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解剖学报 2010年第1期41卷 70-74页

作者：何红云邓仪昊张本斯杜赵康大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的探索灯盏花素注射液体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性。方法贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。第4代细胞行表型鉴定后,用灯盏花素注射液诱导,每6h倒置相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染... 详细信息

目的探索灯盏花素注射液体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性。方法贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。第4代细胞行表型鉴定后,用灯盏花素注射液诱导,每6h倒置相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞的神经元特异性稀醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测不同浓度灯盏花素注射液诱导后细胞的活力,流式细胞术及RT-PCR检测诱导前后细胞中NSE、GFAP mRNA的表达变化。结果BMSCs表型鉴定为CD44+、CD54+、CD34-,诱导18h后BMSCs胞体开始收缩,有突起伸出,24h后突起增多形成网络结构。免疫细胞化学染色,NSE阳性表达率为(48.7±3.4)%,GFAP阳性表达为(56.8±4.2)%,流式细胞仪检测诱导24h后的细胞NSE及GFAP蛋白表达量均较未诱导组升高,RT-PCR检测诱导后细胞表达NSE、GFAP mRNA,未诱导的细胞则不表达。结论灯盏花素注射液可诱导大鼠骨髓间充质细胞在体外分化为神经元和神经胶质细胞。

关键词：骨髓间充质细胞神经元神经胶质细胞灯盏花素免疫组织化学大鼠

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重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应

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基础医学与临床 2014年第1期34卷 93-97页

作者：张丰经何红云邓仪昊杨开明云南省大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据。方法将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗... 详细信息

目的将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据。方法将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4（rBCG-IT）。将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后3、6、9和12周,用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平,XTT检测脾细胞增值反应,流式细胞仪检测脾CD4＋T、CD8＋T细胞亚型的比例,ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生。结果在免疫后3-12周,rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其他各组（P〈0.01）,该组IFN-γ诱生量及CD4＋T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组（P〈0.01）。IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答。结论重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答,可对其免疫保护作用进行深入研究。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 TB10 4 免疫效应

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重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-MPT64免疫原性研究

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中国现代医学杂志 2013年第20期23卷 29-34页

作者：邓仪昊何红云王勇朱建华大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

目的构建可表达人细胞因子IL-12p70及结核分枝杆菌免疫显性抗原MPT64融合蛋白重组卡介苗,研究其免疫效应,为获取较卡介苗(BCG)更具保护作用的结核病新疫苗奠定基础。方法采用基因重组技术构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-MPT64(rBCG-IM),... 详细信息

目的构建可表达人细胞因子IL-12p70及结核分枝杆菌免疫显性抗原MPT64融合蛋白重组卡介苗,研究其免疫效应,为获取较卡介苗(BCG)更具保护作用的结核病新疫苗奠定基础。方法采用基因重组技术构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-MPT64(rBCG-IM),将其免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后15、30、60及90 d,iELISA检测特异性抗体滴度水平,评价疫苗诱导的体液免疫。XTT检测受特异性抗原刺激后脾淋巴细胞增殖反应,流式细胞术观察CD4+T、CD8+T细胞比例变化,细胞因子检测试剂盒检测IFN-γ的诱生量,评价疫苗诱导的细胞免疫。结果与BCG相比,重组疫苗rBCG-IM可诱导更强的脾细胞增殖反应、更高的IFN-γ诱生量,以及更高比例的CD4+T、CD8+T细胞。同时,rBCG-IM可诱导产生较BCG更高水平的IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度,IgG2a/IgG1比值变化趋势提示该疫苗可诱导Th1型免疫应答。结论重组卡介苗rBCG-IM可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的细胞免疫及体液免疫反应,具有较强的深入研究价值。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 MPT64 免疫原性

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人细胞因子IL-12p70与结核分枝杆菌特异性抗原Ag85A融合基因重组卡介苗的构建及鉴定

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实用医学杂志 2012年第24期28卷 4038-4040页

作者：邓仪昊何红云张本斯云南大理学院基础医学院人体解剖学教研室 671000

目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12... 详细信息

目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-Ag85A。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增及测序,以及western-blotting对重组卡介苗进行鉴定。结果:经鉴定,重组卡介苗成功构建,并可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A。结论:重组卡介苗rBCG-12p70-Ag85A构建成功,并可高效表达目的蛋白。

关键词：重组卡介苗 IL-12p70 Ag85A

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腹股沟区神经卡压征慢性自发性疼痛的解剖学背景(英文)

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中国临床康复 2005年第17期9卷 251-253页

作者：张本斯李光忠洪永华洪虹邹汝荣何红云大理学院基础医学院解剖学教研室云南省大理市671000

背景:腹股沟区神经卡压征的主要临床表现是阴囊区和大腿近端前内侧慢性自发性疼痛,慢性自发性疼痛的解剖背景,尤其是疼痛区皮肤神经管理的报道较少。目的:了解腹股沟区神经卡压征的临床解剖特征,为腹股沟区神经卡压征的防治提供解剖基... 详细信息

背景:腹股沟区神经卡压征的主要临床表现是阴囊区和大腿近端前内侧慢性自发性疼痛,慢性自发性疼痛的解剖背景,尤其是疼痛区皮肤神经管理的报道较少。目的:了解腹股沟区神经卡压征的临床解剖特征,为腹股沟区神经卡压征的防治提供解剖基础。设计:以尸体为研究对象,观察性研究。单位:一所大学的解剖教研室。材料:1998-01/2000-12大理学院解剖教研室常规防腐固定的25具(50侧)成年男性尸体。方法:对50侧(25具)成年男性尸体标本腹股沟区皮神经行解剖、观测和绘图。主要观察指标:①分布到腹股沟、阴囊、大腿近端前内侧的皮神经。②皮神经与精索的关系。③生殖股神经生殖支与腹股沟管的关系。结果:分布于腹股沟区的有髂腹下神经皮支6%(3/50),髂腹股沟神经皮支90%(45/50),生殖股神经生殖支的皮支42%(21/50),髂腹股沟神经与生殖股神经生殖支形成的吻合支12%(6/50),生殖股神经股支的皮支8%(4/50)。髂腹股沟神经与生殖股神经生殖支于腹横肌与腹内斜肌间、腹股沟管内、穿出腹股沟管后三个部位形成吻合支。生殖股神经生殖支的皮支经3种途径进入腹股沟管,69%从深环进入,12%从大腿侧穿腹股沟韧带进入,19%穿腹内斜肌进入,也通过3种形式出腹股沟管,69%经皮下环浅出。

关键词：神经压迫综合征腹下丛/解剖学和组织学股神经/解剖学和组织学

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骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第28期13卷 5562-5566页

作者：何红云邓仪昊佟晓杰成家茂杜赵康大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南省大理市610000 中国医科大学基础医学院人体解剖学教研室辽宁省沈阳市110001

背景:许旺细胞是周围神经组织工程的种子细胞,但体外分离、培养、纯化许旺细胞较困难。脱细胞同种异体神经移植物具有较强的修复外周神经缺损的能力,且可诱导骨髓间充质细胞分化为类许旺细胞,理论上骨髓间充质细胞可替代许旺细胞作为种... 详细信息

背景:许旺细胞是周围神经组织工程的种子细胞,但体外分离、培养、纯化许旺细胞较困难。脱细胞同种异体神经移植物具有较强的修复外周神经缺损的能力,且可诱导骨髓间充质细胞分化为类许旺细胞,理论上骨髓间充质细胞可替代许旺细胞作为种子细胞应用于周围神经组织工程。目的:观察骨髓间充质细胞构建组织工程神经修复坐骨神经缺损的效果,评估骨髓间充质细胞作为种子细胞修复周围神经缺损的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-07/12在大理学院基础医学院实验室完成。材料:将30只SD大鼠按随机数字表法分为3组,每组10只。骨髓间充质细胞+异体移植组将骨髓间充质细胞复合脱细胞同种异体神经移植物培养的组织工程神经与两断端用10/0无创线端端吻合;异体移植组将脱细胞同种异体神经移植物桥接;自体移植组将切断的坐骨神经旋转180°端端吻合。方法:运用骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复大鼠10mm坐骨神经缺损,移植后12周通过坐骨神经功能指数、腓肠肌湿质量恢复率、S-100免疫组织化学染色、电镜等方法观察移植物修复效果。主要观察指标:复合物培养时观察细胞形态的变化;移植后观察坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率;通过甲苯胺蓝染色观察新生髓鞘形成和轴突生长及神经纤维的分布情况,结合透射电镜及S-100蛋白免疫组织化学染色,观察许旺细胞生长和神经纤维再生情况。结果:坐骨神经功能指数及腓肠肌湿质量恢复率的检测结果显示骨髓间充质细胞+异体移植组优于异体移植组(P<0.05)。骨髓间充质细胞+异体移植组复合物中S-100的表达明显高于异体移植组,有髓神经纤维数量、有髓纤维直径和髓鞘厚度均大于异体移植组(P<0.05),修复效果接近自体移植组。结论:骨髓间充质细胞构建的组织工程神经修复周围神经缺损的效果优于单纯的脱细胞同种异体神经移植物,骨髓间充质细胞作为种子细胞在周围神经组织工程中具有较强的应用价值。

关键词：组织工程坐骨神经骨髓间充质细胞

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内脏神经切除治疗顽固性腹痛的解剖学基础研究

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中国临床康复 2004年第35期8卷 8000-8002页

作者：李光忠张本斯大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南省大理白族自治州671000

目的:研究内脏大神经、内脏小神经和内脏最小神经的发生率、起源及配布形式,为内脏神经切除治疗顽固性腹痛提供解剖学基础。方法:1998-01/2003-01大理学院基础医学院人体解剖学教研室收集尸体标本20具(40侧)。在立体显微镜下对40侧常规... 详细信息

目的:研究内脏大神经、内脏小神经和内脏最小神经的发生率、起源及配布形式,为内脏神经切除治疗顽固性腹痛提供解剖学基础。方法:1998-01/2003-01大理学院基础医学院人体解剖学教研室收集尸体标本20具(40侧)。在立体显微镜下对40侧常规防腐固定成年尸体的内脏大神经、内脏小神经和内脏最小神经的来源及配布形式作解剖、观测,计算其发生率。结果:两侧内脏神经的起源不对称。内脏大神经发生率为100%(40/40),内脏小神经为93%(37/40),内脏最小神经为53%(21/40)。内脏大神经有14种起源形式,最常起自第5～9胸神经节(28%,11/40),有2～10个根,最宽起自第3～11胸神经节,最窄起自第5～7胸神经节,有9例(23%,9/40)起自第5～10以外的胸神经节。内脏小神经有7种起源形式,最多起自第10～11胸神经节(35%,13/37),有1～3个根,有9例起自第10～11以外的胸神经节(24%,9/37)。内脏最小神经有4种来源形式,最多起自第12胸神经节(57%,12/21),有1～2个根,有9例起自第12以外的胸神经节(43%,9/21)。40%(16/40)的标本内脏神经间有交通。结论:内脏大神经普遍存在,大多数标本有内脏小神经和内脏最小神经,3条内脏神经起源形式多变,行内脏神经切除术时应特别注意起源于经典解剖学描述范围以外的神经根。

关键词：腹痛内脏神经解剖学

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微环境对体外间充质干细胞向心肌样细胞分化的作用

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基础医学与临床 2008年第1期28卷 22-25页

作者：张本斯李庄杨新文洪虹洪永华大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000 大理学院附属医院胸心外科云南大理671000

目的研究心肌组织中何种细胞对骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞定向分化起决定性作用。方法分离培养骨髓MSCs、心肌细胞(CM)和内皮细胞(EC)。MSCs经BrdU标记后与CM、EC分别共培养和单独培养,通过形态学、免疫细胞化学和双重免疫细... 详细信息

目的研究心肌组织中何种细胞对骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞定向分化起决定性作用。方法分离培养骨髓MSCs、心肌细胞(CM)和内皮细胞(EC)。MSCs经BrdU标记后与CM、EC分别共培养和单独培养,通过形态学、免疫细胞化学和双重免疫细胞化学鉴定。结果分离培养的MSCs、CM和EC纯度高于95%。标记MSCs与CM共培养后,细胞具有心肌细胞样形态。4周时,有44%的细胞BrdU与肌动蛋白(sarcomeric actin)或连接蛋白-43(connexin-43)双重免疫细胞化学染色阳性。与EC共培养以及单独培养时,MSCs形态变化不明显,无双染阳性细胞出现。结论CM对骨髓MSCs向心肌样细胞的定向分化具有重要作用。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞内皮细胞

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胚胎早期心脏发育中Bax、Bcl-2及NF-κB的表达及对心肌细胞分化的调控

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实用医学杂志 2011年第9期27卷 1542-1544页

作者：杨开明王勇杜赵康云南省大理学院基础医学院解剖学教研室 671000

目的:研究Bax(Bcl-2 associated X protein)、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)蛋白及NF-κB(nuclear factorkappa B)在胚胎心脏发育中对心肌细胞分化的调控作用。方法:取大鼠妊娠8.5～14.5d(E8.5～E14.5)胚胎30只通过组织学及免疫组织化学SABC法观察大鼠早期胚胎心脏的发育过程以及Bax、Bcl-2蛋白及NF-κB在胚胎心脏的表达。结果:大鼠早期胚胎心脏发育中,E8.5,原始心管形成,未见Bax蛋白及NF-κB阳性反应,但Bcl-2呈阳性表达E10.5,心房、心室形成,心肌细胞开始表达Bax、Bcl-2及NF-κB,一直持续表达至E14.5。结论:Bax、Bcl-2及NF-κB在心脏早期发育中可能通过凋亡来调控心肌细胞的分化。

关键词：细胞分化 Bax Bcl-2 NF-κB

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异种脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损的实验研究

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实用医学杂志 2011年第24期27卷 4392-4395页

作者：何红云邓仪昊朱建华张本斯大理学院基础医学院人体解剖学教研室云南省大理市671000 病理生理学教研室

目的:观察异种脱细胞神经修复坐骨神经缺损的效果,探寻修复周围神经的新型移植物。方法:分别取家犬、新西兰大白兔臂丛神经及SD大鼠坐骨神经,对其适当切修使直径、长度相近,对获取的神经进行低渗-脱细胞处理,得到脱细胞神经移植物。32... 详细信息

目的:观察异种脱细胞神经修复坐骨神经缺损的效果,探寻修复周围神经的新型移植物。方法:分别取家犬、新西兰大白兔臂丛神经及SD大鼠坐骨神经,对其适当切修使直径、长度相近,对获取的神经进行低渗-脱细胞处理,得到脱细胞神经移植物。32只大鼠均制造人为坐骨神经缺损,随机均分为4组,A组,家犬脱细胞神经移植修复;B组,兔脱细胞神经移植修复;C组,大鼠脱细胞神经移植修复;D组,未修复组。修复后进行神经运动和感觉功能的检测。结果:修复组大鼠坐骨神经功能恢复均显著优于未修复组,而各修复组间无明显差异。结论:异种脱细胞神经可取得与同种脱细胞神经修复周围神经缺损相似的效果。

关键词：坐骨神经异种脱细胞神经移植物修复

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