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解剖学报 2010年第1期41卷 70-74页

作者：何红云邓仪昊张本斯杜赵康大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的探索灯盏花素注射液体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性。方法贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。第4代细胞行表型鉴定后,用灯盏花素注射液诱导,每6h倒置相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染... 详细信息

目的探索灯盏花素注射液体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性。方法贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。第4代细胞行表型鉴定后,用灯盏花素注射液诱导,每6h倒置相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞的神经元特异性稀醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测不同浓度灯盏花素注射液诱导后细胞的活力,流式细胞术及RT-PCR检测诱导前后细胞中NSE、GFAP mRNA的表达变化。结果BMSCs表型鉴定为CD44+、CD54+、CD34-,诱导18h后BMSCs胞体开始收缩,有突起伸出,24h后突起增多形成网络结构。免疫细胞化学染色,NSE阳性表达率为(48.7±3.4)%,GFAP阳性表达为(56.8±4.2)%,流式细胞仪检测诱导24h后的细胞NSE及GFAP蛋白表达量均较未诱导组升高,RT-PCR检测诱导后细胞表达NSE、GFAP mRNA,未诱导的细胞则不表达。结论灯盏花素注射液可诱导大鼠骨髓间充质细胞在体外分化为神经元和神经胶质细胞。

关键词：骨髓间充质细胞神经元神经胶质细胞灯盏花素免疫组织化学大鼠

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针对休眠结核分枝杆菌重组疫苗rBCG-Rv3133c的免疫效应研究

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生物医学工程学杂志 2013年第4期30卷 817-821页

作者：邓仪昊何红云张本斯大理学院基础医学院人体解剖学教研室大理671000

为获取针对休眠期结核分枝杆菌(MTB)疫苗,本研究以编码MTB休眠相关转录调节蛋白DosR的基因Rv3133c为靶基因构建重组卡介苗,并研究其免疫效应。在本研究中,将从结核分枝杆菌H37Rv基因组获取的Rv3133c插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pM... 详细信息

为获取针对休眠期结核分枝杆菌(MTB)疫苗,本研究以编码MTB休眠相关转录调节蛋白DosR的基因Rv3133c为靶基因构建重组卡介苗,并研究其免疫效应。在本研究中,将从结核分枝杆菌H37Rv基因组获取的Rv3133c插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361构建重组质粒,该重组体以电转化方式导入卡介苗基因组构建重组卡介苗rBCG-Rv3133c。将成功构建的重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别在免疫后30d及180d,通过检测疫苗诱导的血清抗体滴度水平评价其诱导的体液免疫反应,通过检测免疫小鼠脾淋巴细胞受TB-PPD刺激后脾CD4+和CD8+T细胞的比例变化、细胞因子IFN-γ的表达评价重组疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,重组疫苗rB-CG-Rv3133c可诱导产生较BCG更高水平的特异性抗体滴度、更强的CD4+和CD8+T细胞增殖反应及较高水平的IFN-γ表达量,提示该疫苗具有较强的研究应用价值。

关键词：休眠结核分枝杆菌 Rv3133c 重组卡介苗免疫效应

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重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-MPT64免疫原性研究

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中国现代医学杂志 2013年第20期23卷 29-34页

作者：邓仪昊何红云王勇朱建华大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的构建可表达人细胞因子IL-12p70及结核分枝杆菌免疫显性抗原MPT64融合蛋白重组卡介苗,研究其免疫效应,为获取较卡介苗(BCG)更具保护作用的结核病新疫苗奠定基础。方法采用基因重组技术构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-MPT64(rBCG-IM),... 详细信息

目的构建可表达人细胞因子IL-12p70及结核分枝杆菌免疫显性抗原MPT64融合蛋白重组卡介苗,研究其免疫效应,为获取较卡介苗(BCG)更具保护作用的结核病新疫苗奠定基础。方法采用基因重组技术构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-MPT64(rBCG-IM),将其免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后15、30、60及90 d,iELISA检测特异性抗体滴度水平,评价疫苗诱导的体液免疫。XTT检测受特异性抗原刺激后脾淋巴细胞增殖反应,流式细胞术观察CD4+T、CD8+T细胞比例变化,细胞因子检测试剂盒检测IFN-γ的诱生量,评价疫苗诱导的细胞免疫。结果与BCG相比,重组疫苗rBCG-IM可诱导更强的脾细胞增殖反应、更高的IFN-γ诱生量,以及更高比例的CD4+T、CD8+T细胞。同时,rBCG-IM可诱导产生较BCG更高水平的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度,IgG2a/IgG1比值变化趋势提示该疫苗可诱导Th1型免疫应答。结论重组卡介苗rBCG-IM可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的细胞免疫及体液免疫反应,具有较强的深入研究价值。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 MPT64 免疫原性

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重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应

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基础医学与临床 2014年第1期34卷 93-97页

作者：张丰经何红云邓仪昊杨开明云南省大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据。方法将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗... 详细信息

目的将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据。方法将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4（rBCG-IT）。将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后3、6、9和12周,用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平,XTT检测脾细胞增值反应,流式细胞仪检测脾CD4＋T、CD8＋T细胞亚型的比例,ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生。结果在免疫后3-12周,rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其他各组（P〈0.01）,该组IFN-γ诱生量及CD4＋T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组（P〈0.01）。IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答。结论重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答,可对其免疫保护作用进行深入研究。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 TB10 4 免疫效应

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双皮质核素钙调素依赖性激酶-1的生物学特点及功能的研究进展

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解剖学杂志 2015年第3期38卷 352-354页

作者：张丰经杜赵康杨开明大理学院基础医学院人体解剖学教研室

双皮质核素钙调素依赖性激酶-1（DCAMKL-1）,属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,最早在神经系统发育中发现其表达在神经元有丝分裂后期,故又名为微管相关蛋白激酶。近年来的研究表明,DCAMKL-1不仅是胃肠道干细胞的标记物,还是胰干细胞的标记物,... 详细信息

双皮质核素钙调素依赖性激酶-1（DCAMKL-1）,属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,最早在神经系统发育中发现其表达在神经元有丝分裂后期,故又名为微管相关蛋白激酶。近年来的研究表明,DCAMKL-1不仅是胃肠道干细胞的标记物,还是胰干细胞的标记物,并广泛参与了胃肠道肿瘤、组织再生及胰肿瘤等多种生理及病理过程的调控。本文对近几年来有关 DCAMKL-1的生物学特点及功能现状进行综述。

关键词：生物学特点依赖性激酶钙调素核素皮质苏氨酸蛋白激酶胃肠道干细胞神经系统发育

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人细胞因子IL-12p70与结核分枝杆菌特异性抗原Ag85A融合基因重组卡介苗的构建及鉴定

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实用医学杂志 2012年第24期28卷 4038-4040页

作者：邓仪昊何红云张本斯云南大理学院基础医学院人体解剖学教研室 671000

目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12... 详细信息

目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-Ag85A。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增及测序,以及western-blotting对重组卡介苗进行鉴定。结果:经鉴定,重组卡介苗成功构建,并可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A。结论:重组卡介苗rBCG-12p70-Ag85A构建成功,并可高效表达目的蛋白。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 Ag85A

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双皮质核素钙调素依赖性激酶-1和Ki-67在胰大部切除术后的表达及分布

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解剖学杂志 2015年第1期38卷 12-14,F0002页

作者：张丰经杜赵康杨开明大理学院基础医学院人体解剖学教研室

目的：观察大鼠胰大部分切除术后双皮质核素钙调素依赖性激酶-1 （DCAMKL-1）和Ki-67在胰组织中的表达及分布,探讨胰岛再生的调控机制.方法：成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,手术切除胰60％～70％后1、2、3、4、5、6d分别取残存... 详细信息

目的：观察大鼠胰大部分切除术后双皮质核素钙调素依赖性激酶-1 （DCAMKL-1）和Ki-67在胰组织中的表达及分布,探讨胰岛再生的调控机制.方法：成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组,手术切除胰60％～70％后1、2、3、4、5、6d分别取残存胰,免疫组织化学PV-9001显色观察DCAMKL-1和Ki-67在胰组织内的表达及分布.结果：DCAMKL-1和Ki-67在正常胰组织有少量表达,表达主要分布在导管、胰岛和腺泡之间的间质.模型组术后1d,主胰管周围可见大量细胞呈蜂窝状样排列,DCAMKL-1和Ki-67表达显著增高,3d时细胞明显增多并在主导管周围出现导管样结构,DCAMKL-1和Ki-67表达达到顶峰,4d后开始下降,但至6d时仍高于正常.与正常对照组相比,DCAMKL-1在腺泡及胰岛内表达变化不明显,而Ki-67术后5d时达到高峰,6d下降.结论：胰大部切除后,胰主导管及周围大量DCAMKL-1阳性细胞增殖,DCAMKL-1阳性细胞可能为胰干细胞.

关键词：双皮质核素钙调素依赖性激酶-1 Ki-67 胰大部切除调控机制

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定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞

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解剖学报 2005年第6期36卷 685-687页

作者：张本斯李庄王凡李光忠羊惠君李瑞祥大理学院基础医学院人体解剖学教研室大理学院临床医学院胸心外科大理671000 四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的建立体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为成骨细胞的模型,为将MSC3用作骨组织工程的种子细胞奠定基础。方法用成骨添加剂(地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠l0 mmol/L、维生素C 50mg/L)定向诱导传代大鼠骨髓MSCs分化为成... 详细信息

目的建立体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为成骨细胞的模型,为将MSC3用作骨组织工程的种子细胞奠定基础。方法用成骨添加剂(地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠l0 mmol/L、维生素C 50mg/L)定向诱导传代大鼠骨髓MSCs分化为成骨细胞,通过形态学、生长曲线、免疫细胞化学及碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞。结果诱导组具有成骨细胞的形态和生长特点,增殖相对缓慢,但与对照组间的差异没有统计学意义(P>0.05),碱性磷酸酶活性增强。结论建立了体外定向诱导大鼠骨髓MSCs向成骨细胞转化的模型,成骨添加剂不影响细胞的增殖,可迅速大量获得种子细胞。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨诱导大鼠

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骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的体外诱导实验

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解剖学杂志 2008年第2期31卷 177-180页

作者：张本斯李庄洪虹王凡李瑞祥大理学院基础医学院人体解剖学教研室大理学院附属医院胸心外科大理671000 四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)经5-氮杂胞苷诱导在体外分化为心肌样细胞的情况,为心衰的干细胞移植治疗提供实验依据。方法:分离培养大鼠MSCs,用不同浓度5-氮杂胞苷诱导不同时间,用形态学、PAS反应、免疫细胞化学等鉴定。结果:... 详细信息

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)经5-氮杂胞苷诱导在体外分化为心肌样细胞的情况,为心衰的干细胞移植治疗提供实验依据。方法:分离培养大鼠MSCs,用不同浓度5-氮杂胞苷诱导不同时间,用形态学、PAS反应、免疫细胞化学等鉴定。结果:诱导细胞以梭形、柱状为主,部分细胞有分支,单核,核卵圆形、居中,类似心肌细胞形态;PAS反应阳性;诱导培养2周,Sarcomeric actin和Connexin-43表达较弱,以后逐渐增强。以10-5mol/L5-氮杂胞苷诱导24h效果最佳。结论:MSCs在5-氮杂胞苷诱导下可定向分化为心肌样细胞,可望成为自体心肌细胞的一种良好供体来源。

关键词：间充质干细胞骨髓心肌细胞细胞分化 5-氮杂胞苷

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定向诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

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中国临床解剖学杂志 2007年第5期25卷 550-552页

作者：张本斯李正金邹汝荣王凡李瑞祥大理学院基础医学院人体解剖学教研室大理671000 大理学院附属医院病理科大理671000 四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的:采用骨髓间充质干细胞体外转化为心肌样细胞,为心衰的干细胞移植治疗提供基础。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,5-氮杂胞苷诱导24h后正常培养,通过形态学、PAS反应、磷钨酸苏木素染色(PTAH)、免疫细胞化学染色作鉴定。结果:诱... 详细信息

目的:采用骨髓间充质干细胞体外转化为心肌样细胞,为心衰的干细胞移植治疗提供基础。方法:分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,5-氮杂胞苷诱导24h后正常培养,通过形态学、PAS反应、磷钨酸苏木素染色(PTAH)、免疫细胞化学染色作鉴定。结果:诱导细胞以梭形、柱状为主,部分细胞有分支,单个核、卵圆形、居中,似心肌细胞,PAS及PTAH染色均为阳性。诱导后培养2周的细胞表达Sarcomeric Actin和Connexin-43较弱,以后表达逐渐增强,而且1、3、5代细胞均稳定表达。结论:骨髓MSCs可在体外被诱导分化为心肌样细胞,有望成为心衰干细胞移植治疗的理想细胞材料。

关键词：间充质干细胞心肌细胞分化 5-氮杂胞苷

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