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西南农业学报 2021年第4期34卷 827-833页

作者：李国泽邵亚林常玮丁勇西南林业大学云南省高校林木生物技术重点实验室云南昆明650224 中国科学院昆明植物研究所资源植物与生物技术重点实验室云南昆明650204

【目的】旨在获得兜兰属植物叶片总RNA的高质量提取方法,为后续相关分子生物学研究开展提供一定参考。【方法】以紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物叶片为试材,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法对4种不同提取方法获... 详细信息

【目的】旨在获得兜兰属植物叶片总RNA的高质量提取方法,为后续相关分子生物学研究开展提供一定参考。【方法】以紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物叶片为试材,通过1.0%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计法对4种不同提取方法获得的总RNA进行质量检测,筛选最适方法,并通过RT-PCR进一步验证。【结果】使用商品化RNA试剂盒法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度好,但完整性一般;改良CTAB法提取的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性虽较好,但提取效率不高;改良Trizol法(Ⅰ)提取的兜兰属植物叶片总RNA虽完整性好,但纯度差,存在多糖、蛋白质等杂质污染;改良Trizol法(Ⅱ)获得的兜兰属植物叶片总RNA纯度和完整性均最好;以改良Trizol法(Ⅱ)获得的总RNA为模板,应用RT-PCR能成功克隆获得3种兜兰属植物rbcL基因252 bp的目的序列。【结论】综合比较以上4种方法,试验改良的Trizol法(Ⅱ)是适合紫纹兜兰、长瓣兜兰和杏黄兜兰3种兜兰属植物高质量总RNA提取的有效方法。

关键词：兜兰属植物 RNA提取改良Trizol法改良CTAB法

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基于广泛靶向代谢组学技术的勃氏甜龙竹竹叶化学成分分析

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南京林业大学学报（自然科学版） 2024年第2期48卷 241-246页

作者：王飞谢瞰杨亚晋刘莉莉陈粉粉李恩良郭爱伟西南林业大学生命科学学院云南南昆明650224 西岐桫椤省级自然保护区管护局云南墨江654800 云南省高校林木生物技术重点实验室云南昆明650224

【目的】探明勃氏甜龙竹(Dendrocalamus brandisii)竹叶化学成分,准确认识勃氏甜龙竹竹叶的应用价值,为其开发和利用提供科学依据。【方法】采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)液相色谱柱,在0.35 mL/min的... 详细信息

【目的】探明勃氏甜龙竹(Dendrocalamus brandisii)竹叶化学成分,准确认识勃氏甜龙竹竹叶的应用价值,为其开发和利用提供科学依据。【方法】采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)液相色谱柱,在0.35 mL/min的流速下,以A相为0.04%(体积分数,下同)的乙酸水溶液、B相为0.04%的乙酸乙腈溶液进行洗脱,并选取电喷雾离子源在三重四级杆中,根据优化的去簇电压和碰撞能下扫描检测;利用武汉迈特维尔生物科技有限公司自建数据库,根据二级谱信息进行物质定性,利用三重四级杆质谱MRM对代谢物进行定量,通过对化合物特征离子色谱峰面积的积分和校正,确定各物质的相对含量。【结果】在勃氏甜龙竹竹叶中共检测到10大类407种代谢物,其中黄酮类化合物79种,占检测化合物总数的19.41%;脂质类61种,占检测化合物总数的14.99%;酚酸类55种,占检测化合物总数的13.51%;氨基酸及其衍生物55种,占检测化合物总数的13.51%;有机酸类35种,占检测化合物总数的8.60%;核苷酸及其衍生物31种,占检测化合物总数的7.62%;生物碱类28种,占检测化合物总数的6.88%;木脂素和香豆素类17种,占检测化合物总数的4.18%;萜类1种,占检测化合物总数的0.24%;其他类化合物45种,占检测化合物总数的11.06%。【结论】基于广泛靶向代谢组学技术对勃氏甜龙竹竹叶化合物类型和相对含量分析结果表明,除基本营养组成外,勃氏甜龙竹竹叶中含有多种药用价值的化合物,其中黄酮类化合物是勃氏甜龙竹竹叶中的主要活性成分之一,在人类健康和动物保健领域具有广阔的开发和应用前景。本研究为进一步开发和利用勃氏甜龙竹竹叶中的药用活性物质提供科学依据。

关键词：勃氏甜龙竹竹叶化学成分代谢物广泛靶向代谢组

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生长素对樟叶越桔离体培养物次生代谢物含量的影响

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西部林业科学 2020年第1期49卷 133-139页

作者：谭亚婷尚俊可罗旭璐张訸丁勇赵平闫晓慧唐军荣西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室云南昆明650224 西南林业大学西南山地森林资源保育与利用教育部重点实验室云南昆明650224 西南林业大学云南省高校林木生物技术重点实验室云南昆明650224 西南林业大学生物多样性保护学院云南省森林灾害预警与控制重点实验室云南昆明650224

为补充樟叶越桔野生资源中熊果苷、6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)的不足,以同一批次的樟叶越桔组培苗为材料,对其茎段和叶片中的熊果苷、CA含量进行了测定,并比较不同NAA或IBA处理下,组培苗离体茎段、叶片培养物中熊果苷、CA的含量差别。结果... 详细信息

为补充樟叶越桔野生资源中熊果苷、6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)的不足,以同一批次的樟叶越桔组培苗为材料,对其茎段和叶片中的熊果苷、CA含量进行了测定,并比较不同NAA或IBA处理下,组培苗离体茎段、叶片培养物中熊果苷、CA的含量差别。结果表明,组培苗叶片中熊果苷和CA的含量要明显高于茎段。在NAA诱导处理下组培苗离体叶片或茎段均能产生愈伤组织,且所有诱导物中仅有熊果苷产生,未检测出CA;而在IBA诱导处理下,均能检测出熊果苷、CA。熊果苷含量在NAA 0.5mg/L处理叶片时的含量最高,为(1.01±0.04)%,而CA含量则以IBA 0.3mg/L处理茎段时含量最高,为(0.47±0.00)%。因此,樟叶越桔组培苗的叶片、茎段分别是离体生产熊果苷、CA的最适材料,而NAA或IBA可作为樟叶越桔组培苗离体叶片或茎段产生熊果苷、CA的诱导子。研究结果为樟叶越桔组培苗开展次生代谢产物的研究提供了前期基础,也为樟叶越桔可持续开发利用提供技术保障。

关键词：樟叶越桔组培苗离体培养次生代谢产物

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美国山核桃不同引种品种出油率及抗氧化性比较研究

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粮食与油脂 2018年第9期31卷 51-53页

作者：张金丽李靖王锦马长乐西南林业大学园林学院云南昆明650224 云南省林木生物技术重点实验室云南昆明650224 西南林业大学生命科学学院云南昆明650224

采用索氏提取法提取油脂,并采用分光光度法测定天然抗氧化剂清除DPPH的能力,研究12个不同引种的美国山核桃出油率和抗氧化性差异并与1个云南核桃作对比。结果表明:所有品种出油率均在60%~80%之间;抗氧化能力最强的是10号,其对应的IC5 0... 详细信息

采用索氏提取法提取油脂,并采用分光光度法测定天然抗氧化剂清除DPPH的能力,研究12个不同引种的美国山核桃出油率和抗氧化性差异并与1个云南核桃作对比。结果表明:所有品种出油率均在60%~80%之间;抗氧化能力最强的是10号,其对应的IC5 0为58.94 mg/m L。说明美国山核桃油可以作为功能油脂加以开发和利用,并为优良品种的筛选提供了选择依据。

关键词：美国山核桃索氏提取法油脂抗氧化性

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麻疯树油体钙蛋白JcCale 26.8基因克隆及序列分析

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安徽农业科学 2022年第12期50卷 86-92页

作者：蒲芝雨黄建辉李国泽丁勇西南林业大学云南省高校林木生物技术重点实验室云南昆明650224

[目的]克隆麻疯树(Jatrapha curcas)油体钙蛋白基因JcCale 26.8全长cDNA序列,探究麻疯树油体钙蛋白及其基因的结构与功能。[方法]应用RNA-seq测序和PCR技术,从麻疯树种子中克隆获得1个油体钙蛋白家族基因JcCale 26.8,并进行测序和序列... 详细信息

[目的]克隆麻疯树(Jatrapha curcas)油体钙蛋白基因JcCale 26.8全长cDNA序列,探究麻疯树油体钙蛋白及其基因的结构与功能。[方法]应用RNA-seq测序和PCR技术,从麻疯树种子中克隆获得1个油体钙蛋白家族基因JcCale 26.8,并进行测序和序列分析。[结果]JcCale26.8基因序列含有6个外显子和5个内含子,内含子剪接位点符合真核生物基因的GT-AG法则。JcCale26.8基因mRNA序列的完整开放阅读框长717 bp,推测编码由238个氨基酸组成、相对分子量为26.8 kD的油体钙蛋白JcCale26.8。JcCale26.8蛋白主要由α-螺旋和无规则卷曲结构构成,并具有油体钙蛋白典型结构特征,与来自蓖麻、川桑和异色山黄麻等多个不同物种的Caleosin蛋白具有较高的同源相似性。[结论]该研究可为麻疯树油体钙蛋白基因的表达调控与功能研究奠定基础。

关键词：种子油体麻疯树油体钙蛋白基因克隆

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红心火龙果离体培养技术研究

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云南农业大学学报（自然科学版） 2019年第4期34卷 656-662页

作者：何小帆丁文沙钟源源李思琦罗一然田斌何承忠姜华西南林业大学云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室云南昆明650224 西南林业大学西南地区生物多样性保育国家林业局重点实验室云南昆明650224 西南林业大学西南山地森林资源保护与利用教育部重点实验室云南昆明650224 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

【目的】通过红心火龙果离体培养技术研究,建立其组培快繁技术体系,为规模化育苗提供技术支撑。【方法】以红心火龙果幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同外源激素配比,筛选出不定芽发生、增殖、壮苗及生根诱导等不同阶段... 详细信息

【目的】通过红心火龙果离体培养技术研究,建立其组培快繁技术体系,为规模化育苗提供技术支撑。【方法】以红心火龙果幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同外源激素配比,筛选出不定芽发生、增殖、壮苗及生根诱导等不同阶段的最适培养基。【结果】最佳消毒方法为使用75%酒精消毒10s,无菌水冲洗1次,再用0.1%升汞消毒4.5min,无菌水冲洗5~8次。最适不定芽诱导培养基是配方为MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.6g/L,发芽率达87.03%;最适不定芽增殖培养基的配方为MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.5mg/L+AC0.2g/L+蔗糖30g/L+琼脂4.6g/L,不定芽的增殖系数高达7.33;最适生根培养基的配方为1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L+AC0.2g/L+蔗糖30g/L+琼脂4.6g/L,生根率达100%。最佳移栽基质为V(珍珠岩)∶V(红土)∶V(腐殖土)=1∶1∶1,植株成活率高达98.9%。【结论】建立了以茎段为外植体的红心火龙果组培快繁技术体系,不定芽诱导率和增殖系数高,组培苗生根情况好,移栽成活率高。

关键词：红心火龙果离体培养植株再生

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7个候选内参基因在樟叶越橘不同组织中的表达及稳定性分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2023年第5期38卷 868-877页

作者：蒲芝雨杨玉菊张安勉李国泽余进德赵平丁勇西南林业大学云南省高校林木生物技术重点实验室云南昆明650224 保山中医药高等专科学校基础医学院云南保山678000 西南林业大学西南地区林业生物质资源高效利用国家林业与草原局重点实验室云南昆明650224

【目的】筛选樟叶越橘不同组织部位基因表达分析的最适内参基因。【方法】基于樟叶越橘三代转录组测序数据,筛选出PP2A-1、PP2A-2、EIF-4A-1、EIF-4A-2、60S-1、60S-2和ARP-1共7个候选内参基因;利用qRT-PCR技术对目标基因在樟叶越橘不... 详细信息

【目的】筛选樟叶越橘不同组织部位基因表达分析的最适内参基因。【方法】基于樟叶越橘三代转录组测序数据,筛选出PP2A-1、PP2A-2、EIF-4A-1、EIF-4A-2、60S-1、60S-2和ARP-1共7个候选内参基因;利用qRT-PCR技术对目标基因在樟叶越橘不同组织(嫩叶、成熟叶、花芽、花、绿色果实、红色果实、绿果果梗和红果果梗)的表达水平进行检测,应用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种方法分析评估基因表达的稳定性,通过RefFinder方法综合评价以筛选出樟叶越橘不同组织的最适内参基因;以樟叶越橘绿原酸合成途径中苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的组织表达情况验证内参基因稳定性评价结果的可靠性。【结果】樟叶越橘的不同组织中,60S-2基因表达的稳定性居于首位,其次是PP2A-2基因,ARP-1、60S-1和EIF-4A-2基因表达的稳定性居中,EIF-4A-1基因表达的稳定性最差。应用60S-2内参基因分析获得的樟叶越橘不同组织中PAL基因表达量与绿原酸含量的变化趋势一致,表明PAL基因参与了樟叶越橘体内绿原酸的合成。【结论】供试的7个候选基因中,能在樟叶越橘不同组织最稳定表达的内参基因是60S-2。研究结果为后续其他功能基因在该植物不同组织中的表达研究提供了最适内参基因选择参考。

关键词： 60S-2 内参基因实时荧光定量PCR 樟叶越橘

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PEG介导的柱状田头菇遗传转化体系建立

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菌物学报 2020年第6期39卷 1100-1108页

作者：陶南崔祥华柴红梅马渊浩赵永昌陈卫民云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南昆明650223 云南省农业生物技术重点实验室云南昆明650223 农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室云南昆明650223 西南林业大学生命科学学院云南昆明650224

柱状田头菇(茶树菇)Agrocybeaegerita是一种美味的食用菌,具有极高的经济价值。随着其全基因组测序的完成,功能基因组学研究也逐渐展开,其中,高效的遗传转化体系作为技术基础成为研究重点。本研究以柱状田头菇原生质体为受体、潮霉素抗... 详细信息

柱状田头菇(茶树菇)Agrocybeaegerita是一种美味的食用菌,具有极高的经济价值。随着其全基因组测序的完成,功能基因组学研究也逐渐展开,其中,高效的遗传转化体系作为技术基础成为研究重点。本研究以柱状田头菇原生质体为受体、潮霉素抗性基因(hph)作为筛选标记,以增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)为报告基因,应用PEG介导法进行柱状田头菇遗传转化体系研究。结果表明,150μg/m L潮霉素可以完全抑制柱状田头菇的生长。30℃下用2%裂解酶液酶解菌丝3h,能够获得最大得率的原生质体。通过PEG介导将构建好的DNA片段转化入柱状田头菇原生质体,通过潮霉素抗性筛选获得转化子,转化得率达到7个/μg DNA。PCR验证和荧光显微镜观察,外源片段成功转入柱状田头菇中并稳定表达。本研究建立的PEG介导转化体系,为柱状田头菇基因功能研究提供了技术基础。

关键词：柱状田头菇 PEG介导转化潮霉素绿色荧光蛋白

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云南松不同群体苗木生物量与生长分析

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林业科技开发 2015年第6期29卷 148-153页

作者：周丽徐杨邓丽丽李德龙陈诗蔡年辉李悦段安安许玉兰西南林业大学云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室昆明650224 北京林业大学生物科学与技术学院

为了选出云南松苗木质量较高的优良群体,对云南省7个云南松群体的4年生苗木生物量和生长性状进行了测定和分析。结果表明:云南松不同群体的生长性状除主根长外,其余性状均存在极显著差异(PGS>KM>LJ>YL>YX>ZD,各器官生物... 详细信息

为了选出云南松苗木质量较高的优良群体,对云南省7个云南松群体的4年生苗木生物量和生长性状进行了测定和分析。结果表明:云南松不同群体的生长性状除主根长外,其余性状均存在极显著差异(P<0.01)。不同群体各器官的生物量、地上部分生物量和总生物量均存在极显著差异,总生物量、地上部分生物量和地下部分(根)生物量从大到小表现为群体BS>GS>KM>LJ>YL>YX>ZD,各器官生物量的分配比例从大到小表现为主干>针叶>根>侧枝。群体间的根、主干和针叶的含水率均存在极显著差异,侧枝含水率差异显著(P<0.05)。苗木生物量结构特征仅有光合器官和非光合器官比差异极显著,枝干比差异显著。综合比较后发现,保山(BS)群体和高黎贡山(GS)群体的苗木质量较好,具有较强的环境适应能力,碳储量和碳汇潜力较大。

关键词：云南松苗木生物量苗木形态指标

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筇竹笋生长过程中营养成分的变化

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东北林业大学学报 2015年第1期43卷 80-82,87页

作者：杨奕董文渊邱月群李雯杨佳俊韩妍云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所(云南省农业生物技术重点实验室) 昆明650223 西南林业大学

筇竹是优良的笋材两用竹种,为了解筇竹笋在生长过程中营养成分的变化,分析测定了3个不同出土高度（5~10 cm、10~20 cm、20~30 cm）筇竹笋的几种主要营养成分。结果表明：筇竹笋的水分、粗脂肪、蛋白质、可溶性糖的质量分数随着出土高度... 详细信息

筇竹是优良的笋材两用竹种,为了解筇竹笋在生长过程中营养成分的变化,分析测定了3个不同出土高度（5~10 cm、10~20 cm、20~30 cm）筇竹笋的几种主要营养成分。结果表明：筇竹笋的水分、粗脂肪、蛋白质、可溶性糖的质量分数随着出土高度的增加逐渐下降;粗纤维质量分数随着出土高度的增长而增加;维生素C、总灰分质量分数随着出土高度的增长呈先上升后下降的趋势。筇竹笋含有17种常见氨基酸,氨基酸总量随着出土高度的增长呈先上升后下降,呈味类氨基酸的质量分数由高到低的顺序为：鲜味类、苦味类、甜味类、芳香类。筇竹笋营养成分丰富,是一种高蛋白、低脂肪、富含纤维素的健康食品,其中出土高度为10~20 cm的筇竹笋的营养品质和口感最优,食用价值和经济价值最高。

关键词：筇竹竹笋营养成分

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