检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2025年第1期35卷 30-40页

作者：侯婧涵段素琴徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华陈丽雄刘权赵远杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和... 详细信息

目的建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1,CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。方法本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和PBS方式造模。监测记录15 d内临床指标、生理指标、排毒情况,并在感染后第7天(D7)选取动物进行组织病理学和病毒抗原与核酸检测。结果单独和混合感染的实验组地鼠均出现类似人类手足口病的临床症状;WBC、NEUT、LYMPH结果提示病毒感染血象特征;咽拭子、粪便、血液和组织中均能检测到两种病毒核酸;粪便样品中能分离出两种病毒;脑等组织出现病理损伤表现及CVA6和CVB1病毒抗原蛋白和核酸的阳性共定位。结论经鼻腔同时滴注CVA6和CVB1混合液能够成功感染叙利亚金黄地鼠,复制出类似人类手足口病的疱疹、造成病毒性心肌炎和脑炎病理损伤等,结果显示混合感染组相较于单独感染组病情更为严重,表现为临床症状加重、病毒复制增高以及组织病理损伤明显。本研究为开展人类肠道病毒混合感染基础和临床研究提供一定借鉴和参考。

关键词：叙利亚金黄地鼠混合感染动物模型柯萨奇病毒A组6型柯萨奇病毒B组1型手足口病

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野生恒河猴肠道病毒病原谱分析

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实验动物科学 2025年第1期42卷 12-17页

作者：侯婧涵徐鸿界孙文亭李明学李艳艳靳玮华杨凤梅和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 呼吸与共病全国重点实验室北京100005

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢... 详细信息

目的本研究旨在调查野生恒河猴的肠道病毒病原谱状况,为野生猴群疾病预防、引入及饲养管理人员职业健康防护提供科学依据。方法本研究收集云南省218份野生恒河猴新鲜粪便样本,提取病毒RNA,采用肠道病毒通用引物222/224、AN88/AN89进行巢式PCR检测,对阳性样本进行测序分析,以确认病毒种类。结果恒河猴肠道病毒携带率为11%(24/218),其中,婴猴组携带率为7.5%(4/53);青少年猴组携带率为3.5%(2/57);成年猴组携带率为16.7%(9/54);老年猴组携带率为16.7%(9/54)。结论经肠道病毒基因分型确定该肠道病毒病原谱主要为肠道病毒J组、肠道病毒sp.组和肠道病毒A组;经系统发育分析发现218只野生恒河猴肠道病毒病原谱与EVJ、EVA92、EVA119、SV19和SV46等亲缘关系较近。

关键词：肠道病毒野生恒河猴年龄性别系统发育

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4种人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

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中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 89-95页

作者：赵永美孟明耀李金美宋泽鑫周艳杨武李鸿钧中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500 昆明医科大学附属延安医院云南省肿瘤免疫防治重点实验室云南昆明650051

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilica... 详细信息

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs),镜下观察细胞形态,并检测细胞增殖能力、特异性表面抗原表达水平及多向分化潜能。分别采用超速离心法、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀法、蔗糖沉淀法和Total Exosome Isolation试剂盒法(简称试剂盒法)4种方法提取HUC-MSCs培养上清液中的hucMSCs-Exos,透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体浓度及颗粒大小,BCA法检测外泌体总蛋白浓度,Western blot法检测外泌体特异性标志蛋白水平。结果传代培养的HUC-MSCs于镜下观察呈长梭形,漩涡贴壁生长,且细胞增殖速度较快;高表达MSCs特异性表面抗原CD73和CD90,极低表达造血干细胞表面标记物CD34和CD45;具有向脂肪及成骨分化的潜能。4种方法均可提取获得HUCMSCs-Exos,除试剂盒法外,其他3种方法提取的外泌体均呈茶托样双层膜结构且边界清晰;试剂盒法提取外泌体的总蛋白浓度及颗粒浓度均明显高于其他3种方法(F=35.18,P均<0.01);4种方法提取的外泌体均能表达特异性标志物CD63和CD81,除蔗糖沉淀法提取外泌体不表达CD9外,其他方法提取的外泌体均表达CD9。结论4种方法均能提取获得外泌体,其中超速离心法提取外泌体质量稳定;试剂盒法提取外泌体的产量较高,且更省时、更便捷;PEG沉淀法及蔗糖沉淀法提取外泌体的纯度更高。可根据不同的生产需求,选择合适的外泌体分离技术。

关键词：外泌体提取人脐带间充质干细胞

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柯萨奇病毒B组4型TaqMan探针一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2025年第2期38卷 167-171页

作者：郭伟陈俊薇刘煜菡张名冯昌增马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南大学生命科学学院云南昆明650500

目的建立柯萨奇病毒B组4型(Ccoxsackievirus B4,CVB4)Taq Man探针一步法实时荧光定量PCR(real-time fluo-rescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测方法,并进行验证,以期为CVB4的快速定量检测提供可靠方法。方法选择CVB4的VP1序列中较保守部分,设计引物和探针;经体外转录获得阳性RNA标准品,绘制标准曲线,建立CVB4的Taq Man探针一步法RT-q PCR法。验证方法的灵敏度、线性范围、重复性、特异性。应用建立的方法检测16份临床样本。结果方法的检测灵敏度为10~3copies/μL;阳性RNA标准品在10^(3)~10^(10)copies/μL范围内,与荧光单位(relative fluorescence unit,RFU)具有良好的线性关系,线性方程为:y=-3.742 x+48.651,R^(2)为0.998;重复性验证CV<2%;与柯萨奇病毒B组其他血清型CVB2、CVB3、CVB5、CVB6,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71),柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A,CVA)8、10、12型(CVA8、CVA10、CVA12),埃可病毒11型(Echovirus 11,E11)均无交叉反应。16份临床样本中12份为CVB4阳性。结论建立的Taq Man探针一步法RT-q PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,可用于CVB4临床样品的检测。

关键词：柯萨奇病毒B组4型 TaqMan探针实时荧光定量PCR

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云南省6株柯萨奇A组16型病毒的全基因组分析

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热带医学杂志 2025年第3期 337-342+437页

作者：楚昭阳陈俊薇冯昌增刘煜菡张名李丽马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南大学生命科学学院昆明市妇幼保健院检验科

目的分析2022年云南省6株柯萨奇A组16型病毒（CVA16）分离株的全基因组特征，为CVA16的分子流行病学研究及相关疾病的防控提供参考数据。方法 2022年从昆明市妇幼保健院的200份手足口病患儿临床粪便样品中共分离到22株CVA16毒株，将22... 详细信息

目的分析2022年云南省6株柯萨奇A组16型病毒（CVA16）分离株的全基因组特征，为CVA16的分子流行病学研究及相关疾病的防控提供参考数据。方法 2022年从昆明市妇幼保健院的200份手足口病患儿临床粪便样品中共分离到22株CVA16毒株，将22株CVA16的病毒蛋白1(VP1)区域进行扩增及测序，发现该22株CVA16的VP1基因的同源性很高，均达到95%以上，随机选择6株进行全基因组扩增和测序。通过MEGA7.0、DNAStar7.1和SimPlot3.5.1等软件对全基因组序列进行分析。结果 6株分离株分别命名为167/YN/CHN/2022、174/YN/CHN/2022、183/YN/CHN/2022、217/YN/CHN/2022、218/YN/CHN/2022和231/YN/CHN/2022，经对扩增的部分VP1进行鉴定，均为CVA16。6条CVA16基因序列已上传至GenBank数据库，基因登录号为PP532683-PP532688。6株CVA16分离株的全基因组长为7 358～7 405 nt,5’UTR区均为741 nt,3’UTR区长为35～82 nt,5’UTR区和3’UTR区之间是一个长为6 582 nt的开放阅读框，与其他CVA16相比未见核苷酸插入与缺失，编码区编码一个含有2 194个氨基酸残基的多聚蛋白。根据VP1系统进化分析，6株CVA16分离株均位于B1a进化分支。该6株分离株之间的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%～98.6%和97.9%～99.3%，与中国大陆其他流行株的核苷酸和氨基酸序列一致性分别为86.5%～97.8%和97.5%～99.5%。与其原型株相比，6株毒株共发生44处氨基酸变异，且在BC环和EF环发生氨基酸置换。重组分析显示，该6株CVA16分离株重组信号较弱，可能未发生新的重组。结论从2022年云南省手足口病患儿临床样本中分离到的6株CVA16均属于B1基因亚型的B1a分支。

关键词：柯萨奇A组16型病毒全基因组序列分析

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EV71类病毒颗粒的表达和免疫原性的初步评价

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中国生物工程杂志 2013年第1期33卷 8-13页

作者：郭莉莉欧霞米锴孙茂盛李鸿钧云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发实验室昆明650118

目的:运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建EV71类病毒颗粒,并对形成的类病毒颗粒的免疫原性进行初步评价。方法:构建重组杆状病毒表达载体Bacmid-P1-3CD,转染昆虫细胞sf9细胞系,获得携带EV71病毒结构基因P1和3CD蛋白酶基因的重组杆状病... 详细信息

目的:运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建EV71类病毒颗粒,并对形成的类病毒颗粒的免疫原性进行初步评价。方法:构建重组杆状病毒表达载体Bacmid-P1-3CD,转染昆虫细胞sf9细胞系,获得携带EV71病毒结构基因P1和3CD蛋白酶基因的重组杆状病毒AcMNPV-P1-3CD。采用免疫荧光、Western blot及电镜观察等方法检测重组病毒表达产物及形态学特征。表达产物免疫动物后用ELISA、中和试验的方法对其免疫效果进行初步评价。结果:免疫荧光证明有特异性表达产物,Western blot结果可见大小约为39kDa的VP1特异性条带。电镜结果可观察到大小约为27nm的颗粒。免疫动物的血清ELISA抗体效价为1:776,中和抗体效价为1:588。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统能共表达EV71的P1和3CD基因,并能形成EV71类病毒颗粒。经初步评价,形成的EV71类病毒颗粒具有较好的免疫原性。

关键词：手足口病 EV71 类病毒颗粒 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统免疫评价

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应用R语言BUGSnet程序包实现贝叶斯网状Meta分析

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中国循证医学杂志 2022年第5期22卷 600-608页

作者：向虹岳磊赵红李华谢天宏杨婷王杰张宇昊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta... 详细信息

BUGSnet程序包是一款功能强大、用于实现贝叶斯网状Meta分析的R语言程序包。该程序包基于JAGS软件并可根据公认的报告规范(PRISMA、ISPOR-AMPC-NCA和NICE-DSU)进行高质量的贝叶斯网络Meta分析。本文借助类固醇佐剂治疗天疱疮的网状Meta分析实例展示BUGSnet程序包处理连续性数据或二分类数据实现贝叶斯网状Meta分析的操作流程。

关键词：网状Meta分析 R软件 BUGSnet程序包贝叶斯推理

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序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达

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中国生物工程杂志 2019年第3期39卷 46-55页

作者：高福兰齐家龙舒聪妍谢航航黄惟巍刘存宝杨旭孙文佳白红妹马雁冰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的... 详细信息

目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的m IL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的m IL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒p Bud CE4. 1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的m IL-33刺激巨噬细胞Raw264. 7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高; Western blot和ELISA结果显示密码子优化的m IL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下m IL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导m IL-33的分泌,产物具生物学活性。结论:密码子优化操作显著改善了m IL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础。

关键词：序列优化白细胞介素-33成熟肽(mIL-33) 293FT

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EV71与CA16感染恒河猴CD1c＋DC诱导IFN—I产生途径及Th细胞分化相关分子的比较

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第1期37卷 34-42页

作者：胡雅洁宋杰汤贝贝李菁刘龙丁王丽春王晶晶张莹和占龙李琦涵中国医学科学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探究EV71与CA16对恒河猴CD1c＋DC的感染情况，与两者感染后Ⅰ型干扰素（typeⅠ interferon，IFN-Ⅰ）产生通路中及辅助性T细胞（T helper cells，Th）分化过程中相关基因的改变。方法本文通过采用免疫荧光、qRT-PCR、噬斑实验、流... 详细信息

目的探究EV71与CA16对恒河猴CD1c＋DC的感染情况，与两者感染后Ⅰ型干扰素（typeⅠ interferon，IFN-Ⅰ）产生通路中及辅助性T细胞（T helper cells，Th）分化过程中相关基因的改变。方法本文通过采用免疫荧光、qRT-PCR、噬斑实验、流式细胞术等方法比较了EV71与CA16感染恒河猴CD1c＋DC在不同的时间点内IFN-Ⅰ的产生，病毒载量、病毒滴度、病毒感染量及Th细胞分化相关的转录因子及细胞因子的表达情况。结果研究结果显示：EV71与CA16均能感染CD1c＋DC；EV71感染CD1c＋DC后IFN-Ⅰ产生显著性下降，病毒载量、病毒滴度与病毒感染量上升，Th2与滤泡辅助性T细胞（Tfh）相关的转录因子及细胞因子表达显著性上升；而CA16感染CD1c＋DC后IFN-Ⅰ产生显著性上升，病毒载量、病毒滴度与病毒感染量下降，Th1与调节性T细胞（Treg）相关的转录因子及细胞因子表达显著性上升。结论这些结果提示EV71与CA16感染CD1c＋DC后可能会造成固有免疫应答与适应性免疫应答显著性差异，这些差异可能与两者诱发的差异性临床症状及病理形成相关。

关键词：肠道病毒71型柯萨奇病毒A16 手足口病树突状细胞免疫应答

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人乳头瘤病毒16型L1基因在毕赤酵母中表达的影响因素分析

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中国生物工程杂志 2017年第10期37卷 1-7页

作者：杨旭黄惟巍姚宇峰刘存宝孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心昆明650118

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密... 详细信息

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒p PinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和p PinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达。结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85%;M16为-451.50 kcal/mol和47.83%;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10%;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01%。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒p PinkTM-HC与p PinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论:密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性,显著影响了表达水平。研究证明基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。

关键词：表达重组人乳头瘤病毒16主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母

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