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21世纪第五届全国人兽共患病学术研讨会

作者：栗冬梅宋秀平金圣浩刘起勇代解杰中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室感染性疾病诊治协同创新中心北京102206 河北省鼠疫防治所中国医学科学院医学生物学研究所

目的：五热日巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起战壕热、心内膜炎和杆菌性血管瘤等疾病.以往认为人类是唯一宿主,近年,国内外先后在食蟹猕猴和普通猕猴中发现这种巴尔通体.为进一步证实猕猴可作为五热日巴尔通体... 详细信息

目的：五热日巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起战壕热、心内膜炎和杆菌性血管瘤等疾病.以往认为人类是唯一宿主,近年,国内外先后在食蟹猕猴和普通猕猴中发现这种巴尔通体.为进一步证实猕猴可作为五热日巴尔通体的自然宿主,本研究调查了来自国内4个地区、550只猕猴五热日巴尔通体的感染状况,并对菌株遗传特征进行了分析. 方法：采集北京、四川、广东和云南实验用猕猴全血和血清样品各550份,用于巴尔通体菌株分离和血清IgG检测.应用4个管家基因扩增及测序方法进行菌株鉴定、系统发育分析及核苷酸多态性分析;应用随机引物扩增方法分析不同宿主来源菌株RAPD指纹图谱差异;应用间接免疫荧光法(IFA)检测血清中抗五热日巴尔通体IgG水平.比较不同地区、猴种及性别间五日热巴尔通体感染水平差异. 结果：接种培养550只猴血液样品,普通猕猴和食蟹猕猴分别为300只和250只,雌、雄分别为303只和297只,除四川外,其他地区猴血样培养均为阴性.250只四川猕猴中有8只分离培养到疑似菌株,感染率为3.2％,这8只宿主猴5只为雌性,3只为雄性.与五热日标准菌株比对的相似性为99％-100％,单基因及MLSA(gltA-ftsZ-groEL-rpoB)序列构建系统树均显示与五日热巴尔通体聚在同一分支(图1),鉴定菌株为五日热巴尔通体.普通猕猴血清阳性率为19.0％,感染水平明显高于食蟹猕猴(5.6％)(表1),不同地区、不同性别的猕猴感染水平无差异(p＞0.05).应用3个随机引物扩增出来的RAPD指纹图谱显示四川猕猴菌株带型完全相同,有8条可辨别扩增带,与五热日巴尔通体人源菌株***的带型基本一致,但在400bp和500bp处各缺失一条带;五热日巴尔通体与汉赛巴尔通体带型完全不同(图2).不同宿主来源菌株基因多态性分析显示五热日巴尔通体基因多样性特征明显,猴源菌株之间差异较小,与人源菌株差异较大. 结论：中国猕猴五热日巴尔通体感染水平较高,普通猕猴自然感染率及抗体水平明显高于食蟹猕猴,猴源菌株基因型与人源菌株有差异,进一步证实猕猴为五热日巴尔通体的自然宿主.

关键词：猕猴五热日巴尔通体感染状况遗传特征基因多样性

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中国猕猴五热日巴尔通体感染状况及遗传特征分析

中国猕猴五热日巴尔通体感染状况及遗传特征分析

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第六届媒介生物可持续控制国际论坛

目的五热日巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起战壕热、心内膜炎和杆菌性血管瘤等疾病.以往认为人类是唯一宿主,近年,国内外先后在食蟹猕猴和普通猕猴中发现这种巴尔通体.为进一步证实猕猴可作为五热日巴尔通体... 详细信息

目的五热日巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起战壕热、心内膜炎和杆菌性血管瘤等疾病.以往认为人类是唯一宿主,近年,国内外先后在食蟹猕猴和普通猕猴中发现这种巴尔通体.为进一步证实猕猴可作为五热日巴尔通体的自然宿主,本研究调查了来自国内4个地区、550只猕猴五热日巴尔通体的感染状况,并对菌株遗传特征进行了分析.方法采集北京、四川、广东和云南实验用猕猴全血和血清样品各550份,用于巴尔通体菌株分离和血清IgG检测.应用4个管家基因扩增及测序方法进行菌株鉴定、系统发育分析及核苷酸多态性分析;应用随机引物扩增方法分析不同宿主来源菌株RAPD指纹图谱差异;应用间接免疫荧光法(IFA)检测血清中抗五热日巴尔通体IgG水平.比较不同地区、猴种及性别间五日热巴尔通体感染水平差异.结果接种培养550只猴血液样品,普通猕猴和食蟹猕猴分别为300只和250只,雌、雄分别为303只和297只,除四川外,其他地区猴血样培养均为阴性.250只四川猕猴中有8只分离培养到疑似菌株,感染率为3.2％,这8只宿主猴5只为雌性,3只为雄性.与五热日标准菌株比对的相似性为99％-100％,单基因及MLSA(gltA-ftsZ-groEL-rpoB)序列构建系统树均显示与五日热巴尔通体聚在同一分支(图1),鉴定菌株为五日热巴尔通体.普通猕猴血清阳性率为19.0％,感染水平明显高于食蟹猕猴(5.6％)(表1),不同地区、不同性别的猕猴感染水平无差异(p＞0.05).应用3个随机引物扩增出来的RAPD指纹图谱显示四川猕猴菌株带型完全相同,有8条可辨别扩增带,与五热日巴尔通体人源菌株***的带型基本一致,但在400 bp和500 bp处各缺失一条带;五热日巴尔通体与汉赛巴尔通体带型完全不同(图2).不同宿主来源菌株基因多态性分析显示五热日巴尔通体基因多样性特征明显,猴源菌株之间差异较小,与人源菌株差异较大.结论中国猕猴五热日巴尔通体感染水平较高,普通猕猴自然感染率及抗体水平明显高于食蟹猕猴,猴源菌株基因型与人源菌株有差异,进一步证实猕猴为五热日巴尔通体的自然宿主.

关键词：巴尔通体猕猴系统发育分析战壕热

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中国26省(直辖市、自治区)2011-2014年5岁以下儿童腹泻病例轮状病毒流行特征分析

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疾病监测 2016年第6期31卷 463-470页

作者：耿启彬赖圣杰余建兴张子科杨婉琪李中杰吴建国杨维中武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室湖北武汉430072 中国疾病预防控制中心传染病预防控制处传染病监测预警中国疾病预防控制中心重点实验室北京102206 南安普顿大学地理环境系英国南安普顿SO171BJ 中国医学科学院病原生物学研究所梅里埃实验室北京100176 浙江大学医学院第一附属医院传染病诊断与治疗重点实验室浙江杭州310003 中国疾病预防控制中心北京102206

目的了解我国5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒的流行特征。方法在国内26省（直辖市、自治区）162家医院的门/急诊中开展腹泻监测,收集腹泻病例临床和流行病学资料,同时采集病例粪便标本,送92家网络实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA）... 详细信息

目的了解我国5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒的流行特征。方法在国内26省（直辖市、自治区）162家医院的门/急诊中开展腹泻监测,收集腹泻病例临床和流行病学资料,同时采集病例粪便标本,送92家网络实验室采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和巢式PCR等方法检测轮状病毒,并分析2011 2014年不同时间、不同地区5岁以下儿童腹泻患者中轮状病毒检出率以及不同基因型的变异变迁情况。结果在19 849例儿童腹泻病例中,22.9%的病例检出轮状病毒,其中,1~2岁和6月龄至1岁儿童检出率最高,分别为29.0%和26.1%。轮状病毒在水样便中检出率最高,为26.2%。轮状病毒在冬季检出率最高,为39.4%,夏季检出率最低,为9.9%。轮状病毒在我国南部和中部地区的检出率最高,分别为28.0%和27.0%。A组轮状病毒为常见的血清型,占95.1%,其中G9 P[8]、G1 P[8]和G3 P[8]最为常见,分别占39.5%、16.8%和9.9%。2011年以来,G9 P[8]逐渐取代G1 P[8]和G3 P[8]成为目前我国最主要的流行株。结论轮状病毒是我国5岁以下儿童腹泻的常见病原体,并且呈现明显的时间和空间流行特征,G9 P[8]为主要流行株。

关键词：轮状病毒腹泻病哨点监测基因分型

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猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白氨基酸的突变改变其繁殖性能和反应特性

猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白氨基酸的突变改变其繁殖性能和反应特...

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：黄立平 Hans Nauwynck 刘长明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道传染病创新团队比利时根特大学兽医学院

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征的病原,可以损害猪的免疫系统,继发其他多种疾病。PCV2 Cap蛋白是唯一的结构蛋白,与病毒的感染和免疫机密相关。硫酸肝素是PCV2的受体之一,其配体与Cap蛋白表... 详细信息

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征的病原,可以损害猪的免疫系统,继发其他多种疾病。PCV2 Cap蛋白是唯一的结构蛋白,与病毒的感染和免疫机密相关。硫酸肝素是PCV2的受体之一,其配体与Cap蛋白表面的碱性氨基酸有关。本研究通过突变PCV2 Cap蛋白表面的碱性氨基酸来探讨这些氨基酸对PCV2繁殖特性和反应表型的影响。

关键词： PCV2)Cap 氨基酸突变碱性氨基酸猪圆环病毒繁殖性能反应特性

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2004-2013年间中国登革热疫情时空变化分析

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地球信息科学学报 2015年第5期17卷 614-621页

作者：宁文艳鲁亮任红艳刘起勇中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室北京102206 感染性疾病诊治协同创新中心杭州310003 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所媒介生物控制室传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国科学院地理科学与资源研究所北京100101

通过对登革热疫情分布及时空变化的分析,发现该病的分布和流行规律,将有助于登革热防控工作的开展。本文以2004-2013年间传染病网络直报系统的全国地市级登革热逐月发病率资料为基础,就发病率、涉及地市以及与输入性病例之间的关系,进... 详细信息

通过对登革热疫情分布及时空变化的分析,发现该病的分布和流行规律,将有助于登革热防控工作的开展。本文以2004-2013年间传染病网络直报系统的全国地市级登革热逐月发病率资料为基础,就发病率、涉及地市以及与输入性病例之间的关系,进行空间统计学分析。结果表明:中国登革热发病率的对数值与国外输入性病例数呈显著相关(r=0.669,p<0.05);登革热输入性病例地市(有输入性病例的地市)数量与登革热本地病例地市(有登革热本地病例的地市)数量呈显著线性相关(r=0.939,p<0.05);疫情整体呈稳步递增的趋势,且发病率重心不稳定,从东南沿海(广东、福建)逐步向内陆和西南地区(云南边界)迁移,显示登革热可能流行范围正在扩大;中国登革热疫情呈现波动性非随机空间分布,其高聚集区主要分布在广东的珠江三角洲、韩江三角洲,以及西南边境的云南德宏傣族景颇族自治州和西双版纳傣族自治州。中国登革热疫情是由输入性病例引起的本地流行,因此,加强入境人员(特别是来自东南亚疫区)的健康教育,尤其在输入性病例输入高风险时间段(7-10月),对控制登革热疫情有重要意义。

关键词：中国登革热时空变化空间分析

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结核分枝杆菌T7噬菌体展示基因组DNA文库的构建与鉴定

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中国人兽共患病学报 2015年第12期31卷 1120-1123页

作者：曾焱华王丽刘海灿游晓拢邓湘赢万康林南华大学病原生物学研究所 “特殊病原体防控”湖南省重点实验室衡阳421001 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库。方法提取MTB的基因组DNA,用EcoR I和Hind III进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR I和Hind III黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200bp的片... 详细信息

目的利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库。方法提取MTB的基因组DNA,用EcoR I和Hind III进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR I和Hind III黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200bp的片段和多余接头。将DNA片段与T7 10-3b噬菌体连接,经包装蛋白进行包装后转入BLT5403宿主菌以构建T7噬菌体展示基因组DNA文库,并检测文库的滴度和随机性。结果成功提取到较高质量的MTB基因组DNA;构建的T7噬菌体展示基因组DNA文库的滴度约为6×106 pfu/cm3;用PCR检测结果表明,在随机挑取的16个噬菌斑中,其重组率为100%,且插入片段都介于250~2 000bp左右。结论成功构建了MTB T7噬菌体展示基因组DNA文库,为从基因组范围筛选MTB的优势抗原奠定了前期实验基础。

关键词：结核分枝杆菌基因组DNA T7噬菌体展示文库

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通过调节胆固醇代谢增强CD8+T细胞的抗肿瘤免疫反应

通过调节胆固醇代谢增强CD8+T细胞的抗肿瘤免疫反应

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上海市细胞生物学学会第九届一次会员代表大会暨第十三届CST细胞生物学青年论坛

作者：杨魏白轶冰熊缨张瑾陈硕凯郑晓君孟祥波李伦乙王静许晨光闫成松王丽娟 Catharine C.Y.Chan Ta-Yuan Chang 张倜周鹏辉宋保亮刘万里孙少聪刘小龙李伯良许琛琦中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海科学研究中心国家蛋白质中心分子生物学国家重点实验室中国上海 200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中科院分子细胞科学卓越中心分子生物学国家重点实验室中国上海 200031 中国科学院上海生命科学研究院营养科学研究所中国上海 200031 清华大学传染病协作创新中心生命科学学院蛋白质科学教育部重点实验室中国北京 100084 达特茅斯医学院生物化学系美国纽黑文汉诺威03755 第二军医大学长征医院风湿免疫科中国上海 200433 中山大学肿瘤防治中心肿瘤生物学国家重点实验室癌症医学协作创新中心中国广州 510060 武汉大学生命科学学院中国武汉 430072 德克萨斯大学MD安德森癌症中心免疫学系美国休斯顿77054 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中科院分子细胞科学卓越中心细胞生物学国家重点实验室中国上海 200031 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海科学研究中心国家蛋白质中心分子生物学国家重点实验室中国上海 200031 上海科技大学生命科学与技术学院中国上海 2012

CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,但在肿瘤微环境中其活性常常受到抑制.重新激活CD8+T细胞的杀伤功能在肿瘤免疫治疗的临床上非常受到重视.在这里,我们报导了一种通过调节胆固醇代谢增强小鼠CD8+T细胞抗肿瘤反应的新机制.通过基因... 详细信息

CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用,但在肿瘤微环境中其活性常常受到抑制.重新激活CD8+T细胞的杀伤功能在肿瘤免疫治疗的临床上非常受到重视.在这里,我们报导了一种通过调节胆固醇代谢增强小鼠CD8+T细胞抗肿瘤反应的新机制.通过基因敲除或药物抑制T细胞中的关键胆固醇酯化酶ACAT1,使得CD8+T细胞的效应功能和增殖得到增强,CD4+T细胞的效应功能和增殖不受影响.这是由于CD8+T细胞的质膜胆固醇水平上升,导致T细胞受体的成簇化和信号通路都得以增强,免疫突触的形成更高效.ACAT1敲除的CD8+T细胞在控制小鼠黑色素瘤的生长和转移方面比野生型CD8+T细胞效果更好.ACAT抑制剂——Avasimibe之前曾被用于治疗动脉粥样硬化进行过临床试验,有良好的人体安全性.Avasimibe治疗小鼠黑色素瘤显示出良好的抗肿瘤效果.Avasimibe和anti-PD-1抗体的联合给药治疗比单独给药治疗更好地控制肿瘤发展.因此,已知的动脉粥样硬化治疗靶点ACAT1,也是肿瘤免疫治疗的潜在靶点.

关键词： CD8+T细胞胆固醇代谢抗肿瘤免疫

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表面增强拉曼光谱技术在微生物鉴定中的应用进展

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生物工程学报 2015年第5期31卷 611-620页

作者：贾潇潇李晶秦天邓爱华刘文军中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国科学院大学北京100049 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国科学院微生物研究所微生物生理与代谢工程重点实验室北京100101

拉曼光谱自20世纪20年代被发现以来,经过近90年的发展,产生了许多分支。其中表面增强拉曼光谱是利用被测物质与粗糙金属表面的相互作用来提高拉曼光谱的信噪比,从而得到敏感度和精确度更高的图谱,可以将样品在不经过预处理的情况下对其... 详细信息

拉曼光谱自20世纪20年代被发现以来,经过近90年的发展,产生了许多分支。其中表面增强拉曼光谱是利用被测物质与粗糙金属表面的相互作用来提高拉曼光谱的信噪比,从而得到敏感度和精确度更高的图谱,可以将样品在不经过预处理的情况下对其进行快速检测。本文综述了表面增强拉曼光谱技术的原理、分类及鉴定特点,总结了该技术在食品、化学、医药、工业、病原等微生物学科的临床应用,进一步阐述了研究该技术的必要性和应用前景,旨在为从事该领域的科研人员提供参考依据。

关键词：表面增强拉曼光谱微生物应用

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传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选

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中国畜牧兽医 2015年第2期42卷 317-323页

作者：王念陈玉明张礼洲高立卢珍高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉王笑梅祁小乐中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白... 详细信息

VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDVVP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP4 酵母双杂交诱饵载体互作蛋白

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第11期37卷 871-874,898页

作者：周跃辉朱远茂任建乐严昊王雪枝马磊史鸿飞薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 详细信息

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白单克隆抗体表位鉴定

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