检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2025年第1期 17-22+38页

作者：李富祥高华峰赵文华云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

为了鉴定云南省某养殖场患呼吸道疾病奶牛的细菌性病原，本研究将2份奶牛鼻腔拭子样品接种含5%牛血清的营养琼脂，并观察分离菌的菌落形态和经革兰氏染色特性，结果显示分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN240515和YN240516。采用Rapid ID32 ... 详细信息

为了鉴定云南省某养殖场患呼吸道疾病奶牛的细菌性病原，本研究将2份奶牛鼻腔拭子样品接种含5%牛血清的营养琼脂，并观察分离菌的菌落形态和经革兰氏染色特性，结果显示分离到2株革兰氏阳性链状球菌YN240515和YN240516。采用Rapid ID32 STREP kit对2株分离菌进行生化鉴定，采用PCR扩增分离菌16SrDNA基因序列并测序，采用MegAlign软件分析16S rDNA基因序列的同源性，采用MEGA软件构建16S rDNA基因序列的遗传进化树并分析2株分离菌的遗传进化特征，采用小鼠腹腔接种方法分析2株分离菌的致病性，采用纸片琼脂扩散法测定2株分离菌对8大类14种抗菌药物的敏感性。细菌的生化、16S rDNA基因序列同源性和遗传进化鉴定结果显示，2株分离菌生化特征与反刍动物链球菌（Streptococcus ruminantium）模式菌株DSM104980T以及其他链球菌参考株基本一致。分离菌YN240515和YN240516与*** DSM104980T16S rDNA基因序列的同源性分别为100%和99.9%，与其他***参考株16S rDNA基因序列的同源性为98.8%～100%。2株分离菌在16S rDNA基因序列遗传进化树中与全部***参考株形成同一进化分支。基于上述特征，将2株分离菌鉴定为***。致病性实验结果显示，2株分离菌以4.0×10～7cfu经腹腔接种小鼠均能导致小鼠100%死亡率，对小鼠的致病性均较强。药敏试验结果显示，2株分离菌均对青霉素类的青霉素和阿莫西林-克拉维酸以及头孢菌素类的头孢噻吩和头孢曲松等7种抗菌药物敏感，对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素等5种抗菌药物耐药。本研究是国内首次从患呼吸道综合征的奶牛中分离到***，证实我国奶牛存在***的感染，为我国奶牛***感染的防治提供基础数据。

关键词：反刍动物链球菌分离致病性奶牛

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云南省双江县三带喙库蚊中乙型脑炎病毒分离及编码区序列

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中国热带医学 2025年第1期25卷 22-27页

作者：顾杨杨何于雯阮方超杨杰林杨绍昌冷珺李富雨王佳丽王静林大理大学云南大理671003 云南省传染病医院云南昆明650301 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 昆明医科大学云南昆明650500 云南省临沧市双江自治县农业农村局畜牧兽医技术推广中心云南临沧677399

目的了解云南省临沧市双江县蚊虫携带乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)情况及其分子特征。方法2023年8月,在临沧市双江县牛圈采用诱蚊灯采集蚊虫标本,经蚊种鉴定后每25只为一组,采用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,... 详细信息

目的了解云南省临沧市双江县蚊虫携带乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)情况及其分子特征。方法2023年8月,在临沧市双江县牛圈采用诱蚊灯采集蚊虫标本,经蚊种鉴定后每25只为一组,采用BHK-21细胞和C6/36细胞进行病毒分离,阳性分离物分别采用黄病毒属引物进行鉴定;然后采用针对GⅠ型JEV全长15对引物进行RT-PCR扩增,测序、拼接,采用MEGA X、DNAstar、GeneDoc、SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学软件进行序列分析。结果共采集到三带喙库蚊1300只,分52组进行病毒分离,获得1株阳性分离株(SJM23-22),接种C6/36和BHK-21细胞后均出现细胞病变,黄病毒属引物扩增为阳性。对该株病毒全序列测定拼接后,获得一条10840个核苷酸长序列,编码3432个氨基酸;基于全基因序列和E基因序列构建的遗传进化分析结果显示,新分离SJM23-22与柬埔寨GⅠa型毒株(C081)的亲缘关系最近,编码区核苷酸同源性为98.5%,氨基酸同源性为99.8%,而与其他基因型编码区核苷酸同源性均在90%以下,氨基酸同源性均在98%以下;位点分析结果显示与减毒活疫苗株SA14-14-2在E基因上共有22个氨基酸差异位点,其中在8个与神经毒力相关氨基酸关键位点上,存在7个位点差异;重要抗原表位分析结果显示,双江分离株与减毒活疫苗株在结构域Ⅲ中的3个重要抗原表位完全一致;二级结构及三级结构预测结果显示,该毒株以无规则卷曲为主要结构特征。结论在双江县三带喙库蚊中分离1株GⅠa型JEV,与抗原性表位相关的关键氨基酸位点未发生明显改变。本研究丰富了云南省双江县三带喙库蚊携带病毒情况,为云南省虫媒疫情的防控提供了参考。

关键词： GⅠa乙型脑炎病毒全基因组系统进化分析 E蛋白结构预测

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禽腺病毒I群和禽腺病毒4型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2025年第02期 152-158+184页

作者：薛晓岩张振兴杨钦鸿王位张伟李素华宋建领西南林业大学生命科学学院云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室西双版纳州动物疫病预防制中心

为建立能快速检测禽腺病毒I群（FAd V-I）和禽腺病毒4型（FAd V-4）的双重Taq Man探针荧光定量PCR（qPCR）方法，本研究根据禽腺病毒（FAd V）的Hexon基因，设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩... 详细信息

为建立能快速检测禽腺病毒I群（FAd V-I）和禽腺病毒4型（FAd V-4）的双重Taq Man探针荧光定量PCR（qPCR）方法，本研究根据禽腺病毒（FAd V）的Hexon基因，设计针对FAd V-I和FAd V-4的通用型与特异型引物与探针。采用上述引物经PCR扩增靶基因并克隆至p MD19-T载体中，构建重组质粒标准品p MD19-T-FAd V-I和p MD19-T-FAd V-4，并均经PCR和测序鉴定。将两种重组质粒标准品分别10倍倍比稀释后等体积混合作为模板，采用棋盘法对反应体系和反应条件进行优化，建立了能检测上述病原的双重Taq Man探针q PCR方法，同时对该方法的特异性、敏感性、重复性及对临床样品的适用性进行评价。结果显示，两种重组质粒标准品标准曲线的相关系数（R2）均大于0.996，表明两种质粒标准品混合物的拷贝数与其Ct值具有良好的线性关系；该方法能够特异性检测和区分FAd V-I和FAd V-4，与其他禽类传染病病原核酸不发生交叉反应，具有较强的特异性；该方法对FAd V-I和FAd V-4重组质粒标准品的检测限分别为4.6×10～2拷贝/μL和2.01×10～2拷贝/μL，比常规PCR方法敏感性高10倍，具有较高的敏感性；批内和批间重复性试验的变异系数均小于1.0%，具有较好的重复性和稳定性。采用该方法和常规PCR法对32份疑似感染FAd V-I的家禽组织样品、8份疑似感染FAd V-4的家禽粪便样品进行检测，结果显示二者检测结果的符合率均为100%。结果表明，本研究建立的FAd V-I/FAd V-4双重Taq Man探针q PCR检测方法特异性强、敏感性高、准确性好，为快速诊断FAd V-I的同时鉴别FAd V-4提供了技术支持。

关键词：禽腺病毒I群禽腺病毒4型 Hexon TaqMan探针荧光定量PCR

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睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2025年第4期 477-483页

作者：李富祥高华峰赵文华宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

为建立睡眠嗜组织菌（***）可视化LAMP检测方法，笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物，优化反应体系和反应程序，评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率，建立了***可视化LAMP现场检测方法。... 详细信息

为建立睡眠嗜组织菌（***）可视化LAMP检测方法，笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物，优化反应体系和反应程序，评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率，建立了***可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示，本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58℃反应70 min。特异性试验结果显示，该方法能特异性地检测***，与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应，特异性较强。敏感性试验结果显示，该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His，敏感性较高。临床样品检测结果显示，LAMP方法和普通PCR方法检测***的阳性率分别为11.49%(10/87)和9.20%(8/87),LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%(85/87)、100%(8/8)和97.47%(77/79)。结果表明，本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊***感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。

关键词：睡眠嗜组织菌环介等温扩增现场检测牛山羊绵羊

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猪伪狂犬病概述及净化技术探讨

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中国畜禽种业 2025年第2期21卷 118-124页

作者：张振兴李卓然杨秋艳何于雯周卓宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室/农业农村部跨境动物疫病防控重点实验室(部省共建) 云南昆明650224 云南省弥勒市动物疫病预防控制中心云南弥勒652300

猪伪狂犬病是一种高度致死性传染病,也是猪场生产管理需要防护的重要疾病之一,该文对猪伪狂犬病进行了系统性阐述,通过对猪伪狂犬病病原学、流行特征、临床症状进行全面介绍,并对猪伪狂犬病的检测方法和净化手段进行探究,以期为生猪养... 详细信息

猪伪狂犬病是一种高度致死性传染病,也是猪场生产管理需要防护的重要疾病之一,该文对猪伪狂犬病进行了系统性阐述,通过对猪伪狂犬病病原学、流行特征、临床症状进行全面介绍,并对猪伪狂犬病的检测方法和净化手段进行探究,以期为生猪养殖提供科学的防治策略和理论基础,促进生猪养殖业持续健康发展。

关键词：猪伪狂犬病病原学流行特征临床症状检测方法净化手段

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2株云南源BVDV-1b亚型毒株的分离和鉴定

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中国兽医杂志 2025年第2期61卷 40-46页

作者：崔垚鑫李聃谢佳芮朱沛徐心明岩锐陈其云李文贵姚俊云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省大理市大理镇农业综合服务中心云南大理671003 云南省楚雄州禄丰市动物疫病预防控制中心云南禄丰651200 云南省普洱市孟连县动物疫病预防控制中心云南普洱665000 玉溪农业职业技术学院动物科技学院云南玉溪651100

为探明云南省牛病毒性腹泻黏膜病(BVD-MD)的发生、流行态势及其流行毒株的生物学特征,本试验于2022年12月—2023年11月从云南省10个州市规模化养牛场随机采集667份牛粪便样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检... 详细信息

为探明云南省牛病毒性腹泻黏膜病(BVD-MD)的发生、流行态势及其流行毒株的生物学特征,本试验于2022年12月—2023年11月从云南省10个州市规模化养牛场随机采集667份牛粪便样品,进行牛病毒性腹泻病毒(BVDV)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,针对阳性样品选用牛肾细胞(MDBK)进行毒株的分离和鉴定,结合间接免疫荧光试验(IFA)观察病毒增殖情况,并使用Reed-Muench法计算病毒滴度;阳性样品经全基因组测序后,分别对全基因组和5′非翻译区(5′-UTR)序列进行系统发育分析。结果显示,经RT-PCR和MDBK细胞分离鉴定获得2株BVDV,分别命名为BVDV YN.1(GenBank登录号:PP488512.1)和BVDV YN.2(GenBank登录号:PP770551.1),病毒滴度分别为105.81和104.93 TCID50/mL。系统发育分析结果显示,2株BVDV分离株与美国分离的BVDV-1b亚型参考毒株HP-KY-RK13(GenBank登录号:KT355592.1)的核苷酸相似度分别为99.6%和99.5%,与日本分离的BVDV-1b亚型参考毒株END(GenBank登录号:JX419397.1)的核苷酸相似度均为99.7%,且处于同一进化分支(BVDV-1b亚型)。本试验可为云南省BVDV流行病学调查及对其防控提供理论参考依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) BVDV-1b亚型云南分离和鉴定

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猪圆环病毒病诊断与防控

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现代畜牧科技 2025年第1期 97-100页

作者：张振兴李卓然周卓何于雯杨秋艳宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 农业农村部跨境动物疫病防控重点实验室(部省共建) 云南昆明650224 云南省弥勒市动物疫病预防控制中心云南弥勒652300

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)作为一种全球性猪类传染病,对养猪业构成了严重威胁。该文旨在全面阐述猪圆环病毒的特性、病害影响及防控策略,并总结现有的治疗手段优缺点,以期为猪圆环病毒病的治疗提供参考依据。该文... 详细信息

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease,PCVD)作为一种全球性猪类传染病,对养猪业构成了严重威胁。该文旨在全面阐述猪圆环病毒的特性、病害影响及防控策略,并总结现有的治疗手段优缺点,以期为猪圆环病毒病的治疗提供参考依据。该文通过深入解析猪圆环病毒病的各个方面,为养猪业提供一套全面的防控体系,旨在提升养猪业的健康水平和生产效益,也为将来更多针对病毒的特异性治疗和预防手段的开发提供理论基础。

关键词：猪圆环病毒诊断防控治疗

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蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用

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华南农业大学学报 2021年第3期42卷 17-25页

作者：杨振兴李占鸿肖雷谢佳芮廖德芳李卓然李华春朱建波杨恒云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

【目的】建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)及帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)快速筛查和诊断的三重RT-qPCR检测技术。【方法】选择BTV的NS3、EHDV的NS1以及PALV的VP7基因作为靶基因,设计3组特异性引物和探针,建立3种病毒的三重RT-qPCR检测方法。对检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证,同时使用我国分离的BTV、EHDV与PALV不同血清型毒株和对应的阳性血液样本,与24个BTV血清型及6个EHDV血清型参考毒株对该三重法的检测效果进行验证。【结果】三重RT-qPCR的扩增效率均可达90%以上,对3种病毒核酸拷贝数的检测下限均为10μL-1级别,与单重法的检测灵敏度相当;与阿卡斑病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和牛流行热病毒之间无交叉反应;Ct值批内、批间变异系数均在2%以内;可检测出24种BTV血清型、6种EHDV血清型与3种PALV血清型,具有群特异性;可有效检测血液中的病毒核酸,检测结果与单重法一致。【结论】本研究建立的BTV、EHDV与PALV三重RT-qPCR具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样本中对3种病毒的同时诊断与筛查。

关键词：三重RT-qPCR 蓝舌病病毒流行性出血病病毒帕利亚姆血清群病毒病毒检测

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我国牛羊中山病血清学调查

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畜牧兽医学报 2019年第8期50卷 1715-1722页

作者：杨振兴朱沛李占鸿廖德芳朱建波肖雷谢佳芮李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

为了解中山病在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA检测方法,对2016-2018年我国吉林、辽宁、内蒙古、河北、新疆、西藏、湖北、重庆、四川、贵州、云南、广西和广东13个省级区划的8 232份牛羊血清进行检测。结果显示,有12个省级... 详细信息

为了解中山病在我国的流行和分布情况,本研究采用竞争ELISA检测方法,对2016-2018年我国吉林、辽宁、内蒙古、河北、新疆、西藏、湖北、重庆、四川、贵州、云南、广西和广东13个省级区划的8 232份牛羊血清进行检测。结果显示,有12个省级区划检测出抗体阳性,且阳性率有明显的地域性和季节性,由北向南逐渐升高(0~74.03%),秋季阳性率(2.50%~60.00%)明显高于春季(0~10.00%)和夏季(2.22%~35.00%)。乌兰察布、哈密、河池和曲靖等4个采样点的牛羊血清检测发现,牛血清抗体阳性率均高于山羊和绵羊血清。以上结果表明中山病在我国的流行已具有广泛性,流行分布状况与其媒介昆虫的活动有密切关系,并且牛比羊更易被该病毒感染,同时本研究的试验数据将有助于我国更好地了解和防控中山病。

关键词：中山病血清学调查竞争ELISA 阳性率

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流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2018年第7期49卷 1440-1450页

作者：朱建波杨振兴肖雷高林苗海生何于雯孟锦昕杨恒李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果... 详细信息

为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50%;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RTPCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。

关键词：流行性出血病病毒多克隆抗体竞争ELISA

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