检索结果-内蒙古大学图书馆

筛选的差异表达microRNAs对猪卵母细胞Npm2基因的表达调控及作用研究

畜牧兽医学报 2024年第11期55卷 5035-5049页

作者：李河林蒋玉芬程娜韩宇辰霍晓颖苏宏鼎常悦方玉珠王配贾宝瑜魏红江成文敏云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南农业大学动物医学院昆明650201 云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201

旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;... 详细信息

旨在研究卵母细胞中筛选的差异表达microRNAs对Npm2(nucleoplasmin 2)基因的调控作用。本研究采集屠宰场卵巢,收集GV期卵母细胞进行体外成熟培养,收集MⅡ期卵母细胞。使用qPCR检测筛选的差异表达miRNAs在GV、MⅡ期卵母细胞的表达水平;双荧光素酶报告试验验证预测的miRNA是否与靶基因Npm2存在结合位点;在体外成熟培养液中添加miRNAs模拟物/抑制物,验证miRNA对卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎体外发育能力的影响。添加最适浓度的miRNAs模拟物/抑制物后,使用花生凝集素染色试验检测皮质颗粒分布和qPCR检测Npm2 mRNA表达水平。结果表明,MⅡ期卵母细胞中miR-150、miR-7138-5p表达显著高于GV期卵母细胞(P<0.05),miR-296-3p、miR-423-3p表达水平极显著低于GV期卵母细胞(P<0.01),表达趋势与测序结果一致。miR-32表达水平无显著差异(P>0.05)。双荧光素酶报告试验结果表明,miR-32、miR-7138-5p、miR-296-3p与Npm2存在结合位点,荧光强度极显著下调(P<0.01);miR-150与Npm2存在结合位点,荧光强度显著下调(P<0.05);miR-296-5p、miR-423-3p与Npm2不存在结合位点,荧光强度无显著变化(P>0.05)。通过在体外成熟培养液中添加不同浓度miRNAs模拟物/抑制物以确定最适浓度,添加miR-32抑制物、miR-296-5p模拟物、miR-296-5p抑制物、miR-423-3p模拟物、miR-423-3p抑制物、miR-7138抑制物、miR-150模拟物、miR-150抑制物后皮质颗粒荧光强度极显著下调(P<0.01);添加miR-296-3p抑制物、miR-7138-5p模拟物后皮质颗粒荧光强度显著下调(P<0.05)。MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量极显著高于GV期卵母细胞,添加最适浓度miR-150、miR-296-3p、miR-296-5p、miR-7138-5p模拟物和/或抑制物Npm2 mRNA表达量与对照组有显著差异(P<0.05),添加miR-32、miR-423-3p模拟物/抑制物后MⅡ期卵母细胞Npm2 mRNA表达量与对照组无显著差异(P>0.05)。筛选的差异miRNA(如miR-296-3p、miR-7138-5p)可能通过调控Npm2表达影响卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育,可为猪卵母细胞microRNAs与靶基因复杂调控网络研究提供基础。

关键词：猪卵母细胞 microRNA Npm2

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多西环素长期高剂量诱导对滇南小耳猪肝肾功能的影响

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生物技术通报 2025年第4期41卷 345-354页

作者：娄亚楠熊晶晶娄亚玲王福斌程文杰陈晓晶李加宇普少瑕魏红江赵红业云南农业大学、云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201 云南农业大学动物医学院昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南农业大学食品科学技术学院昆明650201

【目的】探究Tet-On系统中多西环素(doxycycline,Dox)持续高剂量摄入对实验猪健康状态的影响。【方法】选用9只6月龄滇南小耳猪作为模型动物,分别设置3倍(30 mg/kg)和5倍(50 mg/kg)推荐剂量组及空白对照组。各组实验猪均肌肉注射相应药... 详细信息

【目的】探究Tet-On系统中多西环素(doxycycline,Dox)持续高剂量摄入对实验猪健康状态的影响。【方法】选用9只6月龄滇南小耳猪作为模型动物,分别设置3倍(30 mg/kg)和5倍(50 mg/kg)推荐剂量组及空白对照组。各组实验猪均肌肉注射相应药物或生理盐水,持续30 d,分别采集第0、10、20、28天的血液进行血常规及肝肾功能指标测定,末次给药后2 h采集实验猪肝、肾进行形态学观察、病理学检测及疾病检测。【结果】与对照组相比,30 mg/kg剂量组Lym#、MPV下降,而PLT上升;50 mg/kg剂量组中这些指标的变化更为显著,且RDW-SD显著降低,同时ALT、MG、P等指标升高,NA、CO_(2)、CYSC等指标下降,显示出较为明显的肝肾功能损伤。组织病理学检查结果显示30 mg/kg和50 mg/kg剂量组实验猪的肝脏和肾脏均出现不同程度的病变,且50 mg/kg剂量组的肝脏炎性细胞和红细胞浸润更为严重,肾脏则显示出更明显的萎缩和组织结构损伤。病原感染检测结果排除病毒感染对实验结果的干扰。【结论】高剂量Dox长期使用会对实验猪的肝肾功能造成显著损伤,且损伤程度与Dox的剂量呈正相关,为大型基因编辑动物的条件性诱导表达相关研究提供参考。

关键词：盐酸多西环素 Tet-On系统滇南小耳猪肝肾损伤

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亚洲象不同组织来源成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 3752-3761页

作者：李晋达彭自伟 Muhammad Ameen Jamal 角德灵魏红江云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201 云南农业大学动物医学院昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201

【目的】建立不同年龄、不同组织来源的亚洲象成纤维细胞系,并进行冷冻保存和细胞生物学特性研究,为实现濒危动物遗传资源保存和开发利用提供理论依据。【方法】分别采集6岁龄亚洲象耳缘组织(AE00)、新生亚洲象脐带组织(AE01)及死亡16 ... 详细信息

【目的】建立不同年龄、不同组织来源的亚洲象成纤维细胞系,并进行冷冻保存和细胞生物学特性研究,为实现濒危动物遗传资源保存和开发利用提供理论依据。【方法】分别采集6岁龄亚洲象耳缘组织(AE00)、新生亚洲象脐带组织(AE01)及死亡16 h后的4岁龄亚洲象耳缘组织(AE02)样品,分别建立成纤维细胞系并进行传代培养和冷冻保存,通过细胞形态学、增殖能力、衰老及凋亡水平分析不同年龄、不同组织来源成纤维细胞的生物学特性,并进行绿色荧光蛋白(GFP)转染筛选和核型检测,分析亚洲象成纤维细胞的遗传稳定性。【结果】成功建立了3头亚洲象成纤维细胞系并进行冷冻保存,复苏后细胞均能保持一定水平的活力,经连续传代培养后,细胞形态均呈梭形;AE02成纤维细胞冻存活力、细胞增殖能力均最佳,细胞凋亡率依次为AE01(16.7%)>AE00(6.4%)>AE02(3.8%),细胞衰老率依次为AE00(35.9%)>AE01(17.2%)>AE02(7.8%);AE02细胞经长达19次传代后,细胞染色体数目稳定,AE00进行GFP转染筛选可获得稳定表达GFP的亚洲象成纤维细胞系。【结论】本研究成功建立了不同年龄、不同组织来源的亚洲象成纤维细胞系,细胞形态均为梭形,不同年龄、不同组织来源的成纤维细胞系增殖能力、细胞衰老及凋亡水平均不同,经连续传代后细胞染色体数目稳定,能实现外源基因的稳定转染和长期筛选,可作为濒危动物遗传资源长期保存和复活个体的重要方法之一。

关键词：亚洲象成纤维细胞生物学特性

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GTKO猪的生产及猪到恒河猴肾脏异种移植

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器官移植 2025年

作者：王艳常悦杨畅魏太云霍晓颖陈博威王娇祥赵恒郭建雄赵红芳张雄朱飞艳成文敏赵红业徐凯祥 Muhammad Ameen Jamal 王振迪魏红江云南农业大学动物医学院云南农业大学动物科学技术学院云南省小型猪基因修饰与异种器官移植重点实验室华中科技大学同济医学院附属协和医院

目的探讨α-1, 3半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除（GTKO）滇南小型猪的构建及猪到恒河猴的肾脏异种移植，评估GTKO猪的有效性。方法利用CRISPR/Cas9基因修饰系统和体细胞克隆技术构建GTKO滇南小型猪，通过聚合酶链反应、Sanger测序... 详细信息

目的探讨α-1, 3半乳糖基转移酶（GGTA1）基因敲除（GTKO）滇南小型猪的构建及猪到恒河猴的肾脏异种移植，评估GTKO猪的有效性。方法利用CRISPR/Cas9基因修饰系统和体细胞克隆技术构建GTKO滇南小型猪，通过聚合酶链反应、Sanger测序、免疫荧光染色等验证GTKO猪的表型。流式细胞术检测抗原抗体（IgM）结合与补体依赖细胞毒性，并进行GTKO猪到恒河猴的肾脏异种移植，监测受体猴体液免疫、细胞免疫、凝血及生理指标，利用超声检查、苏木素-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色等分析移植肾功能和病理学改变。结果靶向滇南小型猪GGTA1基因第4外显子设计单向导RNA(sgRNA)，将p GL3-GGTA1-sgRNA1-GFP载体转染到滇南小型猪胎儿成纤维细胞中，经嘌呤霉素筛选后，获得的C59#和C89#两个细胞克隆点均鉴定为GGTA1基因敲除克隆点，经扩大培养形成细胞系后混合用作供体细胞进行体细胞克隆，并将重构胚胎移植至三元杂代孕母猪输卵管中，获得13头胎儿猪，其中F04和F11胎儿的GGTA1基因发生双等位基因突变，且F04核型正常，利用此GTKO胎儿猪进行重克隆，并将重构胚胎移植至三元杂代孕母猪输卵管中，共获得7头存活仔猪，其均不表达α-Gal抗原表位。20#恒河猴血清IgM与GTKO猪PBMC结合数量减少，且GTKO猪PBMC在补体依赖细胞毒性实验中的存活率高于野生型猪。获取GTKO猪肾并进行灌注直至完全变白，切除受体猴左肾后进行猪肾异位移植，血管吻合完成后开放血流，猪肾迅速变为粉红色，未发生超急性排斥反应（HAR）,6 min后输尿管出现尿液，表明肾移植术成功，再切除受体右肾。移植术后7 d移植肾血流供应良好，受体猴血清肌酐水平稳定，血清钾和胱抑素C水平得到有效控制，但在移植术后10 d均升高。移植术后7 d受体猴体内白细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞水平均升高，血小板计数和纤维蛋白原水平均降低，而活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间和凝血酶原时间均较为稳定，之后呈上升趋势。受体猴存活10 d，尸检发现移植肾充血、肿胀和坏死，肾组织中少量IgG沉积，大量IgM、补体C3c和C4d沉积，CD68+巨噬细胞浸润。结论GTKO滇南小型猪肾脏可在恒河猴体内维持一定时间的正常肾功能，并有效克服HAR，证实GTKO猪用于异种移植有效。

关键词： GGTA1基因敲除猪恒河猴肾脏异种移植基因修饰超急性排斥反应免疫抑制外周血单个核细胞体细胞核移植

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AMPK介导的饥饿条件下小鼠肝细胞能量代谢转换及脂肪自噬

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云南农业大学学报(自然科学版) 2024年第6期39卷 48-58页

作者：张晓银苏宏鼎卯升义杨畅角德灵王晶魏红江赵红业云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室云南农业大学云南昆明650201 云南农业大学植物保护学院云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 云南农业大学动物医学院云南昆明650201

【目的】通过探究饥饿条件下小鼠肝细胞内能量代谢的过程,揭示其营养感应的变化,筛选调节肝细胞内自噬及能量调控的关键通路,阐明脂质响应能量动员的降解机制。【方法】近交系小鼠(C57/B6)分别完全禁食0、24和48 h,按时间点记录小鼠血... 详细信息

【目的】通过探究饥饿条件下小鼠肝细胞内能量代谢的过程,揭示其营养感应的变化,筛选调节肝细胞内自噬及能量调控的关键通路,阐明脂质响应能量动员的降解机制。【方法】近交系小鼠(C57/B6)分别完全禁食0、24和48 h,按时间点记录小鼠血糖和体质量的变化,取各组小鼠肝脏组织进行过碘酸雪夫染色和电镜观察;采用RT-qPCR检测糖脂代谢和自噬相关基因mRNA的相对表达量;采用Western-blot检测自噬和能量感应AMPK通路中关键蛋白的表达。【结果】饥饿24和48 h后,小鼠肝组织内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的相对表达量极显著升高,P62蛋白的相对表达量显著降低。饥饿处理引起小鼠肝细胞内主要能量来源发生转换,脂滴招募自噬基因ATG2A和PLIN2的mRNA表达显著上调,线粒体膜蛋白TOM20以及调控能量代谢和脂噬的P-AMPK、P-FOXO1蛋白表达极显著上调,表明饥饿处理导致小鼠肝细胞发生了线粒体自噬和脂噬。【结论】饥饿24 h后,小鼠机体主要能量来源由以糖代谢为主转换为以脂质代谢为主,饥饿处理可能通过激活AMPK和FOXO1促进储存于小鼠肝细胞内的脂质发生脂噬降解,释放游离脂肪酸氧化供能。

关键词：饥饿能量代谢转换脂肪自噬腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)

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医用小型猪选育方法和应用进展

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畜牧兽医学报 2023年第7期54卷 2667-2682页

作者：连玉举张致远廖晓波魏红江印遇龙刘梅湖南农业大学动物科学技术学院长沙410128 中南大学湘雅二医院胸心外科长沙410011 云南农业大学动物医学院云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201

模式动物广泛应用于人类疾病研究中。随着人类医学研究的深入,啮齿动物、犬、猴等经典模式动物不能完全满足科学研究的需要,而小型猪逐渐成为现有医用模式动物的有效补充。本文介绍了小型猪的基本生物学特性(包括解剖学和生理学特点),... 详细信息

模式动物广泛应用于人类疾病研究中。随着人类医学研究的深入,啮齿动物、犬、猴等经典模式动物不能完全满足科学研究的需要,而小型猪逐渐成为现有医用模式动物的有效补充。本文介绍了小型猪的基本生物学特性(包括解剖学和生理学特点),论述小型猪作为医用模式动物的优势和价值。同时,介绍了国内外18种不同品种小型猪的主要特征、产地、选育方式、应用进展等情况。此外,本文也回顾分析了目前以小型猪作为模式动物,在心血管、代谢、异种移植等领域的应用现状,以期为中国小型猪的种质资源保护、开发为医用模式动物提供参考,进而助力人类疾病研究。

关键词：小型猪模式动物选育方法心血管系统疾病

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GTKO/hCD55基因编辑异种器官移植供体猪的构建及功能验证

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实验动物与比较医学 2025年

作者：王娇祥张璐陈姝含角德灵赵恒魏太云郭建雄徐凯祥魏红江云南农业大学云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室云南农业大学云南省异种器官移植工程研究中心云南农业大学动物科学技术学院云南农业大学动物医学院

目的开发GTKO/hCD55基因编辑异种器官移植供体猪并进行功能验证。方法利用CRISPR/Cas9、piggyBac（PB）转座子技术和体细胞克隆技术，构建GTKO/hCD55基因编辑的滇南小耳猪。再通过PCR、Sanger测序、细胞流式、免疫荧光、重亚硫酸盐测... 详细信息

目的开发GTKO/hCD55基因编辑异种器官移植供体猪并进行功能验证。方法利用CRISPR/Cas9、piggyBac（PB）转座子技术和体细胞克隆技术，构建GTKO/hCD55基因编辑的滇南小耳猪。再通过PCR、Sanger测序、细胞流式、免疫荧光、重亚硫酸盐测序分析GTKO/hCD55猪的表型及功能。结果将载体转染至成纤维细胞后，经药物筛选获得48个单细胞克隆点，挑选两个单细胞克隆点进行体细胞克隆，获得两个33 d的胎猪。F01胎猪的GGTA1基因型为-17 bp和WT，F02胎猪的GGTA1基因型为-26 bp/+2 bp和-3 bp。两个胎猪的hCD55 mRNA表达量均与野生型（WT）猪有显著差异，选择F02胎猪作为供体细胞来源进行重克隆后获得11头成活仔猪，鉴定均为GTKO/hCD55基因编辑猪。这些猪αGal抗原表达缺失，但hCD55出现弱表达或不表达的情况。因此，对hCD55基因的CpG岛进行甲基化分析，结果表明在不表达hCD55的肾脏组织中hCD55基因的CpG岛被完全甲基化，而表达hCD55的肾脏组织中hCD55基因的CpG岛未被甲基化或部分被甲基化。对hCD55基因的CpG岛进行密码子优化降低CG含量后，可实现hCD55基因的稳定表达。此外，抗原抗体结合实验表明人IgM结合到GTKO/hCD55基因编辑猪成纤维细胞的数量显著小于WT猪；补体依赖的细胞毒性实验表明GTKO/hCD55猪的成纤维细胞成活率明显高于WT猪。结论成功获得了GTKO/hCD55基因编辑异种器官移植供体猪，通过优化密码子降低过表达基因的CG含量，可有效避免甲基化导致的基因表达沉默，本研究为异种器官移植研究提供了可用的供体猪，并为供体猪的开发提供了借鉴。

关键词：异种器官移植滇南小耳猪 GGTA1 hCD55

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版纳微型猪1型糖尿病模型的构建方法初探

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实验动物与比较医学 2024年第4期44卷 384-392页

作者：刘凯胡毓琦耿亚田程文杰王晶魏太云赵红芳李加宇角德灵赵红业魏红江云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南农业大学动物医学院昆明650201

目的构建1型糖尿病微型猪模型,并探索有效延长模型猪生存周期的术后护理方案。方法选取7头版纳微型猪进行胰腺切除手术。术后3~5 d通过补充葡萄糖、维生素及抗生素等方法帮助其恢复。每日早晚两次检测血糖、尿糖水平,据此调整胰岛素补... 详细信息

目的构建1型糖尿病微型猪模型,并探索有效延长模型猪生存周期的术后护理方案。方法选取7头版纳微型猪进行胰腺切除手术。术后3~5 d通过补充葡萄糖、维生素及抗生素等方法帮助其恢复。每日早晚两次检测血糖、尿糖水平,据此调整胰岛素补充量。每日巡视模型猪并记录其饮食欲、精神状态、虚弱程度、皮肤破损情况、粪尿量等数据,每周称量体重,直至动物死亡。根据模型猪状态及时给予葡萄糖注射液和乳酸林格氏液等以补充营养并纠正电解质失衡。结果7头版纳微型猪在胰腺切除术后均表现为随机血糖浓度大于11.1 mmol/L,远超正常猪的平均血糖值(6.0 mmol/L),尿糖阳性,且其体重呈渐进性下降等典型的糖尿病临床表征,提示1型糖尿病模型构建成功。此外,存活时间超过8周的1型糖尿病猪还出现了渐进性被毛脱落及皮肤破溃的情况;在模型猪无法站立乃至无法自主进食时进行安乐死,并采集其肝脏、肾脏及皮肤等受累及的器官组织进行病理组织切片及HE染色,病理组织切片也可见长期高血糖导致的肝脏淤血、肝糖原大量蓄积、肝细胞气球样变和渐进性肝脏纤维化,肾小球淤血、肾小管上皮细胞空泡变性和蛋白尿,真皮层出现淤血、血管壁变薄以及不同程度的角化不全和角化不良等肝脏、肾脏及皮肤组织病变。本研究构建的版纳微型猪糖尿病模型平均生存期为44 d,最长可生存121 d。结论通过胰腺切除术可成功建立版纳微型猪的1型糖尿病模型,进一步通过术后精心护理可获得并发症明显的长期1型糖尿病微型猪模型,这为1型糖尿病治疗策略研究提供了稳定的大动物模型。

关键词：版纳微型猪 1型糖尿病模型胰腺切除术术后护理糖尿病并发症

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版纳微型猪近交系用于镇痛类经皮吸收药物体外渗透性评价

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云南农业大学学报（自然科学版） 2023年第6期38卷 929-936页

作者：王晶史海琼程雯张大妹师亚玲高艺柴文英魏红江云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室云南昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 云南农业大学动物医学院云南昆明650201 昆明医科大学第一附属医院乳腺外科云南昆明650032

【目的】通过比较版纳微型猪近交系皮肤(以下简称“猪皮肤”)和人皮肤的组织形态学以及镇痛类经皮吸收药物的体外渗透试验,验证猪皮肤在镇痛类经皮吸收药物评价方面的应用价值。【方法】通过HE染色、Masson染色、弹力纤维染色和透射电... 详细信息

【目的】通过比较版纳微型猪近交系皮肤(以下简称“猪皮肤”)和人皮肤的组织形态学以及镇痛类经皮吸收药物的体外渗透试验,验证猪皮肤在镇痛类经皮吸收药物评价方面的应用价值。【方法】通过HE染色、Masson染色、弹力纤维染色和透射电镜观察比较2种皮肤组织结构形态;选择水杨酸溶液、双氯酚酸二乙胺乳膏和利多卡因凝胶贴膏3种药物作为模型药物,通过Franz扩散池进行药物渗透试验,采用酶标仪和高效液相色谱仪检测透过皮肤的药物质量浓度。【结果】HE染色、Masson染色以及透射电镜结果显示:猪皮肤与人皮肤的分层和细胞构成相似,但是猪皮肤的表皮层极显著厚于人皮肤表皮层(P<0.01),人皮肤的真皮层极显著厚于猪皮肤真皮层(P<0.01)。版纳微型猪身体各部位皮肤从厚到薄依次是肩胛、臀部、背部和腹部。3种药物渗透的0~24 h内,大部分时间点3种药物透过猪皮肤和人皮肤的药物质量浓度均无显著差异(P>0.05)。【结论】猪皮肤和人皮肤组织结构相似,3种镇痛药物在2种皮肤中的渗透性相似,猪皮肤可用于镇痛类经皮吸收药物的体外渗透性评估。

关键词：镇痛类经皮吸收药物版纳微型猪近交系猪皮肤皮肤渗透试验

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体细胞克隆技术扩繁超细型二狼山绒山羊的应用研究

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1420-1427页

作者：卿玉波程雯角德灵刘城郝志强郭建雄李钰莹张筱琳李臻李效宇王文魏红江云南省小型猪基因编辑与异种器官移植重点实验室昆明650201 云南农业大学动物医学院昆明650201 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 内蒙古中科正标生物科技有限公司巴彦淖尔015000 内蒙古正标种畜有限公司巴彦淖尔015000 中国科学院昆明动物研究所昆明650201

【目的】通过体细胞克隆技术生产超细型二狼山绒山羊克隆个体,为该技术在地方优质羊品种资源扩繁及新品种培育中的应用提供理论依据。【方法】选择1只4岁龄羊绒细度为13.89μm的二狼山绒山羊(♂),采集耳组织并分离培养成纤维细胞,以其... 详细信息

【目的】通过体细胞克隆技术生产超细型二狼山绒山羊克隆个体,为该技术在地方优质羊品种资源扩繁及新品种培育中的应用提供理论依据。【方法】选择1只4岁龄羊绒细度为13.89μm的二狼山绒山羊(♂),采集耳组织并分离培养成纤维细胞,以其为供体细胞,利用体细胞克隆技术开展超细型二狼山绒山羊的扩繁研究,通过克隆羊体重、羊绒细度、繁殖性能等指标评估该技术的可行性。【结果】试验成功建立了稳定的山羊卵母细胞体外成熟培养及体细胞克隆技术体系,卵母细胞成熟率为44.8%,孤雌激活卵裂率、囊胚率分别为83.0%、22.4%;二狼山绒山羊克隆胚的卵裂率、囊胚率分别为77.8%、13.7%。获得5只克隆羊个体,其生长发育正常,二狼山绒山羊母羊自然交配共获得16只健康的F1代个体,具有正常繁殖能力。克隆个体羊绒细度极显著低于同龄对照个体(P<0.01)。【结论】本研究通过体细胞克隆技术成功克隆了超细型二狼山绒山羊个体,其具备正常生产性能和繁殖性能,并保留了超细羊绒的特性,为地方优良羊种质资源扩繁和新品种培育应用研究奠定了基础。

关键词：二狼山绒山羊体细胞克隆羊绒细度繁殖性能

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