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中国兽医学报 2025年第4期 678-684页

作者：孙奕成王静何雨殊董子健丁静吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGF... 详细信息

为研究旋毛虫成虫期特异性蛋白Ts DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p上调对肠道上皮细胞的影响,构建miR-142-5p过表达慢病毒表达载体并注射至小鼠体内,观察小鼠结肠组织病理变化情况。将miR-142-5p基因连接绿色荧光慢病毒载体plenti CMV/TO eGFP Puro,测序无误后命名该重组载体为plenti-miR-142-5p。将重组质粒和包装辅助质粒共转染293T细胞,包装产生miR-142-5p过表达慢病毒载体(LV-miR-142-5p)。收取重组慢病毒悬液,利用超速离心沉淀法浓缩,Real-time PCR测定病毒滴度。将病毒悬液尾静脉注射6～8周龄BALB/c小鼠,解剖取其结肠组织进行HE染色并在显微镜下观察。结果显示miR-142-5p同源重组入plenti载体,测序结果与预期序列一致。plenti-miR-142-5p与包装辅助质粒共转染293T细胞,根据绿色荧光表达情况确认转染成功,Real-time PCR结果显示慢病毒滴度为1.23×10～9 IU/mL。小鼠结肠组织切片显示感染组结肠完整性受损,出现明显炎症反应。证明miR-142-5 p可诱导小鼠肠上皮细胞损伤。

关键词： miR-142-5p 慢病毒肠道上皮细胞

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泛素特异性蛋白酶47调控狂犬病病毒感染的功能研究

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中国兽医学报 2025年第2期45卷 266-273页

作者：张艳楠武梦阳王重阳董浩淼果鑫郭艺迪张茂林吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染... 详细信息

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响,本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术,检测在N2a细胞中,RABV直接感染对USP47表达水平的影响,然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示,RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平均上升,上清中病毒滴度也随之升高,同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低;敲低USP47后,RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平降低,上清中病毒滴度也相应降低,IL-6基因水平升高。结果表明,USP47可促进RABV感染,抑制IL-6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

关键词：狂犬病病毒泛素特异性蛋白酶47 白细胞介素6

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自噬与蛋白酶体途径在布鲁菌感染巨噬细胞过程中的相互作用

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 507-513页

作者：董炳梅梁萌萌许文雅王君宋立立任洪林沧州师范学院生命科学学院河北沧州061001 吉林大学动物医学学院/人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为了探明巨噬细胞(macrophage,M_(φ))感染布鲁菌(Brucella)后泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin proteasome system,UPS)和自噬-溶酶体途径(autophagy-lysosome pathway,ALP)在对抗Brucella过程中的相互作用关系,一方面将猪种布鲁菌(Brucella suis,***)分别体外感染M_(φ)和腹腔接种BALB/c小鼠,并对细胞上清液和腹腔液中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行了测定,结果显示***感染过程中UPS首先被激活,随后ALP途径发挥作用;另一方面,应用3-MA、乳胞素分别制备ALP抑制态M_(φ)与UPS抑制态M_(φ)并接种***,随后对细胞上清中LC3Ⅱ、P62与20S蛋白酶体水平进行测定,结果显示当M_(φ)UPS功能被抑制时,ALP作用被显著提高;而ALP功能被抑制时,UPS活性未有显著变化。最后,将不同状态M_(φ)接种***后,对***的胞内增殖能力进行测定,结果显示当UPS与ALP功能被同时抑制时,***的胞内增殖能力显著降低,且UPS对***胞内增殖的促进作用强于ALP。结果表明,Brucella感染M_(φ)过程中UPS与ALP存在相互作用关系,在理论上可为Brucella与宿主细胞相互作用机制的研究提供新思路。

关键词：自体吞噬泛素蛋白酶体途径布鲁菌巨噬细胞

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应用免疫沉淀-质谱联用技术筛选细粒棘球绦虫抗体识别分子

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中国兽医学报 2025年第3期45卷 519-526页

作者：吴小霞丁静金雪敏张壮志张藜潇刘明远吉林大学动物医学学院/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 新疆畜牧科学院兽医研究所/国家动物包虫病参考实验室新疆乌鲁木齐830010

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线... 详细信息

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清,以健康血清为阴性对照,纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原,获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原,利用在线预测软件对肽段覆盖率最高的蛋白进行生物信息学分析。结果显示,IP-MS鉴定得到133种细粒棘球绦虫相关蛋白,其中肽段覆盖率≥70%的有1种蛋白,为肌动蛋白;肽段覆盖率为30%~40%的有3种蛋白,分别为含Ton B结构域蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物2、乳酸脱氢酶;肽段覆盖率为20%~30%的有6种蛋白,分别为剪接因子3b亚基5、肿瘤蛋白D52、表达的保守蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物7、肌苷-5′-单磷酸脱氢酶和醛酮还原酶家族1成员B4。生物信息学分析显示,肌动蛋白无信号肽,可能为非分泌型蛋白,亚细胞定位在细胞骨架,存在6个最佳潜在抗原表位,二级结构和三级结构一致以α螺旋和无规则卷曲为主。结果表明,免疫沉淀-质普联用技术是筛选和鉴定细粒棘球绦虫抗原的一种高通量、简便、快速有效的方法,可为筛选中间宿主羊血清诊断标识的特异分子及包虫病新型诊断技术的研发提供依据。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫免疫沉淀-质谱联用技术抗体识别分子生物信息学分析

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青霉噻唑酸对雄性小鼠生殖功能的毒性作用

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吉林农业大学学报 2024年

作者：胡瑞雪郭健柳增善赵柯胡盼卢士英李岩松任洪林王洋人兽共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林大学动物医学学院

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先... 详细信息

抗生素残留正在成为国际食品贸易中最容易引发贸易冲突的敏感问题。抗生素残留超标已经给我国的动物性食品带来很大的经济损失，其中以青霉素的残留最为常见。青霉噻唑酸（Benzylpenicilloic acid，BPNLA）是青霉素的热解产物之一。先前研究表明，青霉噻唑酸对雄性生殖系统具有损伤作用，但其潜在机制尚不明确。为了探究青霉噻唑酸的毒性表现及作用机制，使用C57BL/6 雄性小鼠构建了急性毒性体内模型，评估了组织病理学、精子质量和骨髓微核率。结果表明：青霉噻唑酸导致了睾丸组织曲精小管排列疏松，细胞间隙变宽，精子数量、存活率以及骨髓微核率显著降低，同时精子畸形率明显增加，证实了其具有生殖毒性作用。使用正常小鼠睾丸Sertoli细胞（TM4细胞）构建了体外模型，利用转录组测序分析了青霉噻唑酸处理后引起的差异基因和信号通路的表达变化，同时通过ELISA检测炎症因子，发现细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β明显升高。综上，青霉噻唑酸能够导致雄性生殖障碍，其作用机制可能与调控炎症反应的信号通路相关。

关键词：青霉噻唑酸雄性生殖系统急性毒性转录组测序炎症

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环状RNA mmu_circ_0001083对牛肠道病毒HY12复制的影响

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中国兽医学报 2024年第8期44卷 1629-1638页

作者：张芷源张群章凡崔续媛郑学博胡俊英常晓冉张福慧王新平吉林大学动物医学学院人兽共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

环状RNA(circRNA)是一类特殊的呈闭合环状结构的非编码RNA,参与多种生物学过程,如细胞增殖、分化和凋亡,在多种疾病发生中发挥重要作用,同时也是潜在的生物标志物和治疗靶点。为探索circRNA对病毒复制的影响,本研究对HY12肠道病毒感染M... 详细信息

环状RNA(circRNA)是一类特殊的呈闭合环状结构的非编码RNA,参与多种生物学过程,如细胞增殖、分化和凋亡,在多种疾病发生中发挥重要作用,同时也是潜在的生物标志物和治疗靶点。为探索circRNA对病毒复制的影响,本研究对HY12肠道病毒感染MC38细胞的circRNA差异表达进行了组学测定与分析,发现在HY12病毒感染后有570个circRNA表达水平上调,381个circRNA表达水平下调。在570个表达上调的circRNA中,选择差异显著上调的circRNA mmu_circ_0001083为研究对象,探讨其与HY12感染之间的关联以及对病毒复制的影响。结果显示,HY12病毒感染细胞后,宿主环状RNA mmu_circ_0001083的表达显著上升,且其表达水平呈现病毒剂量与时间依赖性。与感染正常MC38细胞相比,HY12病毒感染环状RNA mmu_circ_0001083敲低的MC38细胞后,其2C蛋白表达减少,病毒滴度显著降低。相反,HY12病毒感染过表达环状RNA mmu_circ_0001083的MC38细胞后,其2C蛋白表达增加,病毒滴度明显升高。上述结果表明,宿主环状RNA mmu_circ_0001083的表达上调与HY12病毒感染复制呈显著正相关,即mmu_circ_0001083对HY12的复制起到了正向调控的作用,该结果为今后深入研究环状RNA对HY12病毒复制的调控机制打下基础。

关键词：环状RNA mmu_circ_0001083 HY12病毒病毒复制

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致羔羊脑膜炎型大肠杆菌ompA基因缺失菌株的构建及其致病性

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中国兽医学报 2024年第10期44卷 2123-2129页

作者：胡卉琪崔续媛闫乃天郑学博张福慧胡俊英王新平吉林大学动物医学学院人兽共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

应用CRISPR/Cas9技术构建NMGCF-19ΔompA菌株,并应用小鼠模型确定ompA基因在NMGCF-19菌株感染小鼠中的作用及其机制。结果显示,与野生型菌株比较,ompA基因敲除菌株感染小鼠的海马体神经元细胞坏死明显降低,且不呈局灶性;同时,脑组织中... 详细信息

应用CRISPR/Cas9技术构建NMGCF-19ΔompA菌株,并应用小鼠模型确定ompA基因在NMGCF-19菌株感染小鼠中的作用及其机制。结果显示,与野生型菌株比较,ompA基因敲除菌株感染小鼠的海马体神经元细胞坏死明显降低,且不呈局灶性;同时,脑组织中菌体检出量明显减少,紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA水平和蛋白表达水平均明显提高。结果表明,ompA基因敲除后NMGCF-19菌株其致病性降低,该毒力基因ompA在NMGCF-19侵袭小鼠血脑屏障的过程中发挥重要作用。

关键词： ompA基因大肠杆菌NMGCF-19 脑膜炎基因敲除小鼠

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双功能细胞凋亡调控因子（Bfar）与布鲁氏菌胞内寄生关系

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吉林农业大学学报 2023年

作者：刘益辛张凯邹德颖程梦妍韩成胡盼卢士英李岩松柳增善任洪林人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室人兽共患病研究教育部重点实验室人兽共患病研究所吉林大学动物医学学院辽宁省盘锦检验检测中心

宿主双功能细胞凋亡调控因子 (Bifunctional apoptosis regulatory factor，Bfar) 是一种双功能凋亡调控蛋白，能够通过外源性和内源性两种凋亡途径调节细胞凋亡水平。为探究Bfar在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中对布鲁氏菌胞内寄生的... 详细信息

宿主双功能细胞凋亡调控因子 (Bifunctional apoptosis regulatory factor，Bfar) 是一种双功能凋亡调控蛋白，能够通过外源性和内源性两种凋亡途径调节细胞凋亡水平。为探究Bfar在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中对布鲁氏菌胞内寄生的影响，首先用猪种布鲁氏菌S2（Brucella suis S2）侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过反转录-实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和蛋白免疫印迹技术(WB)检测在感染过程中Bfar转录水平和蛋白表达水平的变化。再分别构建Bfar过表达质粒或干扰质粒，提高或敲降宿主Bfar的胞内表达水平，通过菌落计数分析其差异表达对布鲁氏菌胞内寄生的影响。结果显示，布鲁氏菌感染巨噬细胞RAW264.7使胞内Bfar表达水平先上升再下降；布鲁氏菌感染RAW264.7的24 h内，过表达Bfar可提高布鲁氏菌胞内存活数量，而干扰Bfar表达使布鲁氏菌胞内存活数量下降。因此，宿主Bfar有助于布鲁氏菌的胞内寄生，其机制还有待于进一步研究。本实验通过分析宿主Bfar与猪种布鲁氏菌S2胞内寄生关系，研究响应布鲁氏菌感染的相关宿主反应因子，为进一步研究布鲁氏菌致病分子机制提供新思路。

关键词：布鲁氏菌胞内寄生双功能细胞凋亡调控因子

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鼻疽诊断与防治技术研究进展

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 644-650页

作者：胡晓祥熊秋婷刘倩刘明远方仁东西南大学动物医学院重庆北碚400715 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工... 详细信息

鼻疽(glanders)是一种由鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei,***)引起,主要存在于单蹄兽中的高度传染性人兽共患病,在人类中发生病例较少。自然感染的人类病例呈现地方流行性,主要发生在接触过受感染单蹄兽的人群中。此外,实验室工作人员中也有病例报告。世界动物卫生组织(WOAH)一直在努力进行全球性的鼻疽根除工作,通过全面监测、扑杀受感染动物和采取严格进口措施,该病在北美、澳大利亚和欧洲大部分地区已被根除。然而,随着牲畜的全球性流动,导致世界其他地区的病例增加,非洲、亚洲、中东和南美洲仍然存在区域性流行。近些年来在中东和亚洲暴发的鼻疽疫情为鼻疽重新传入无疫病地区创造了可能。因此,鼻疽被归类为一种重新出现的疾病,再次威胁人类和动物健康。

关键词：鼻疽诊断检测疫苗综合防治

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miR-142-5p通过影响紧密连接蛋白CLDN1的表达介导旋毛虫Ts-DNaseⅡ-7的肠屏障损伤作用

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中国兽医学报 2024年第7期44卷 1458-1465,1482页

作者：鄂玉婷王静孙奕成刘晓雷吾拉木江·阿布来孜王存洲丁静吉林大学动物医学学院人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 新疆维吾尔自治区喀什地区伽师县维吾尔医医院新疆伽师844300

旋毛虫进入宿主后,脱囊幼虫(肠道感染性第1期幼虫)进入宿主的小肠上皮细胞内继续发育,是旋毛虫感染并致病的关键步骤。本课题组前期研究结果显示,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白通过影响肠屏障,促进旋毛虫侵入肠上皮细胞,从而有利于其在... 详细信息

旋毛虫进入宿主后,脱囊幼虫(肠道感染性第1期幼虫)进入宿主的小肠上皮细胞内继续发育,是旋毛虫感染并致病的关键步骤。本课题组前期研究结果显示,旋毛虫成虫期Ts-DNaseⅡ-7蛋白通过影响肠屏障,促进旋毛虫侵入肠上皮细胞,从而有利于其在宿主体内寄生。并且,Ts-DNaseⅡ-7能够诱导多种miRNA出现差异化表达,有文献报道其中的miR-142-5p能够参与破坏肠屏障,因此本研究对Ts-DNaseⅡ-7诱导的miR-142-5p通过影响靶基因调控肠上皮细胞屏障功能的机制进行了探讨。试验分为Ts-DNaseⅡ-7处理组、miR-142-5p过表达组(OE)、miR-142-5p抑制组(Inhibition)、阴性对照组(NC)和空白对照组(Control),将miR-142-5p过表达及抑制表达的慢病毒载体,在MOI为80的条件下感染人结直肠腺癌细胞Caco-2,嘌呤霉素(8mg/L)筛选获得稳定抑制miR-142-5p表达及过表达miR-142-5p的细胞系,通过荧光显微镜评估细胞转染情况,采用RT-qPCR检测各组细胞miR-142-5p相对表达量;利用miRNA靶标预测数据库、RT-qPCR、Western blot和双荧光素酶试验对目的基因进行预测和验证;再应用HE染色、Western blot和单层跨膜电阻(TEER)与FITC通透性定量分析阐明miR-142-5p的作用机制。结果显示:Caco-2细胞经慢病毒感染后,经荧光显微镜及RT-qPCR验证转染成功。此外,双荧光素酶和Western blot结果显示CLDN1是miR-142-5p的直接靶基因(P<0.001),与Ts-DNaseⅡ-7单独处理组和OE+Ts-DNaseⅡ-7组相比,抑制miR-142-5p表达组可缓解Ts-DNaseⅡ-7引起的CLDN1mRNA和蛋白水平下调(分别为P<0.01和P<0.05),并逆转TEER下降和通透性升高(P<0.01)。结果表明,Ts-DNaseⅡ-7可上调miR-142-5p的表达,引起Caco-2单层细胞CLDN1表达减少和肠屏障功能受损,进而促进旋毛虫入侵肠上皮,实现进一步发育。

关键词：旋毛虫 miR-142-5p 肠道屏障通透性 CLDN1

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