目的:在野生东方田鼠实验动物化培育过程中,9~15月龄东方田鼠在自然条件下能发生与人类上皮性卵巢癌相似的单一上皮性卵巢癌,但其病理类型和生物学特性尚不清楚。本研究对东方田鼠自发性卵巢癌的生物学特性进行分析,以期将东方田鼠发展成为人类上皮性卵巢癌的动物模型。方法:选取3只9~15月龄自发卵巢癌的雌性东方田鼠作为卵巢癌组,并选取与患病动物同窝的健康东方田鼠作为对照组。解剖2组东方田鼠,观察其卵巢病理变化;采用生化分析方法测定东方田鼠血常规和血液生化指标,苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察东方田鼠卵巢癌组织的病理变化,免疫组织化学染色检测卵巢癌常见免疫组织化学标志的蛋白质表达,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测卵巢癌致病相关基因的转录水平。结果:东方田鼠自发性卵巢癌以双侧发病为主,肿瘤呈实性或囊实性;经HE染色及组织病理学分析,证实东方田鼠卵巢肿瘤来源为卵巢表面上皮组织。与对照组相比,卵巢癌组血红蛋白水平(P<0.01)、红细胞压积水平(P<0.05)、白蛋白水平(P<0.05)、血糖水平(P<0.01)显著下降,而淋巴细胞水平(P<0.05)、单核细胞百分比(P<0.05)、胆固醇水平(P<0.01)、孕酮水平(P<0.01)显著上升。卵巢癌组中卵巢癌致病相关基因ID3、CDC42、RHOA、RB1CC1、NF1、PIN1、MIB1、PDS5A、MCM7和MLH1表达均显著下调(均P<0.05),PAX8基因表达显著上调(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示WT1蛋白主要分布在整个细胞中,其在卵巢癌东方田鼠中表达水平相较于健康东方田鼠显著升高;肿瘤蛋白53(tumor protein 53,TP53)在健康东方田鼠和卵巢癌东方田鼠中均表达,分布在整个细胞中;而肝细胞核因子1β、孕激素受体蛋白在健康东方田鼠卵巢中高表达,在卵巢癌东方田鼠中表达水平显著降低,但均分布在细胞质中。结论:东方田鼠自发性卵巢癌为浆液性卵巢癌,与健康东方田鼠相比,卵巢组织形态、生物化学指标、卵巢癌致病相关基因及蛋白质表达均有显著差异,与人类浆液性卵巢癌生物学特性具有相似性,提示东方田鼠有望成为研究人类浆液性卵巢癌的理想动物模型。
目的:先天性低促性腺激素性性腺功能减退症(congenital hypogonadotropic hypogonadism,CHH)是一种罕见的先天性疾病,由于下丘脑促性腺激素释放激素的合成、分泌或信号转导缺陷引起先天性性腺发育不良。CHH以青春期发育延迟或缺乏、性激素及促性腺激素水平低下为主要表现,同时可能伴有其他临床表型。一部分CHH患者伴有嗅觉丧失或低下,被称为卡尔曼综合征(Kallmann syndrome,KS)。ANOS1基因是第一个被发现的CHH致病基因,位于X染色体上,其突变可导致X-连锁隐性遗传的CHH。本研究拟通过分析CHH患者中ANOS1的基因突变图谱以及临床表型和基因型的关系,为CHH的遗传学诊断奠定基础。方法:利用全外显子组测序(whole exome sequencing,WES)的方法筛选来自中国的165名男性CHH患者中ANOS1基因的罕见变异(rare sequencing variants,RSVs)。利用Polyphen2、Mutation tastaster、SIFT和CADD(Combined Annotation Dependent Depletion)4种常见的生物信息学工具预测编码区变异的功能,基于神经网络的剪接位点预测(Splice Site Prediction by Neural Network,NNSPLICE)软件对检测到的内含子区的RSVs进行注释,并利用美国医学遗传学和基因组学学院(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)遗传变异分类标准与指南判断ANOS1 RSVs是否具有致病性。初步建立中国人群CHH患者ANOS1的遗传突变谱,通过收集部分患者详细的临床资料,建立临床表型和基因型的相关性。结果:WES分析显示165名CHH患者中17例患者发生了ANOS1突变,突变频率为10.3%。在17名CHH患者中共检测到13个ANOS1 RSVs,包括5个无义突变(p.T76X、p.R191X、p.W257X、p.R262X和p.W589X),2个剪切位点突变(c.318+3A>C和c.1063-1G>C)和6个错义突变(p.N402S、p.N155D、p.P504L、p.C157R、p.Q635P及p.V560I)。在17名携带ANOS1 RSVs的患者中,很多同时伴有其他临床表型,其中最常见的为隐睾(10/17),其次是单侧肾脏发育不全(3/17),牙齿发育不全(3/17)和联带运动(3/17)。利用ACMG对上述检测到的ANOS1 RSVs进行分析,8个RSVs包括p.T76X、p.R191X、p.W257X、p.R262X、p.W589X、c.318+3A>C、c.1063-1G>C和p.C157R被预测为致病性或可能致病性的罕见突变,且携带这些突变的患者经过临床检查全部伴随其他临床表型;然而,在携带其他被预测为非致病性(不确定性或可能良性)的ANOS1 RSVs患者中,只有1例患者同时伴随其他临床表型,且这些患者中大部分同时伴有其他CHH致病基因的RSVs。结论:初步建立了中国人群CHH患者的ANOS1基因突变谱及基因型-表型相关性。携带致病性或可能致病性ANOS1 RSV的CHH患者往往伴随其他表型。单纯非致病性ANOS1 RSV可能不足以引起CHH,但它们可能与其他CHH致病基因突变一起发挥作用,导致该疾病的发生。
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