粒体DNA拷贝数明显增加。

关键词：猪卵母细胞体外成熟线粒体分布线粒体DNA拷贝数.

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版纳微型猪近交系PRPS2基因克隆、表达及生物信息学分析

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农业生物技术学报 2017年第3期25卷 425-433页

作者：曾日彬张霞霍金龙王配王淑燕王雪飞陈园园曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南农业大学动物科学技术学院

酸核糖焦磷酸合成酶Ⅱ(phosphoribosylpyrophosphate synthetases 2,PRPS2),是生物体合成的关键酶,在控制肿瘤发生、促进细胞凋亡、抑制细胞增殖以及促进精子生成方面具有重要作用。为研究磷酸核糖焦磷酸合成酶Ⅱ基因(PRPS2)在猪(Sus sc... 详细信息

酸核糖焦磷酸合成酶Ⅱ(phosphoribosylpyrophosphate synthetases 2,PRPS2),是生物体合成的关键酶,在控制肿瘤发生、促进细胞凋亡、抑制细胞增殖以及促进精子生成方面具有重要作用。为研究磷酸核糖焦磷酸合成酶Ⅱ基因(PRPS2)在猪(Sus scrofa)雄性不育方面的作用及基因编码的蛋白质功能,从Gen Bank下载猪及近缘物种的PRPS2 m RNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)PRPS2基因,应用q RT-PCR分析15个重要组织的m RNA表达谱,并对蛋白质序列进行功能生物信息学分析。研究获得了BMI PRPS2 1 282 bp的c DNA序列(Gen Bank登录号:KU705637,对应的氨基酸登录号:AOC89055),编码318个氨基酸。组织表达谱显示,PRPS2基因在精囊腺中呈现高表达水平,在其他14个组织中呈现中低表达水平。生物信息学分析表明,PRPS2蛋白分子量(Mw)为34.83 k D,等电点(p I)为6.15,存在2个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列,N末端和C末端疏水,有4类功能活性位点,位于细胞质的概率是89%;PRPS2基因在进化中高度保守。该研究结果将为进一步研究PRPS2基因在猪雄性不育方面的作用及功能提供参考。

关键词：磷酸核糖焦磷酸合成酶Ⅱ(PRPS2) 版纳微型猪近交系(BMI) 组织表达生物信息学

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猪新基因KCNJ12编码区电子克隆、RT-PCR验证和组织表达分析

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华北农学报 2014年第1期29卷 41-49页

作者：秦彩艳霍金龙王配王淑燕苗永旺潘伟荣査星琴曾养志云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

通过NCBI下载猪近缘物种的KCNJ12基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列、参考基因组序列和高通量基因组序列。利用Lasergene软件电子克隆猪KCNJ12基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以版纳微型猪近交系BMI为研究... 详细信息

通过NCBI下载猪近缘物种的KCNJ12基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列、参考基因组序列和高通量基因组序列。利用Lasergene软件电子克隆猪KCNJ12基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以版纳微型猪近交系BMI为研究材料进行试验验证,同时应用半定量RT-PCR技术对BMI 31种重要组织进行了表达分析。研究获得了猪KCNJ12 1 290 bp的编码区序列(GenBank登录号:KC505155,对应的氨基酸登录号:AGK36093)。生物信息学分析表明,该基因编码429个氨基酸,预测的蛋白质分子量(Mw)为48.63 kDa,等电点(pI)为5.66。蛋白质结构分析显示,KCNJ12存在2个保守域,3个跨膜结构域,无信号肽;疏水性分析表明其N端和C端均具有亲水性;亚细胞定位显示,该蛋白位于细胞质的概率是94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、羊的亲缘关系最近。组织表达分析表明,KCNJ12基因在31个被检组织中存在明显的表达差异,在小脑中高表达;在肌肉、结肠、盲肠、食管、皮肤、大脑、下丘脑及脊髓中中度表达;在胸腺、肝、直肠及脑干中低表达;在颌下腺、睾丸、甲状腺、附睾、肺、心、脾、肾上腺、淋巴结、肾、胰脏、十二指肠、空肠、回肠、胃、垂体、松果体及舌下腺中不表达。研究结果为该基因在猪中的功能研究提供依据。

关键词：内向整流型钾离子通道亚家族J成员12 电子克隆版纳微型猪近交系生物信息学组织表达

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版纳微型猪近交系细胞色素P450家族基因CYP1A1克隆及生物信息学分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2017年第3期32卷 442-449页

作者：王淑燕王配霍金龙查星琴潘伟荣张霞王雪飞云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,... 详细信息

【目的】克隆版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)细胞色素P450家族基因CYP1A1的编码区序列,并对其进行生物信息学分析。【方法】利用RT-PCR方法获得CYP1A1基因的全长CDS序列,运用生物信息学对其核酸及蛋白序列进行分析,构建系统进化树。【结果】获得的BMI CYP1A1 CDS长度为1551 bp,编码516个氨基酸,蛋白质分子量为58.39 ku,等电点为7.83,位于内质网的概率是94.1%。CYP1A1蛋白质含有1个细胞色素P450半胱氨酸血红素配体位点,1个N-豆蔻酰化位点,1个酰胺化作用位点,2个N-糖基化位点、6个蛋白酶C磷酸化位点和5个蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。11个物种构建的系统进化分析表明,BMI(猪)CYP1A1与牛和山羊的关系最近。【结论】以上结果将为进一步研究版纳微型猪近交系CYP1A1基因功能奠定基础。

关键词：细胞色素P450家族 CYPIAI基因编码区序列版纳微型猪近交系生物信息学药物代谢

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版纳微型猪近交系CPN10克隆、亚细胞定位、组织表达和生物信息学分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2019年第2期34卷 255-262页

作者：宋雪秦彩艳霍金龙王配李罗刚张霞王淑燕王雪飞云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

【目的】以版纳微型猪近交系(BMI)为材料克隆CPN10基因,从亚细胞、m RNA水平及生物信息学方面初步探索其结构及功能特性,为该基因在猪—人异种器官移植免疫排斥中的作用研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法获得CPN10基因c DNA序列,应... 详细信息

【目的】以版纳微型猪近交系(BMI)为材料克隆CPN10基因,从亚细胞、m RNA水平及生物信息学方面初步探索其结构及功能特性,为该基因在猪—人异种器官移植免疫排斥中的作用研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法获得CPN10基因c DNA序列,应用分子克隆技术构建目的基因和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-CPN10,将其转染猪肾细胞PK15进行瞬时表达,通过EGFP示踪CPN10在PK15细胞中的表达和定位。进一步应用荧光定量技术明确其mRNA的多组织表达特征。最后利用生物信息学分析CPN10蛋白质的结构特征。【结果】得到BMI CPN10 CDS 309 bp序列(GenBank登录号:KM098149),成功构建了BMI CPN10基因的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1-CPN10,转染PK15细胞且主要在细胞质中检测到绿色荧光蛋白表达。多组织荧光定量表达分析表明:BMI CPN10 mRNA在皮肤中具有最高表达量,在肝和肾上腺中的表达量较高,在其余各组织中呈中低度表达或几乎不表达。生物信息学分析表明:CPN10编码102个氨基酸,其蛋白分子量为10.93 ku,等电点为8.89,含1个CPN10保守结构域和5个磷酸化位点,二级结构以延伸链结构为主,无跨膜螺旋结构和信号肽。【结论】CPN10基因定位在细胞质中,在皮肤中高表达,该研究结果为进一步研究该基因在免疫排斥方面的功能奠定了理论基础。

关键词：伴侣蛋白10 (CPN10) 异种移植亚细胞定位组织表达生物信息学

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版纳微型猪近交系AO血型A基因的克隆及生物信息学分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2018年第1期33卷 56-62页

作者：潘伟荣查星琴成文敏卿玉波肖晶魏红江曾养志霍金龙云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201

【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化... 详细信息

【目的】扩增版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】提取版纳微型猪近交系猪组织的RNA,反转录成为cDNA,利用RT-PCR方法扩增AO血型A基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。【结果】版纳微型猪近交系AO血型A基因编码区全长1 095 bp,编码364个氨基酸,氨基酸序列与GenBank上登录的猪AO基因氨基酸序列相似性为99.5%。【结论】版纳微型猪近交系的AO血型A基因除了与黑猩猩、人和小鼠亲缘关系较远外,与牦牛、藏羚羊、水牛、小须鲸、绵羊、羊驼、野骆驼、山羊的关系都较为接近,其中与山羊的亲缘关系最为接近。

关键词：版纳微型猪近交系 AO血型A基因克隆测序生物信息学

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版纳微型猪近交系STRA8基因克隆及功能生物信息学分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2019年第3期34卷 432-439页

作者：李罗刚王淑燕潘伟荣王配张霞王雪飞霍金龙云南省版纳微型猪近交系重点实验室云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

【目的】以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,初步研究STRA8基因的功能,为该基因在猪精子形成过程的作用研究奠定基础。【方法】以GenBank下载的猪STRA8基因序列JQ965783及多条猪EST序列为参考序列,设计特异性... 详细信息

【目的】以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,初步研究STRA8基因的功能,为该基因在猪精子形成过程的作用研究奠定基础。【方法】以GenBank下载的猪STRA8基因序列JQ965783及多条猪EST序列为参考序列,设计特异性引物扩增版纳微型猪近交系(BMI) STRA8基因。对STRA8蛋白质进行理化特性和功能生物信息学分析,包括二级结构、蛋白功能域、疏水性、跨膜结构、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点以及蛋白质功能分析;搜索并下载其他物种的STRA8蛋白质序列构建多物种系统进化树。应用实时荧光定量PCR技术检测BMI STRA8在版纳微型猪近交系15个组织中的mRNA转录表达水平。【结果】获得了包含编码序列1 101 bp的全长序列1 316 bp,编码366个氨基酸,序列已提交GenBank,基因登录号KU705622,蛋白质分子量(Mw) 41.06 ku,等电点(pI) 4.52。STRA8二级结构中α螺旋含量最高,占52.19%;含有1个蛋白功能域;在氨基端有1个HLH结构域和1个卷曲螺旋区域,在羧基端有2个低复杂度区域;疏水性结果表明STRA8基因N末端、C末端均亲水;无跨膜结构,无信号肽序列;该蛋白质位于细胞核中的概率是56.5%;STRA8蛋白共有34个磷酸化位点;系统进化结果表明:BMI与羊、水牛的相似度最高。STRA8基因mRNA在检测的BMI 15个组织中呈现差异表达现象,睾丸中表达量最高。【结论】结果将为进一步研究STRA8基因在猪精子发生方面的作用及功能提供参考。

关键词： STRA8 版纳微型猪近交系生物信息学

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