检索结果-内蒙古大学图书馆

化学进展 2010年第9期22卷 1826-1835页

作者：邱媛章继川高长有浙江加州国际纳米技术研究院杭州310012 教育部高分子合成与功能构造重点实验室浙江大学高分子科学与工程学系杭州310027 浙江大学传染病诊治国家重点实验室杭州310003

在进行与肝脏疾病治疗的相关研究中,肝细胞的体外培养是一个关键的问题。由于微环境的变化,肝细胞容易在体外培养中逐渐丧失正常表型和肝特异性功能。研究发现,在适当条件下,肝细胞可以形成多细胞球形聚集体,肝细胞在球形聚集体中呈现... 详细信息

在进行与肝脏疾病治疗的相关研究中,肝细胞的体外培养是一个关键的问题。由于微环境的变化,肝细胞容易在体外培养中逐渐丧失正常表型和肝特异性功能。研究发现,在适当条件下,肝细胞可以形成多细胞球形聚集体,肝细胞在球形聚集体中呈现出与体内形态相仿的立体结构,细胞的表型和功能都得到了较好的维持。因此,如何调控肝细胞球形聚集体的形成以及尺寸形貌,得到具有高细胞密度、能在体外长时间保持高水平肝特异性功能的肝细胞球形聚集体是这方面研究的热点。本文对近年来肝细胞球形聚集体培养的研究成果进行了综述。首先介绍了肝细胞在体内的生长环境和肝脏的细胞结构,然后对培养肝细胞的生物材料各方面的性质,如材料的化学组成、表面电荷、亲疏水性质、表面形貌以及立体结构对肝细胞球形聚集体的影响进行了阐述;同时,也简要介绍了其他一些因素对肝细胞球形聚集体培养的影响;最后,对肝细胞球形聚集体培养的研究进展进行了总结和展望。

关键词：肝细胞球形聚集体体外培养生物材料

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中国1995-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析

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病毒学报 2007年第4期23卷 298-304页

作者：聂磊张庆霞韩宗玺邵昱昊荣骏弓刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

应用RT-PCR方法扩增到了我国1995-2004年20株IBV现地分离株的膜蛋白（Membrane,M）基因片段。序列测定表明,20株IBV分离株M基因开放阅读框由672-681bp组成,编码由223-226个氨基酸残基组成的多肽。与我国分离株LX4相比,M基因推导氨基酸... 详细信息

应用RT-PCR方法扩增到了我国1995-2004年20株IBV现地分离株的膜蛋白（Membrane,M）基因片段。序列测定表明,20株IBV分离株M基因开放阅读框由672-681bp组成,编码由223-226个氨基酸残基组成的多肽。与我国分离株LX4相比,M基因推导氨基酸序列的变异主要发生在2-17位、221-223位,其中4-6位存在氨基酸的插入和缺失,导致IBV毒株间M蛋白糖基化位点的差异。与GenBank中34株IBV参考毒株M蛋白基因推导氨基酸序列进行比较和分析,系统进化关系显示54株IBV毒株分属于5个进化群。我国IBV分离株M基因在进化关系上较为独立,主要分布在第Ⅱ群和第Ⅳ群,其中第Ⅱ群分离株和中国台湾毒株进化关系密切。此外,参考IBV国内分离株S1基因及N基因系统发育进化树的研究结果,并与M基因进行比较,表明我国IBV也存在着基因重组现象,尤其是疫苗毒和流行毒之间的重组。

关键词：传染性支气管炎病毒膜蛋白基因基因重组遗传变异

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HBV感染患者外周血T细胞PD-1基因表达水平的变化与意义

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浙江大学学报（医学版） 2007年第6期36卷 553-560页

作者：彭国平孙雯孙箴朱嘉珺李淑萍陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003 浙江大学医学院附属口腔医院浙江杭州310031

目的:分析HBV感染不同阶段患者外周血T淋巴细胞中PD-1(program death factor-1)分子的基因定量表达情况,探讨PD-1表达水平与血清学指标的相关性。方法:采集并筛选HLA-A2阳性的31例慢性乙型肝炎(CHB)患者、9例急性恢复期乙型肝炎患者(AHB... 详细信息

目的:分析HBV感染不同阶段患者外周血T淋巴细胞中PD-1(program death factor-1)分子的基因定量表达情况,探讨PD-1表达水平与血清学指标的相关性。方法:采集并筛选HLA-A2阳性的31例慢性乙型肝炎(CHB)患者、9例急性恢复期乙型肝炎患者(AHB)、15例乙肝相关性肝硬化患者(LC)和10例健康献血者的外周血,实时荧光定量PCR分析总T细胞内PD-1的mRNA水平,同时测定其配体PD-L1、PD-L2在外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标记物水平,荧光定量PCR检测血清HBV DNA载量,同时进行肝功能检测。结果:以各基因在正常对照组的定量表达水平为基础值,HBeAg阳性CHB组T细胞内PD-1和PBMCs内PD-L1的mRNA表达水平明显升高,与HBeAg阴性CHB组和AHB组比较均有显著性差异,但与LC组比较无统计学意义(P>0.05)。外周血PBMCs内PD-L2的mRNA水平在各实验组中无明显差异(P均>0.05)。在所有检测的CHB患者中,外周血T细胞内PD-1表达水平在高病毒载量组(HBV DNA≥107拷贝/ml)明显高于低病毒载量组(HBV DNA<107拷贝/ml)和正常对照组,且与血清HBV病毒载量成正相关(r=0.41,P<0.01),但与血清ALT水平无明显相关性。结论:外周血T细胞中PD-1基因水平在慢性乙型肝炎患者组,尤其是在HBeAg阳性组和高病毒载量组明显上调,提示T细胞高表达的PD-1可能通过与其配体PD-L1作用而抑制T细胞免疫应答,并导致病毒持续感染。

关键词：肝炎,乙型,慢性/免疫学 T淋巴细胞免疫抑制病毒载量

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中国结核分枝杆菌五种特异性抗原人B细胞表位多态性分析

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中华结核和呼吸杂志 2016年第5期39卷 372-377页

作者：徐永娟李马超陈双双肖诗琪刘海灿赵秀芹吴移谋万康林湖南省衡阳市南华大学病原生物学研究所 421000 传染病预防控制国家重点实验室传染病诊治协同创新中心中国疾病预防控制中心传染病预防控制所中国农业大学生物技术国家重点实验室微生物与免疫学系

目的研究我国结核分枝杆菌复合群（MTBC）抗原mpt83、mpt70、IpqH、pstS3、groES及其人B细胞表位的多态性。方法从中国疾病预防控制中心传染病所结核室菌株库随机选取我国的179株MTBC临床分离株，培养后提取DNA，基因扩增并测序，根据H... 详细信息

目的研究我国结核分枝杆菌复合群（MTBC）抗原mpt83、mpt70、IpqH、pstS3、groES及其人B细胞表位的多态性。方法从中国疾病预防控制中心传染病所结核室菌株库随机选取我国的179株MTBC临床分离株，培养后提取DNA，基因扩增并测序，根据H37Rv标准序列和免疫表位数据库（IEDB）的抗原表位信息，比较、分析各基因B细胞表位序列的变异情况，最后用MEGA6软件计算各基因的非同义突变率（dN）、同义突变率（ds）及其比值。结果在179株MTBC菌株中，mpt83基因有7个单核苷酸多态性（SNP）位点，该基因及其表位区、非表位区的dN／dS分别为0．88、0．34和0．14；mpt70基因有1个SNP位点，为非同义突变；IpqH基因及其B细胞表位区dN／dS均为0．38，非表位区dN、ds均为0；pstS3基因及B细胞非表位区的dN／dS分别为1．74和1．40；groES基因未发现突变位点。结论结核分枝杆菌mpt83、IpqH、pstS3的基因序列及B细胞表位具有较高的多态性，而mpt70和groE基因B细胞表位较保守。

关键词：分枝杆菌,结核表位,B淋巴细胞多态性,单核苷酸

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鸡马立克氏病病毒814株细菌人工染色体的构建

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生物工程学报 2008年第4期24卷 569-575页

作者：崔红玉王云峰石星明童光志兰德松何来仇华吉刘长军王玫中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

为构建全基因组鸡马立克氏病病毒814株感染性细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC),首先通过构建表达Eco-gpt(xanthine-guanine phosphoribosyl transferase,XGPRT,gpt)的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1-3 kb)和带有细菌人工染色体的基本功能基因序列的鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11,将重组病毒转移载体与鸡马立克氏病病毒细胞总DNA共转染鸡胚成纤维细胞,在选择培养基中经过8轮加压筛选,获得并纯化重组病毒;将重组病毒细胞总DNA电转化大肠杆菌,筛选共获得38个BAC分子克隆化病毒,提取BAC-DNA转染鸡胚成纤维细胞以拯救重组病毒。结果表明,MDV-BAC2 DNA再次启动病毒感染,拯救了重组鸡马立克氏病病毒。成功构建了鸡马立克氏病病毒814株基因组全长感染性细菌人工染色体,为方便利用现代RED/ET基因重组系统对病毒进行反向遗传操作提供了技术平台;同时为研究鸡马立克氏病病毒的基因功能和开发新型马立克氏病疫苗奠定了基础。

关键词：鸡马立克氏病病毒细菌人工染色体分子克隆化病毒感染性分子克隆

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4株鸡马立克氏病病毒国内分离株Meq基因的克隆与序列分析

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病毒学报 2008年第2期24卷 117-125页

作者：施维松刘长军张艳萍秦运安张晓巍李晶梅陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

根据鸡马立克氏病病毒（MDV）GA株Meq基因序列，设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物，利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段，进行克隆测序，对4株MDV分离毒... 详细信息

根据鸡马立克氏病病毒（MDV）GA株Meq基因序列，设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物，利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段，进行克隆测序，对4株MDV分离毒株Meq基因与国内传统毒株Meq基因及GenBank上收录的国内外9株毒株Meq基因序列进行比较分析。序列比较显示，不同的MDV株的Meq基因序列相对比较保守，它们相互间氨基酸序列的同源性在96．5％～99．7％之间。4株MDV分离毒株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变；3株分离毒株Meq基因上相同位置均存在两个定点突变，这两处点突变是国内近几年分离株所特有的，国外已发表的MDV毒株Meq序列中不存在这种变化。分离株Meq基因的这些突变和毒株毒力的关系具有一定的规律性，但是这些规律性还有待进一步研究。

关键词：马立克氏病病毒 Meq基因序列比较定点突变

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不同启动子在昆虫杆状病毒表达系统中的活性分析

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生物工程学报 2008年第4期24卷 598-603页

作者：王煜高辉陈川赵和平李淼孙元仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性,利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,wssv)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子P_(PH),构建了含有不同... 详细信息

为了比较不同启动子在杆状病毒/昆虫细胞中的活性,利用对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,wssv)的ie1启动子及其截短的mie1启动子、杆状病毒ETL启动子及其加长的mETL启动子以及杆状病毒多角体启动子P_(PH),构建了含有不同启动子控制下的EGFP报告基因的重组杆状病毒,分别感染Sf9昆虫细胞,利用流式细胞术检测报告基因的表达水平。结果表明,WSSV的ie1启动子和杆状病毒的mETL启动子在昆虫细胞sf9细胞中都具有较强而旱的启动子活性,能够控制报告基因早期高效表达,而P_(PH)在感染后期才表现较强活性。并且研究中发现,杆状病毒同源重复区(hr1)可以增强ETL启动子的活性。

关键词：重组杆状病毒启动子活性流式细胞术

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miR-122对乙型肝炎病毒抗原表达的影响

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浙江大学学报（医学版） 2011年第6期40卷 593-597页

作者：朱蕾陈智陈建忠王静胡中荣陈离伟刘荣华胡敏君朱海红浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003 浙江大学免疫研究所浙江杭州310058

目的:探讨miR-122对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg表达的影响。方法:设计合成2条miR-122的反义寡核苷酸(anti-miR-122,LNA-antimiR-122)、hsa-miR-122以及阴性对照anti-GFP,脂质体介导转染HepG2.2.15细胞。取细胞转染24 h、48 h后的培养液,时间分辨荧光免疫法检测anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组、hsa-miR-122组以及anti-GFP组HBsAg和HBeAg的表达,定量PCR检测各组HBV DNA的表达。转染48 h后,提取细胞内总RNA,Taqman技术实时荧光定量PCR检测各组miR-122的表达。结果:①转染48 h后anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组miR-122表达明显受抑制,低于阴性对照组(P<0.001)。hsa-miR-122组miR-122水平较阴性对照组升高(P<0.001)。②hsa-miR-122组HBsAg、HBeAg表达均低于阴性对照组(P<0.001);anti-miR-122组、LNA-antimiR-122组HBsAg、HBeAg表达均高于阴性对照组(P<0.001)。③转染24 h与48 h后各组HBV DNA表达与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-122可调节乙型肝炎病毒抗原表达。

关键词：微RNAs/治疗应用肝炎e抗原,乙型/药物作用肝炎表面抗原,乙型/药物作用 miR-122 hsa-miR-122 HBsAg HBeAg LNA-antimiR-122 anti-miR-122

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几种鸡传染性支气管炎病毒活疫苗对中国流行毒株CK／CH／LDL／97I的保护作用评价

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病毒学报 2008年第2期24卷 111-116页

作者：张晓楠王钰李成仁刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不... 详细信息

选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株（JAAS、IBN、Jilin、J9和H120）和当地流行毒株（CK／CH／LDL／97I）作为研究对象，对其S1基因进行序列比对分析，结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不超过76．4％和78．7％。Sl基因的核苷酸系统发育树显示，疫苗株与流行毒株分属不同进化群，亲缘关系较远，属于不同的基因型。用这五株活疫苗进行针对强毒株CK／CH／LDL／97I株的免疫保护实验，可见临床发病率为30％～100％；攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡，采集器官，应用RT-PCR法检测病毒，气管样品病毒检出率为50％～90％，肾脏样品病毒检出率为10％～30％。由此可见：我国目前使用的主要活疫苗对异种IBV分离株的感染不能提供完全的保护作用。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 Sl基因疫苗交叉保护

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感染性疾病与程序性细胞死亡相关性研究新进展

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中华临床感染病杂志 2022年第5期15卷 333-344页

作者：马亦林传染病诊治国家重点实验室、国家感染性疾病临床医学研究中心、浙江大学医学院附属第一医院感染病科杭州310003

近年来,随着细胞死亡分子机制方面的研究取得进展,人们才逐渐发现有多种新型的细胞程序性死亡方式,包括非凋亡性(10种)及凋亡性(2种)二大类。它们广泛参与感染性疾病和肿瘤等疾病的发生、发展,是目前热门研究的前沿课题,为临床防治提供... 详细信息

近年来,随着细胞死亡分子机制方面的研究取得进展,人们才逐渐发现有多种新型的细胞程序性死亡方式,包括非凋亡性(10种)及凋亡性(2种)二大类。它们广泛参与感染性疾病和肿瘤等疾病的发生、发展,是目前热门研究的前沿课题,为临床防治提供了新思路。本文通过对程序性细胞死亡文献的梳理,围绕细胞坏死、凋亡、焦亡、铁死亡、中性粒细胞的炎性细胞死亡、铜死亡及细胞广泛凋亡等特征性表现,以及与若干感染性疾病相关性研究进展作一综述。

关键词：程序性细胞死亡细胞凋亡细胞焦亡铁死亡中性粒细胞炎症性死亡铜死亡细胞广泛凋亡免疫细胞膜Fcγ受体

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