检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2025年第4期55卷 477-483页

作者：李富祥高华峰赵文华宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

为建立睡眠嗜组织菌(***)可视化LAMP检测方法,笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了***可视化LAMP现场检测方法。反应程... 详细信息

为建立睡眠嗜组织菌(***)可视化LAMP检测方法,笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物,优化反应体系和反应程序,评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率,建立了***可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示,本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示,该方法能特异性地检测***,与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His,敏感性较高。临床样品检测结果显示,LAMP方法和普通PCR方法检测***的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明,本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊***感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。

关键词：睡眠嗜组织菌环介等温扩增现场检测牛山羊绵羊

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奶牛源反刍动物链球菌的分离鉴定及致病性研究

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中国预防兽医学报 2025年第1期47卷 17-22,38页

作者：李富祥高华峰赵文华云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

为了鉴定云南省某养殖场患呼吸道疾病奶牛的细菌性病原,本研究将2份奶牛鼻腔拭子样品接种含5%牛血清的营养琼脂,并观察分离菌的菌落形态和经革兰氏染色特性,结果显示分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN240515和YN240516。采用Rapid ID32 STR... 详细信息

为了鉴定云南省某养殖场患呼吸道疾病奶牛的细菌性病原,本研究将2份奶牛鼻腔拭子样品接种含5%牛血清的营养琼脂,并观察分离菌的菌落形态和经革兰氏染色特性,结果显示分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN240515和YN240516。采用Rapid ID32 STREP kit对2株分离菌进行生化鉴定,采用PCR扩增分离菌16S rDNA基因序列并测序,采用MegAlign软件分析16S rDNA基因序列的同源性,采用MEGA软件构建16S rDNA基因序列的遗传进化树并分析2株分离菌的遗传进化特征,采用小鼠腹腔接种方法分析2株分离菌的致病性,采用纸片琼脂扩散法测定2株分离菌对8大类14种抗菌药物的敏感性。细菌的生化、16S rDNA基因序列同源性和遗传进化鉴定结果显示,2株分离菌生化特征与反刍动物链球菌(Streptococcus ruminantium)模式菌株DSM104980T以及其他链球菌参考株基本一致。分离菌YN240515和YN240516与*** DSM104980T 16S rDNA基因序列的同源性分别为100%和99.9%,与其他***参考株16S rDNA基因序列的同源性为98.8%~100%。2株分离菌在16S rDNA基因序列遗传进化树中与全部***参考株形成同一进化分支。基于上述特征,将2株分离菌鉴定为***。致病性实验结果显示,2株分离菌以4.0×107 cfu经腹腔接种小鼠均能导致小鼠100%死亡率,对小鼠的致病性均较强。药敏试验结果显示,2株分离菌均对青霉素类的青霉素和阿莫西林-克拉维酸以及头孢菌素类的头孢噻吩和头孢曲松等7种抗菌药物敏感,对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素等5种抗菌药物耐药。本研究是国内首次从患呼吸道综合征的奶牛中分离到***,证实我国奶牛存在***的感染,为我国奶牛***感染的防治提供基础数据。

关键词：反刍动物链球菌分离致病性奶牛

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禽腺病毒I群和禽腺病毒4型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2025年第2期47卷 152-158+184页

作者：薛晓岩张振兴杨钦鸿王位张伟李素华宋建领西南林业大学生命科学学院云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室西双版纳州动物疫病预防制中心

为建立能快速检测禽腺病毒I群（FAd V-I）和禽腺病毒4型（FAd V-4）的双重Taq Man探针荧光定量PCR（qPCR）方法，本研究根据禽腺病毒（FAd V）的Hexon基因，设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩... 详细信息

为建立能快速检测禽腺病毒I群（FAd V-I）和禽腺病毒4型（FAd V-4）的双重Taq Man探针荧光定量PCR（qPCR）方法，本研究根据禽腺病毒（FAd V）的Hexon基因，设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并克隆至p MD19-T载体中，构建重组质粒标准品p MD19-T-FAd V-I和p MD19-T-FAd V-4，并均经PCR和测序鉴定。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释后等体积混合作为模板，采用棋盘法对反应体系和反应条件进行优化，建立了能检测上述病原的双重Taq Man探针q PCR方法，同时对该方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品的适用性进行评价。结果显示，两种重组质粒标准品标准曲线的相关系数（R2）均大于0.996，表明两种质粒标准品混合物的拷贝数与其Ct值具有良好的线性关系；该方法能够特异性检测和区分FAd V-I和FAd V-4，与其他禽类传染病病原核酸不发生交叉反应，具有较强的特异性；该方法对FAd V-I和FAd V-4重组质粒标准品的检测限分别为4.6×10～2拷贝/μL和2.01×10～2拷贝/μL，比常规PCR方法敏感性高10倍，具有较高的敏感性；批内和批间重复性试验的变异系数均小于1.0%，具有较好的重复性和稳定性。采用该方法和常规PCR法对32份疑似感染FAd V-I的家禽组织样品、8份疑似感染FAd V-4的家禽粪便样品进行检测，结果显示二者检测结果的符合率均为100%。结果表明，本研究建立的FAd V-I/FAd V-4双重Taq Man探针q PCR检测方法特异性强、敏感性高、准确性好，为快速诊断FAd V-I的同时鉴别FAd V-4提供了技术支持。

关键词：禽腺病毒I群禽腺病毒4型 Hexon TaqMan探针荧光定量PCR

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云南省双江县三带喙库蚊中乙型脑炎病毒分离及编码区序列

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中国热带医学 2025年第1期25卷 22-27页

作者：顾杨杨何于雯阮方超杨杰林杨绍昌冷珺李富雨王佳丽王静林大理大学云南大理671003 云南省传染病医院云南昆明650301 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 昆明医科大学云南昆明650500 云南省临沧市双江自治县农业农村局畜牧兽医技术推广中心云南临沧677399

目的了解云南省临沧市双江县蚊虫携带乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)情况及其分子特征。方法2023年8月,在临沧市双江县牛圈采用诱蚊灯采集蚊虫标本,经蚊种鉴定后每25只为一组,采用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,... 详细信息

目的了解云南省临沧市双江县蚊虫携带乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)情况及其分子特征。方法2023年8月,在临沧市双江县牛圈采用诱蚊灯采集蚊虫标本,经蚊种鉴定后每25只为一组,采用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,阳性分离物分别采用黄病毒属引物进行鉴定;然后采用针对GⅠ型JEV全长15对引物进行RT-PCR扩增,测序、拼接,采用MEGA X、DNAstar、GeneDoc、SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学软件进行序列分析。结果共采集到三带喙库蚊1300只,分52组进行病毒分离,获得1株阳性分离株(SJM23-22),接种C6/36和BHK-21细胞后均出现细胞病变,黄病毒属引物扩增为阳性。对该株病毒全序列测定拼接后,获得一条10840个核苷酸长序列,编码3432个氨基酸;基于全基因序列和E基因序列构建的遗传进化分析结果显示,新分离SJM23-22与柬埔寨GⅠa型毒株(C081)的亲缘关系最近,编码区核苷酸同源性为98.5%,氨基酸同源性为99.8%,而与其他基因型编码区核苷酸同源性均在90%以下,氨基酸同源性均在98%以下;位点分析结果显示与减毒活疫苗株SA14-14-2在E基因上共有22个氨基酸差异位点,其中在8个与神经毒力相关氨基酸关键位点上,存在7个位点差异;重要抗原表位分析结果显示,双江分离株与减毒活疫苗株在结构域Ⅲ中的3个重要抗原表位完全一致;二级结构及三级结构预测结果显示,该毒株以无规则卷曲为主要结构特征。结论在双江县三带喙库蚊中分离1株GⅠa型JEV,与抗原性表位相关的关键氨基酸位点未发生明显改变。本研究丰富了云南省双江县三带喙库蚊携带病毒情况,为云南省虫媒疫情的防控提供了参考。

关键词： GⅠa乙型脑炎病毒全基因组系统进化分析 E蛋白结构预测

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猪伪狂犬病概述及净化技术探讨

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中国畜禽种业 2025年第2期21卷 118-124页

作者：张振兴李卓然杨秋艳何于雯周卓宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室/农业农村部跨境动物疫病防控重点实验室(部省共建) 云南昆明650224 云南省弥勒市动物疫病预防控制中心云南弥勒652300

猪伪狂犬病是一种高度致死性传染病,也是猪场生产管理需要防护的重要疾病之一,该文对猪伪狂犬病进行了系统性阐述,通过对猪伪狂犬病病原学、流行特征、临床症状进行全面介绍,并对猪伪狂犬病的检测方法和净化手段进行探究,以期为生猪养... 详细信息

猪伪狂犬病是一种高度致死性传染病,也是猪场生产管理需要防护的重要疾病之一,该文对猪伪狂犬病进行了系统性阐述,通过对猪伪狂犬病病原学、流行特征、临床症状进行全面介绍,并对猪伪狂犬病的检测方法和净化手段进行探究,以期为生猪养殖提供科学的防治策略和理论基础,促进生猪养殖业持续健康发展。

关键词：猪伪狂犬病病原学流行特征临床症状检测方法净化手段

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猪圆环病毒病诊断与防控

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现代畜牧科技 2025年第1期 97-100页

作者：张振兴李卓然周卓何于雯杨秋艳宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 农业农村部跨境动物疫病防控重点实验室(部省共建) 云南昆明650224 云南省弥勒市动物疫病预防控制中心云南弥勒652300

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)作为一种全球性猪类传染病,对养猪业构成了严重威胁。该文旨在全面阐述猪圆环病毒的特性、病害影响及防控策略,并总结现有的治疗手段优缺点,以期为猪圆环病毒病的治疗提供参考依据。该文... 详细信息

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)作为一种全球性猪类传染病,对养猪业构成了严重威胁。该文旨在全面阐述猪圆环病毒的特性、病害影响及防控策略,并总结现有的治疗手段优缺点,以期为猪圆环病毒病的治疗提供参考依据。该文通过深入解析猪圆环病毒病的各个方面,为养猪业提供一套全面的防控体系,旨在提升养猪业的健康水平和生产效益,也为将来更多针对病毒的特异性治疗和预防手段的开发提供理论基础。

关键词：猪圆环病毒诊断防控治疗

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2株云南源BVDV-1b亚型毒株的分离和鉴定

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中国兽医杂志 2025年第2期61卷 40-46页

作者：崔垚鑫李聃谢佳芮朱沛徐心明岩锐陈其云李文贵姚俊云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省大理市大理镇农业综合服务中心云南大理671003 云南省楚雄州禄丰市动物疫病预防控制中心云南禄丰651200 云南省普洱市孟连县动物疫病预防控制中心云南普洱665000 玉溪农业职业技术学院动物科技学院云南玉溪651100

为探明云南省牛病毒性腹泻黏膜病(BVD-MD)的发生、流行态势及其流行毒株的生物学特征,本试验于2022年12月—2023年11月从云南省10个州市规模化养牛场随机采集667份牛粪便样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检... 详细信息

为探明云南省牛病毒性腹泻黏膜病(BVD-MD)的发生、流行态势及其流行毒株的生物学特征,本试验于2022年12月—2023年11月从云南省10个州市规模化养牛场随机采集667份牛粪便样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,针对阳性样品选用牛肾细胞(MDBK)进行毒株的分离和鉴定,结合间接免疫荧光试验(IFA)观察病毒增殖情况,并使用Reed-Muench法计算病毒滴度;阳性样品经全基因组测序后,分别对全基因组和5′非翻译区(5′-UTR)序列进行系统发育分析。结果显示,经RT-PCR和MDBK细胞分离鉴定获得2株BVDV,分别命名为BVDV YN.1(GenBank登录号:PP488512.1)和BVDV YN.2(GenBank登录号:PP770551.1),病毒滴度分别为105.81和104.93 TCID50/mL。系统发育分析结果显示,2株BVDV分离株与美国分离的BVDV-1b亚型参考毒株HP-KY-RK13(GenBank登录号:KT355592.1)的核苷酸相似度分别为99.6%和99.5%,与日本分离的BVDV-1b亚型参考毒株END(GenBank登录号:JX419397.1)的核苷酸相似度均为99.7%,且处于同一进化分支(BVDV-1b亚型)。本试验可为云南省BVDV流行病学调查及对其防控提供理论参考依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) BVDV-1b亚型云南分离和鉴定

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云南省库蠓源蓝舌病病毒16型的分离鉴定

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中国兽医杂志 2025年第4期61卷 37-43页

作者：付嘉佳李富祥王金萍何于雯谢佳芮高华峰李小兵云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南农业大学动物医学院云南昆明650500

为了解云南省部分地区库蠓源蓝舌病病毒(BTV)流行情况,本试验于2023年7—10月分别从云南省昆明市宜良县和保山市龙陵县采集昆虫样品进行种属鉴定和虫媒病毒分离鉴定。基于昆虫的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行BLAST序列... 详细信息

为了解云南省部分地区库蠓源蓝舌病病毒(BTV)流行情况,本试验于2023年7—10月分别从云南省昆明市宜良县和保山市龙陵县采集昆虫样品进行种属鉴定和虫媒病毒分离鉴定。基于昆虫的线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列进行BLAST序列比对和种属鉴定。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测、病毒分离培养、间接免疫荧光试验和病毒毒价测定对所获得的虫媒病毒进行分离和鉴定,以及遗传进化分析。结果显示,采集的昆虫样品分别属于尖音库蚊、隐匿库蠓、拜氏铗蠓和蠓科。其中,采自云南省保山市龙陵县的样品RT-PCR检测结果为BTV阳性,经BHK-21细胞连续传代培养,得到1株BTV分离株;间接免疫荧光试验结果显示,分离株能与BTV-16标准阳性血清发生特异性反应,初步确定该分离株为BTV-16,将其命名为YNLL-BTV16-2023,其毒价为10-5.1/0.1 mL。遗传进化分析结果显示,分离株VP2基因序列与2株日本分离株基因序列(GenBank登录号:LC586239.1和AB686220.1)核苷酸同源性最高,分别为97.20%和96.87%,VP3基因序列与中国云南省分离株VP3基因序列(GenBank登录号:MG564322.1)核苷酸同源性为99.26%,VP5基因序列与日本分离株(GenBank登录号:AB686236.1)核苷酸同源性为97.77%,VP7基因序列与2株中国分离株(GenBank登录号:AF172831.1和KT002584.1)核苷酸同源性均为98.80%。结果表明,云南省保山市龙陵县边境地区存在BTV-16毒株,该血清型病毒可通过隐匿库蠓携带。本试验为云南省边境地区BTV及其传播媒介的分布提供参考。

关键词：隐匿库蠓蓝舌病病毒16型(BTV-16) 分离和鉴定遗传进化分析

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猪瘟病毒糖蛋白E^(rns)中和表位的鉴定和比较

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微生物学报 2005年第1期45卷 66-71页

作者：张富强李志华张念祖云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

猪瘟病毒 (CSFV)囊膜结构糖蛋白Erns(gp4 8)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和Erns与细胞表面受体的相互作用介导CSFV感染细胞的过程。Erns具有RNA酶活性 ,影响病毒自身复制并涉及对病毒的中和效应。采用... 详细信息

猪瘟病毒 (CSFV)囊膜结构糖蛋白Erns(gp4 8)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和Erns与细胞表面受体的相互作用介导CSFV感染细胞的过程。Erns具有RNA酶活性 ,影响病毒自身复制并涉及对病毒的中和效应。采用抗CSFValfortT櫣ｂｉｎｇｅｎ毒株Ｅｒｎｓ糖蛋白的 1B5 ,b4_2 2和 2 4 16单克隆中和抗体 ,筛选噬菌体展示的 12肽随机肽库 ,进行Erns中和表位的鉴定和比较 ,获得分别针对 1B5、b4_2 2和 2 4 16单克隆抗体的 3个主要中和表 (拟 )位基序WxNxxP、DKNR (Q)G和A(T)CxYxKN ,分别定位于Erns的 35 1位～ 35 6位或 348位～ 35 0位、384位～ 386及 32 2位～ 32 3位、380位～ 386位氨基酸区域。分析表 (拟 )位基序与单克隆抗体的免疫反应性差异。b4_2 2和 2 4 16单克隆抗体识别基序存在共有序列KN ,识别Erns中的相似抗原区 ,但其侧翼序列及免疫印迹。

关键词：猪瘟病毒 E^rns糖蛋白单克隆抗体表位鉴定

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猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2中和表位的定位及其免疫反应性分析

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病毒学报 2005年第2期21卷 118-123页

作者：张富强李志华张念祖云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

猪瘟病毒(CSFV)囊膜结构糖蛋白E2(gp55)是激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。Erns和E2与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程。采用抗CSFV中和性单克隆抗体c24/10,淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,结合噬菌体拟位免疫反应性... 详细信息

猪瘟病毒(CSFV)囊膜结构糖蛋白E2(gp55)是激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。Erns和E2与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程。采用抗CSFV中和性单克隆抗体c24/10,淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,结合噬菌体拟位免疫反应性分析结果,对CSFVE2蛋白中和表位进行定位。结果表明:E2蛋白的SPT-TLR基序(832～837位氨基酸)构成CSFV特异性线性中和表位,基序的第一、二、三位氨基酸是表位与单克隆抗体c24/10结合所必需的氨基酸,也是表位的关键性氨基酸。

关键词：表位免疫反应性囊膜膜糖蛋白单克隆抗体保护性免疫应答糖蛋白E CSFV 猪瘟病毒氨基酸

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