检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2016年第2期24卷 68-75页

作者：刘宁宋聪高林谢佳芮李华春王静林姚俊王生奎云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

云南省文山市某规模化猪场2015年7-8月频繁发生以种公猪一侧睾丸肿大,母猪流产、产死胎、木乃伊胎及弱仔为主要临床症状的繁殖障碍疫情.为了查明病因,对送检流产胎猪进行病理解剖,采集胎猪及胎盘病料进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征... 详细信息

云南省文山市某规模化猪场2015年7-8月频繁发生以种公猪一侧睾丸肿大,母猪流产、产死胎、木乃伊胎及弱仔为主要临床症状的繁殖障碍疫情.为了查明病因,对送检流产胎猪进行病理解剖,采集胎猪及胎盘病料进行猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒欧洲型及美洲型毒株、猪细小病毒、伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒、猪流产衣原体、布氏杆菌及弓形虫PCR和real-time PCR检测,同时应用猪肾原代细胞及BHK-21传代细胞进行病毒分离鉴定以及细菌分离鉴定.检测结果显示,从流产胎猪内脏器官、大脑及胎盘组织扩增出乙型脑炎病毒prM基因及伪狂犬病毒gE基因目的条带.序列分析结果显示,扩增的乙型脑炎病毒prM基因序列与NCBI GenBank中的参考毒株（Accession ***594829.1）序列同源性达99%;伪狂犬病毒gE基因核苷酸序列与NCBI GenBank中的参考毒株（Accession ***936475.1）序列同源性达100%.应用BHK-21传代细胞盲传分离获得1株可致细胞病变（cytopathic effect,CPE）的病毒株,鉴定为乙型脑炎病毒,并命名为JEV-2015-WS-YN.由此推测,引起此次猪群繁殖障碍极有可能为日本乙型脑炎病毒和伪狂犬病毒共同感染造成.

关键词：日本乙型脑炎病毒伪狂犬病毒混合感染

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云南省畜禽细菌耐药基因分布特征

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中国兽医学报 2021年第12期41卷 2454-2460页

作者：李富祥王慧辉赵文华高华峰宋建领王生奎杨仕标云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南农业大学动物医学学院云南昆明650201

为了解云南省畜禽细菌耐药基因分布特征,采用PCR方法检测94株畜禽细菌中β-内酰胺类、四环素类、磺胺类、大环内酯类、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类和氯霉素类共23种耐药基因。结果显示,共检测到23种耐药基因,其中aacA4(90.43%)基因检... 详细信息

为了解云南省畜禽细菌耐药基因分布特征,采用PCR方法检测94株畜禽细菌中β-内酰胺类、四环素类、磺胺类、大环内酯类、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类和氯霉素类共23种耐药基因。结果显示,共检测到23种耐药基因,其中aacA4(90.43%)基因检出率最高,其次是floR(87.23%)、tetA(80.85%)、qnrS(77.66%)、qnrD(74.47%)、tetM(71.28%)、sul2(69.15%)、aadA1(53.19%)、bla;(45.74%)、sul1(40.43%)和sul2(38.30%)。携带8种及8种以上耐药基因的菌株比例为73.40%,其中携带耐药基因数最多(14种)的菌株比例为2.13%。地域分布上,保山市畜禽细菌耐药基因的种类(20.00种)和每株细菌平均携带耐药基因数量(11.24种)均高于红河州、昆明市、普洱市和楚雄州;畜禽品种分布上,鸡细菌耐药基因的种类(22.00种)和每株细菌平均携带耐药基因数量(9.11种)均高于猪、牛和羊。本研究结果表明,aacA4、floR、tetA、qnrS、qnrD、tetM、sul2、aadA1和bla;等多种耐药基因广泛分布于云南省畜禽细菌,不同地区、不同种类畜禽和不同种类细菌耐药基因的分布存在差异。本研究结果对云南省畜禽养殖场兽用抗生素的科学合理应用具有重要的指导意义。

关键词：耐药基因分布畜禽细菌

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羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

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动物医学进展 2012年第11期33卷 31-36页

作者：姚俊李富祥彭海生鲁富有张乔明李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省普洱市动物疫病预防控制中心云南普洱665000

根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PC... 详细信息

根据GenBank中的羊口疮病毒基因组(AY386264)ORFVgORF121及ORFVgORF122基因的DNA序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计一对引物和一条TaqMan探针,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。该方法组内及组间重复试验变异系数均低于2%,上机检测时间不超过40min,检测灵敏度达1×101copies/μL,山羊痘及禽痘病毒特异性检测均为阴性,标准曲线的相关系数(R2)为0.998 088,线性关系良好。应用该方法对云南保山和普洱送检的羊口疮临床组织病料进行绝对定量检测,送检样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.35×108copies/μL和9.62×107copies/μL。结果表明,研究建立的羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、稳定、快速和安全的特点,适于羊口疮临床组织样品的早期检测及常规病原监测。

关键词：羊口疮病毒 TaqMan 实时荧光定量PCR 建立应用

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2019年云南省景洪市哨兵动物多种虫媒病毒的分离鉴定

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中国畜牧兽医 2020年第12期47卷 4127-4137页

作者：杨振兴寇美玲廖德芳高翔胡忠燕李占鸿谢佳芮李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224 景洪市动物疫病预防控制中心景洪666100

本研究旨在了解云南省景洪市虫媒病毒的流行情况。2019年在景洪市勐罕镇设立了3头哨兵动物牛,定期采血进行虫媒病毒的分离与鉴定,共获得7株病毒分离物。经病毒核酸的RT-PCR鉴定,分离到2株血清型分别为6型和7型流行性出血热病毒(epizooti... 详细信息

本研究旨在了解云南省景洪市虫媒病毒的流行情况。2019年在景洪市勐罕镇设立了3头哨兵动物牛,定期采血进行虫媒病毒的分离与鉴定,共获得7株病毒分离物。经病毒核酸的RT-PCR鉴定,分离到2株血清型分别为6型和7型流行性出血热病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV),2株血清型分别为4型和5型的蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV),1株帕利亚血清群病毒(palyam serogroup virus,PALV)中的D’Aguilar virus(DAV)血清型病毒和2株未鉴定出的环状病毒。经病毒Seg-2、Seg-3序列ORF区的比对和进化分析显示,7株病毒的地域型均为Eastern型,与日本、澳大利亚和印度毒株具有最近的亲缘关系。3头哨兵动物的血液和血清,经病毒核酸及血清中和试验检测,证明3头动物均被相应的病毒感染。动物感染病毒后,血清中的特异性抗体迅速上升,3~4周后达最高点并能够在该水平维持较长时间,而血液中病毒核酸含量2~4周到达最高点后则呈迅速下降趋势。本研究报道了景洪虫媒病毒的分离、毒株序列特征以及在动物上的感染特性,研究结果为进一步了解当地的牛虫媒病毒提供数据支撑,同时3头牛分离获得7株病毒,提示当地可能还存在更多种类的虫媒病毒。

关键词：蓝舌病病毒(BTV) 流行性出血病病毒(EHDV) 帕利亚血清群病毒(PALV) 病毒分离鉴定

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帕利亚姆病毒VP7蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2021年第2期51卷 176-183页

作者：李占鸿宋子昂杨振兴肖雷李卓然谢佳芮李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南农业大学动物医学院云南昆明650201

本研究将帕利亚姆病毒(PALV)VP7蛋白的编码区序列插入原核表达质粒pET-32a(+),构建出重组质粒pET32-PALV-VP7,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行重组蛋白的诱导表达。采用镍离子亲和层析进行重组蛋白的纯化,通... 详细信息

本研究将帕利亚姆病毒(PALV)VP7蛋白的编码区序列插入原核表达质粒pET-32a(+),构建出重组质粒pET32-PALV-VP7,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行重组蛋白的诱导表达。采用镍离子亲和层析进行重组蛋白的纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,采用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定。将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA、Western-blot与间接免疫荧光对多克隆抗体的效价与反应原性进行分析。结果显示,在37℃与0.1 mmol/L IPTG诱导条件下,PALVVP7重组蛋白在大肠杆菌中得以高效表达,其分子质量约为43 ku,以包涵体形式存在,占菌体蛋白总量的30.4%。重组蛋白经纯化与复性处理后纯度达94.1%,Western-blot结果显示,复性后的重组蛋白可与PALV阳性血清发生特异性结合。ELISA检测结果显示,制备的家兔抗PALVVP7多克隆抗体效价可达1∶12000。使用该多克隆抗体为一抗,可通过免疫荧光与Western-blot检测到PALV感染细胞中的VP7蛋白,表明抗体可特异性结合PALV的VP7蛋白。本研究成功在大肠杆菌中表达PALV VP7重组蛋白,并制备获得多克隆抗体,为PALV诊断试剂的开发奠定了基础。

关键词：帕利亚姆病毒 VP7蛋白原核表达多克隆抗体

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1株库蠓源版纳病毒的分离与全基因组序列分析

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中国畜牧兽医 2021年第3期48卷 781-791页

作者：李占鸿朱建波寇美玲杨振兴李卓然牛保生姚萍芬李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224 云南省师宗县动物疫病预防控制中心师宗655799

为分析云南省虫媒病毒的种类与遗传特征,在云南省师宗县采集库蠓进行病毒的分离与鉴定;通过全长cDNA扩增与高通量测序技术获取病毒全基因组序列,进行序列比对与系统发生树构建。结果显示,从采集的库蠓样本中分离出1株可在C6/36细胞上引... 详细信息

为分析云南省虫媒病毒的种类与遗传特征,在云南省师宗县采集库蠓进行病毒的分离与鉴定;通过全长cDNA扩增与高通量测序技术获取病毒全基因组序列,进行序列比对与系统发生树构建。结果显示,从采集的库蠓样本中分离出1株可在C6/36细胞上引起细胞病变的毒株(YNSZ043),病毒基因组为分节段双链RNA,琼脂糖凝胶电泳呈“2-4-3”的带型特征;电镜观察可见直径为70~80 nm,呈“指环状”,表面具有纤维突起的病毒粒子。全基因组测序结果显示,YNSZ043毒株为版纳病毒(Banna virus,BAV),基因组大小为20683 bp,由Seg-1(3762 bp)至Seg-12(861 bp)12个基因节段组成,与中国BAV毒株各基因节段的核苷酸序列相似性在64.8%~99.6%之间,氨基酸序列相似性在58.8%~100%之间,在系统发生树上YNSZ043毒株与中国分离的BAV聚为一簇,形成独立的中国进化支系。对决定BAV基因型的Seg-12分析结果显示,YNSZ043毒株属于A2基因型,该毒株的Seg-5/VP5与越南分离BAV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性高达97.1%和97.6%,表明该毒株的Seg-5基因节段很可能与越南毒株之间发生了基因重配。研究结果丰富了中国BAV的基因组序列,为开展云南省BAV的流行病学研究提供了参考。

关键词：库蠓版纳病毒分离鉴定全基因组测序基因重配

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中国流行的十二种血清型蓝舌病病毒一步法RT-PCR定型方法的建立与应用

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中国兽医科学 2020年第12期50卷 1486-1493页

作者：李占鸿宋子昂杨振兴李卓然廖德芳李华春杨恒云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南农业大学动物医学院云南昆明650201

为建立针对我国流行的12种蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)血清型的特异性RT-PCR检测方法,本研究根据我国流行BTV毒株Seg-2的高度保守区域,设计出12对BTV血清型特异性扩增引物,建立了RT-PCR方法,并对该RT-PCR方法的反应条件、引物特... 详细信息

为建立针对我国流行的12种蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)血清型的特异性RT-PCR检测方法,本研究根据我国流行BTV毒株Seg-2的高度保守区域,设计出12对BTV血清型特异性扩增引物,建立了RT-PCR方法,并对该RT-PCR方法的反应条件、引物特异性与灵敏性进行了优化与验证;以我国分离的162株BTV为检测对象,对其血清型进行鉴定并构建系统发生树。结果显示,建立的BTV血清型RT-PCR具有良好的特异性与灵敏度:设计的12对引物仅与对应血清型BTV核酸模板产生特异性PCR扩增,与其余血清型毒株之间无交叉扩增现象;对不同血清型BTV核酸的检测灵敏度在1.28×10^2copies(BTV-2)至9.62×10^2copies(BTV-1)之间。对我国分离的BTV毒株的RT-PCR血清型鉴定与测序结果显示,162株BTV分属12种血清型(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21与-24),根据Seg-2序列构建的系统发生树显示,我国流行BTV血清型毒株的Seg-2序列与对应血清型的BTV标准参考毒聚为一簇,分属9个基因群(A、B、C、E、F、G、H、I和J基因群)。本研究建立的BTV血清型特异性RT-PCR方法为我国流行BTV的检测、诊断与分子流行病学调查提供了可靠的技术手段。

关键词：蓝舌病病毒血清型 RT-PCR 检测方法

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链特异性RT-PCR方法检测口蹄疫病毒负链RNA

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生物技术通报 2012年第1期28卷 130-133,144页

作者：王继华信爱国朱明旺苗海生胡骑廖德芳李乐李华春云南省保山疫苗厂保山678000 云南省畜牧兽医科学院农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南省热带亚热带动物病毒重点实验室昆明650224

旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒... 详细信息

旨在建立一种快速、灵敏、特异的检测口蹄疫病毒在复制过程中产生的负链RNA的方法。根据口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)病毒5'-非编码区(5'-UTR)基因序列,设计了5条引物链特异性RT-PCR引物,建立检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法。提取FMD病毒RNA,应用设计的正向引物T1-H1做反转录引物,经反转录和RNA酶A消化后,再经两轮链特异性PCR扩增,可特异性地检测FMDV在复制过程中产生的负链RNA。所建立的检测口蹄疫病毒负链RNA的链特异性RT-PCR方法是一种可靠的方法,在确定细胞培养物和动物感染FMDV的病毒复制和了解病毒的致病性研究中具有应用前景。

关键词：口蹄疫病毒链特异性RT-PCR 复制中间体负链RNA 感染

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云南省2株鹿流行性出血热病毒的分离鉴定

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中国兽医学报 2019年第4期39卷 635-639页

作者：朱沛肖雷杨振兴牛保生姚萍芬赵天富朱建波李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省师宗县动物疫病控制中心云南师宗655700

为了监测云南省反刍动物鹿流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)的感染情况,本试验在云南省师宗县设立了监控点,筛选出EHDV抗体阴性的10头牛和5只羊作为哨兵动物,每年的5～10月份每周采血1次,11月到次年4月份每... 详细信息

为了监测云南省反刍动物鹿流行性出血热病毒(epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)的感染情况,本试验在云南省师宗县设立了监控点,筛选出EHDV抗体阴性的10头牛和5只羊作为哨兵动物,每年的5～10月份每周采血1次,11月到次年4月份每月采血1次,通过酶联免疫吸附试验监测其抗体转阳情况,用转阳牛的红细胞接种BHK以分离病毒,用病毒RT-PCR和中和试验鉴定病毒。结果显示,从2头转阳牛的抗凝血中分离到2株EHDV,其TCID_(50)分别为10^(-2.5)/0.1 mL和10^(-3.44)/0.1 mL,血清型均为EHDV-5型。本试验在云南省分离到EHDV,明确了云南省反刍动物存在EHDV感染,为我国监控EHDV流行情况及疫病风险防范提供了重要借鉴意义。

关键词：鹿流行性出血热病毒分离鉴定牛羊

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中国蓝舌病病毒血清2型病毒株的分离与鉴定

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中国预防兽医学报 2020年第5期42卷 457-461页

作者：朱沛李占鸿谢佳芮牛保生姚萍芬朱建波肖雷李华春云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 云南省师宗县动物疫病控制中心云南师宗655700

为了解我国云南省蓝舌病病毒(BTV)的流行情况和基因分型,本研究在云南师宗、江城、芒市分别设立监控点,通过对哨兵动物定期采血监控其血清学转阳情况,采用"鸡胚-C6/36细胞-BHK-21细胞"接种方式分离病毒,利用qRT-PCR及中和试... 详细信息

为了解我国云南省蓝舌病病毒(BTV)的流行情况和基因分型,本研究在云南师宗、江城、芒市分别设立监控点,通过对哨兵动物定期采血监控其血清学转阳情况,采用"鸡胚-C6/36细胞-BHK-21细胞"接种方式分离病毒,利用qRT-PCR及中和试验鉴定病毒,通过特异性引物对分离株Seg-2及Seg-7序列的ORF区进行RT-PCR扩增与克隆测序。结果显示,从2017年6月师宗县牛的抗凝血中分离到一株BTV,鉴定为BTV-2型,TCID50为10-4.88/50μL。分离株Seg-2及Seg-7序列的系统发生树显示其Seg-2序列和日本以及台湾BTV-2株的Seg-2序列相似度较高,同为BTV-2型,而Seg-7序列和台湾BTV-2株以及日本BTV-21株亲缘关系最近,同为Eastern 2型。本研究分离鉴定了BTV-2型病毒株YN/SZ/22457,并掌握了分离株Seg-2及Seg-7序列的遗传特性,明确了云南省存在BTV-2的流行。本研究为进一步开展BTV-2型的流行病学、感染特性研究奠定了基础。

关键词： BTV2型分离鉴定序列分析

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