检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 8-13,21页

作者：王铭月刘欣奕张锦华章青王宏孔翔羽孙晓曼庞立丽李丹地段招军甘肃中医药大学公共卫生学院甘肃兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 大连医科大学附属第二医院辽宁大连116023

目的采用成簇的规律性间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)系统构建基因敲除细胞文库,以人结肠腺癌细胞Caco-2为研究对象构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系。方法包装重组Cas9慢病毒并感染Caco-2细胞,经杀稻瘟菌素及2次有限稀释法筛选Caco-2/Cas9单克隆细胞,并进行PCR和Western blot鉴定。用同时表达GFP和带有GFP向导RNA(single guide RNA,sgRNA)的慢病毒感染Caco-2/Cas9单克隆细胞,经嘌呤霉素筛选后,采用流式细胞术检测结果计算Caco-2细胞株的敲除效率,CCK-8法检测其细胞增殖活性。结果共获得5株Caco-2/Cas9单克隆细胞系,分别命名为Caco-2/Cas9-2、Caco-2/Cas9-3、Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5和Caco-2/Cas9-6,均可扩增出392 bp的Cas9基因条带,Cas9蛋白在细胞中稳定表达,敲除效率分别为91.27%、20.30%、24.13%、11.33%、12.27%、8.89%;Caco-2/Cas9-4、Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-63株单克隆细胞及未感染Caco-2细胞的增殖活性分别为2.07、1.75、1.46和1.40。Caco-2/Cas9-5、Caco-2/Cas9-6单克隆细胞与未感染Caco-2细胞比较,差异均无统计学意义(t分别为1.92和0.37,P均>0.05)。结论筛选出1株具有Cas9高酶切活性且细胞增殖活性较未感染Caco-2细胞无显著变化的Caco-2/Cas9单克隆细胞系,即Caco-2/Cas9-6单克隆细胞,为进一步构建高覆盖率敲除细胞文库奠定了基础,也为筛选病毒感染有关基因和其他特定功能基因提供了平台。

关键词： Cas9蛋白 Caco-2细胞基因敲除成簇的规律性间隔短回文重复序列

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肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测的研究进展

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新发传染病电子杂志 2024年第3期9卷 78-85页

作者：滑少为赵子今赵萌申辛欣冯志山河北北方学院河北张家口075000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 河北省人民医院检验科河北石家庄050051

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生... 详细信息

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生的碳青霉烯酶也不同,因此,碳青霉烯酶和耐药基因的早期检测对于控制耐药菌的传播起到重要作用。目前对于碳青霉烯酶的表型检测方法有改良Hodge实验、改良碳青霉烯灭活试验、Carba NP试验、免疫学技术、质谱技术,对于耐药基因型的检测方法有实时荧光定量PCR技术、微阵列技术、等温扩增技术、测序技术,这些方法在碳青霉烯酶的检测中均具有广泛应用。了解各检测技术的优缺点对于在实际应用中选择最适检测方法是非常重要的。本文主要对CRE碳青霉烯酶检测方法的研究进展和各方法的优缺点进行综述,为CRE的检测、预防以及院内感染控制提供数据支持。

关键词：碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌碳青霉烯酶诊断检测

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2019—2022年长春市某哨点医院儿童急性呼吸道感染病例中肠道病毒流行病学与基因特征分析

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中国病毒病杂志 2024年第2期14卷 145-151页

作者：张瑶田玉玲王慧玲王娜王利武谢智博李汶霞王雅各宋金华夏百成孙馨张燕纪龙山东第一医科大学(山东省医学科学院) 山东济南250117 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、国家卫生健康委医学病毒和病毒病重点实验室、传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 长春市儿童医院吉林长春130061

目的了解2019—2022年吉林省长春市某哨点医院儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infections,ARIs)病例中肠道病毒的流行情况及型别组成。方法采集2019年6月—2022年12月长春市儿童医院ARIs患儿的咽拭子样本,并收集患儿临床信息,用... 详细信息

目的了解2019—2022年吉林省长春市某哨点医院儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infections,ARIs)病例中肠道病毒的流行情况及型别组成。方法采集2019年6月—2022年12月长春市儿童医院ARIs患儿的咽拭子样本,并收集患儿临床信息,用描述性分析方法对肠道病毒感染病例的性别、年龄和季节分布情况进行分析。采用实时荧光反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription PCR,real-time qRT-PCR)技术检测肠道病毒,使用反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增肠道病毒VP1全长并进行系统进化分析。结果共采集2707例ARIs病例的咽拭子样本,检出肠道病毒阳性样本65例,检出率为2.40%。65份阳性样本中,32.31%(21/65)为混合感染,以肠道病毒和鼻病毒的双重混合感染最为常见,占肠道病毒阳性病例的10.77%(7/65)。2019—2022年春季、夏季、秋季和冬季肠道病毒的检出率分别为0、6.91%(40/579)、2.90%(21/725)和0.45%(4/894),不同季节肠道病毒检出率差异有统计学意义(χ^(2)=78.036,P<0.01),夏季检出率最高,秋季次之。本研究共鉴定出10种型别肠道病毒,分别为CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA10、CVA16、CVB3、E11、E18和EV-D68,其中CVA4检出最多,占比为44.82%(26/58),其余型别检出占比为1.72%~12.07%。结论2019—2022年长春市儿童ARIs病例中肠道病毒夏秋季检出率较高,肠道病毒感染以EV-A组为主。

关键词：急性呼吸道感染肠道病毒基因分型流行病学住院病例

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等温扩增技术检测人乳头瘤病毒的研究进展

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新发传染病电子杂志 2024年第6期9卷 68-73页

作者：李泓熠马学军帖彦清申辛欣河北北方学院研究生学院河北张家口075000 河北省人民医院检验科河北石家庄0500512 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206

宫颈癌是全球第四大女性癌症,几乎所有宫颈癌病例都与人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染有关,因此,HPV感染的早期发现对预防宫颈癌至关重要。WHO建议将HPV DNA检测作为主要筛查方法,等温扩增技术相较于变温扩增技术操作更简... 详细信息

宫颈癌是全球第四大女性癌症,几乎所有宫颈癌病例都与人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染有关,因此,HPV感染的早期发现对预防宫颈癌至关重要。WHO建议将HPV DNA检测作为主要筛查方法,等温扩增技术相较于变温扩增技术操作更简便,反应更高效,对实验条件,操作人员的要求更低,且经济成本更低,因此,更适用于HPV的检测。本文比对分析了用于HPV检测的等温扩增技术方法,常用的扩增产物判读方法及等温扩增技术与其他技术(如微流控芯片技术、CRISPR-Cas技术、智能手机检测和横向流动试纸条)结合检测的应用现状。对这些方法和技术进行优缺点分析,对其所适合的应用场景进行阐述,总结等温扩增技术存在的不足并对其发展前景进行展望。

关键词：等温扩增技术人乳头瘤病毒研究进展

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全球新型冠状病毒主要流行株变异变迁研究进展

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病毒学报 2025年第3期 889-900页

作者：杨馥荧冯晔囡陈操传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒与病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所中国疾病预防控制中心-中国科学院武汉病毒研究所新发传染病与生物安全联合研究中心中国科学院生物安全大科学研究中心

新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）（简称新冠病毒）全球大流行期间，通过不断积累有利于自身传播和免疫逃逸的突变而持续进化，导致其在全球范围内持续流行。世界卫生组织（World Health O... 详细信息

新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）（简称新冠病毒）全球大流行期间，通过不断积累有利于自身传播和免疫逃逸的突变而持续进化，导致其在全球范围内持续流行。世界卫生组织（World Health Organization, WHO）根据潜在的公共卫生风险程度，将新冠病毒变异株划分为关切变异株（Variantof concern,VOC）、关注变异株（Variant of interest, VOI）以及监测中的变异株（Variant under monitoring, VUM）三类。WHO在12月2日更新数据表明，当前重点监测的1种VOI和6种VUMs均源自BA.2.86进化分支。本文旨在对当前全球新冠病毒主要流行株的变异变迁最新研究进展进行综述，以期为未来新冠病毒变异株的监测预警工作提供数据支撑。

关键词：新型冠状病毒变异株刺突蛋白传播免疫逃逸

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中国两株罕见G9P-N1基因型轮状病毒重配株全基因组序列分析

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病毒学报 2025年第2期 462-472页

作者：唐晓苹范佳欣熊光萍魏宇航董梦洁车如意张无敌李楚楚沙比热木·托合塔木王宏章青孔翔羽庞立丽李丹地甘肃中医药大学公共卫生学院传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京市通州区卫生健康监督所江苏省疾病预防控制中心新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心病原检定所

为研究中国两株罕见G9P[4]-N1型RVA重配株的全基因组特征，采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法，对2022年收集的两份G9P[4]-N1型RVA标本进行全基因组扩增。应用MEGA11.0、Geneious Prime2023.2.1、Geneious9.0.2和DNASTAR等软件对RVA毒株进行全序列及遗传变异和进化分析，成功获取两株G9P[4]-N1型RVA的全基因组序列。结果显示两株RVA毒株的全基因组基因型均为G9-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N1-T2-E2-H2，两株RVA毒株所有节段核苷酸序列的相似性为：98.5%～99.5%。系统进化树显示VP7、VP4和NSP2基因分别为G9-Ⅲ、P[4]-Ⅴ、NSP2-N1。中国两株G9P[4]型RVA毒株为罕见的G9-P[4]-I2-R2-C2-M2-A2-N1-T2-E2-H2型，VP7、VP4、NSP2等关键基因节段与美国、俄罗斯、捷克等国外G9P[4]型RVA相似度高，且与本国G9型流行株亲缘关系相对较远，推测该罕见G9P[4]-N1型RVA重配株可能由境外输入。中国两株G9P[4]基因型JS97、XJ1109毒株与疫苗株RotaTeqTM（G1～G4、P[8]）和疫苗株RotarixTM、疫苗Rotavac原始株116E及LLR原始毒株核苷酸相似性为81.2%～91.3%，在关键中和抗原表位存在较多氨基酸位点差异，该差异是否会影响疫苗针对中国G9P[4]-N1基因型的保护效果需要进一步研究。

关键词：轮状病毒 G9P[4]基因型分子特征全基因组

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基孔肯雅病毒感染性克隆的构建与鉴定

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病毒学报 2025年第2期 428-436页

作者：林启晗郑张琦顾天梦李川杜珊珊朱武洋王世文李建东传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室国家卫生健康委员会生物安全重点实验室医学病毒和病毒病重点实验室中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室

基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）主要经伊蚊叮咬可在人间快速传播，引发大范围规模性疫情，此外，病毒适应性突变可对病毒传播特征造成显著影响。本研究通过分步克隆的方法，以我国本地传播病毒分离株（CHIKV-GD133）基因组... 详细信息

基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）主要经伊蚊叮咬可在人间快速传播，引发大范围规模性疫情，此外，病毒适应性突变可对病毒传播特征造成显著影响。本研究通过分步克隆的方法，以我国本地传播病毒分离株（CHIKV-GD133）基因组为模板，以商业化质粒pSMART为载体骨架，分4步利用TOP10F、和EPI300两种感受态细胞构建了分别在T7和CMV启动子驱动下的CHIKV的全长感染性克隆，分别转染表达有T7聚合酶的BHK细胞系（BHK/T7-9）和Vero细胞后，通过显微镜观察、RT-PCR、IFA和噬斑滴定等方法，检测细胞病变效应、结构蛋白的表达、子代病毒粒子基因组序列、病毒基因组复制水平等，确认所构建2种感染性克隆在转染相应细胞系后，能够有效复制、装配形成有感染性的病毒颗粒，且该病毒颗粒可在Vero细胞内传代增殖，其感染复制特征与亲本野毒株无显著性差异。本研究为进一步探索影响CHIKV感染、复制、传播和致病等关键机制研究奠定了基础。

关键词：基孔肯雅病毒感染性克隆反向遗传 T7 RNA聚合酶

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