检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2007年第9期34卷 971-977页

作者：孙东波朗洪武时洪艳陈建飞崔晓辰王承宝佟有恩冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001 中国兽医药品监察所北京100081

以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1～2367bp)为靶基因,利用基于gⅢ表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化病毒制备的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白,对S1基... 详细信息

以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S基因的免疫优势区S1(1～2367bp)为靶基因,利用基于gⅢ表达外源多肽的fd丝状噬菌体展示系统,构建S1基因噬菌体展示肽库,以纯化病毒制备的兔抗PEDV多克隆血清为靶蛋白,对S1基因噬菌体展示肽库进行3轮生物淘选,结果获得3个高亲和力的序列,分别命名为S1P1(248～280位氨基酸)、S1P2(442～499位氨基酸)和S1P3(697～742位氨基酸).ELISA和蛋白质印迹结果显示,S1P1、S1P2和S1P3短肽都能被兔抗PEDV多克隆血清识别,其中S1P3反应性最强.为了进一步揭示S1P1、S1P2和S1P3短肽的抗原性,制备了3个短肽GST融合蛋白和它们串连后GST融合蛋白的单因子血清,间接免疫荧光试验(IFA)结果证实,抗S1P2-GST、S1P3-GST和S1P123-GST融合蛋白的单因子血清能够识别Vero细胞培养物中天然的PEDV.

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白抗原表位噬菌体展示

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气候变化和经济发展对肾综合征出血热发生的影响

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生物多样性 2020年第10期28卷 1229-1237页

作者：侯祥封托韩宁王京陈晓宁安晓雷许磊刘起勇常罡陕西省动物研究所陕西省秦岭珍稀濒危动物保育重点实验室西安710032 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是一种啮齿动物传播的自然疫源性疾病,危害严重,已成为全球重要的公共卫生问题。本研究采用数理统计模型及小波分析方法,对陕西省西安市鄠邑区1984–2016年HFRS的发生与鼠... 详细信息

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是一种啮齿动物传播的自然疫源性疾病,危害严重,已成为全球重要的公共卫生问题。本研究采用数理统计模型及小波分析方法,对陕西省西安市鄠邑区1984–2016年HFRS的发生与鼠类、气候和经济因素的关系进行分析,探讨气候和经济因素对HFRS发生的影响。小波分析结果表明,该地区的HFRS暴发史可能分为两个时期,推测每个时期具有不同的主要宿主,在2002年褐家鼠(Rattus norvegicus)可能取代黑线姬鼠(Apodemus agrarius)成为HFRS疫源地的主要宿主。广义可加模型模拟结果表明,HFRS的发生与1984–2001年黑线姬鼠密度间存在极显著非线性效应(F_(2.06,9.02)=102.415,P<0.01),两者间显现为正相关;与2002–2016年的褐家鼠密度间呈正相关(F_(1.67,9.02)=73.929,P<0.01);HFRS主要宿主的这种变化可能与当地气候变化和经济发展有关:HFRS的发生与年平均温度存在极显著的非线性效应(F_(2.93,9.02)=12.164,P<0.01),两者间呈负相关;同样,HFRS的发生与上一年的国内生产总值(GDP)也存在显著非线性效应(F_(1.70,9.02)=2.917,P<0.05),两者间也呈负相关。结构方程模型通过直接和间接的影响途径证明了这种转移机制,发现温度对HFRS发生有显著的直接负向影响以及通过褐家鼠的间接正向影响;GDP对HFRS发生有直接的负向影响。本研究表明HFRS的发生与气候变化和经济发展相关,两者均能影响HFRS的暴发,该结论有助于今后更好地对HFRS疾病进行预防和控制。

关键词：气候变化经济发展肾综合征出血热鼠类密度广义可加模型结构方程模型小波分析

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猪瘟甲病毒复制子载体DNA疫苗与重组腺病毒活载体疫苗联合免疫效果评价

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生物工程学报 2009年第5期25卷 679-685页

作者：孙元刘大飞王宇飞李娜李宏宇梁冰冰仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

本实验室先前分别将构建的猪瘟病毒E2基因重组腺病毒疫苗(rAdV-E2)和猪瘟甲病毒复制子载体DNA疫苗(pSFV1CS-E2)在猪体上进行了免疫效力评价,结果显示,rAdV-E2免疫组所有猪虽然在加强免疫后产生了比较高的猪瘟特异性中和抗体,但攻毒后个... 详细信息

本实验室先前分别将构建的猪瘟病毒E2基因重组腺病毒疫苗(rAdV-E2)和猪瘟甲病毒复制子载体DNA疫苗(pSFV1CS-E2)在猪体上进行了免疫效力评价,结果显示,rAdV-E2免疫组所有猪虽然在加强免疫后产生了比较高的猪瘟特异性中和抗体,但攻毒后个别猪表现短期体温升高和轻微病变;而pSFV1CS-E2免疫组猪只虽然在攻毒后得到了保护,但产生的抗体水平较低。为了增强猪瘟甲病毒复制子载体疫苗和猪瘟重组腺病毒活载体疫苗的免疫效果,本研究应用了复制子载体DNA疫苗初免和重组腺病毒疫苗加强免疫的初免-加强(Prime-boost)免疫策略,并在猪体上进行了评价。结果显示,所有免疫猪均产生了高水平的猪瘟特异性的中和抗体,用猪瘟强毒攻击后,pSFV1CS-E2初免组所有猪(n=5)均没有出现任何猪瘟的临床症状和病理变化,攻毒后在猪血液中也没有检测到猪瘟病毒RNA,而重组腺病毒初免组(n=5)有一头猪出现短期发热和病毒血症及轻微病理变化。这表明初免-加强免疫策略能显著提高重组疫苗的免疫效力。

关键词：猪瘟甲病毒复制子载体 DNA疫苗重组腺病毒联合免疫

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髓系细胞触发受体-1真核表达质粒的构建及鉴定

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浙江大学学报（医学版） 2010年第5期39卷 477-482页

作者：胡艳舒力琪陈齐兴姚航平浙江大学医学院附属第一医院麻醉科浙江杭州310003 杭州外国语学校浙江杭州310023 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310003

目的:构建髓系细胞触发受体-1(TREM-1)的真核表达质粒。方法:利用RT-PCR从人外周血总RNA中扩增TREM-1基因的全长cDNA,插入克隆载体pUCm-T,BamHI和Pst I,酶切后将目的片段插入真核表达载体pEGFP-C3,构建含有TREM-1的重组质粒pEGFP-TREM-1... 详细信息

目的:构建髓系细胞触发受体-1(TREM-1)的真核表达质粒。方法:利用RT-PCR从人外周血总RNA中扩增TREM-1基因的全长cDNA,插入克隆载体pUCm-T,BamHI和Pst I,酶切后将目的片段插入真核表达载体pEGFP-C3,构建含有TREM-1的重组质粒pEGFP-TREM-1,转染293细胞,用荧光显微镜观察、Western-blot鉴定蛋白表达。将pEGFP-TREM-1重组质粒转染THP-1细胞,100 ng/ml LPS刺激24 h后,半定量RT-PCR检测TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平。结果:经酶切和基因测序证实,克隆的基因片段为TREM-1基因;经转染的293细胞在荧光显微镜下可见荧光,并能表达TREM-1蛋白;重组TREM-1蛋白具有生物学活性,能增强TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平。结论:成功构建了能够表达TREM-1的真核表达质粒pEGFP-C3-TREM-1,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础。

关键词：受体,免疫/生物合成膜糖蛋白类/遗传学重组,遗传真核表达髓系细胞触发受体-1

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盐酸特拉唑嗪片在健康人体的生物等效性研究

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中国药学杂志 2019年第18期54卷 1504-1507页

作者：刘健吴丽花胡兴江吴国兰周惠丽申屠建中浙江大学医学院附属第一医院临床药学研究中心浙江省药物临床研究与评价技术重点实验室传染病诊治国家重点实验室杭州310003

目的用液相色谱串联质谱法测定健康男性受试者单次空腹口服受试及参比盐酸特拉唑嗪片后的血药浓度,计算受试制剂和参比制剂的药动学参数,评价两种制剂是否生物等效。方法采用随机、开放、双周期自身交叉试验设计,18例健康男性受试者随... 详细信息

目的用液相色谱串联质谱法测定健康男性受试者单次空腹口服受试及参比盐酸特拉唑嗪片后的血药浓度,计算受试制剂和参比制剂的药动学参数,评价两种制剂是否生物等效。方法采用随机、开放、双周期自身交叉试验设计,18例健康男性受试者随机分成2组,单剂量口服盐酸特拉唑嗪片受试制剂和参比制剂2 mg,用LC-MS/MS测定血浆中特拉唑嗪的浓度。药动学参数用DAS 2. 0软件处理获得。结果受试制剂和参比制剂tmax中位数(最小值,最大值)分别为1. 00 (0. 25,2. 00) h和0. 75 (0. 50,4. 00) h,ρmax(平均值±SD)分别为(49. 72±9. 86)和(61. 66±18. 37) ng·m L-1,AUC0-t(平均值±SD)分别为(516. 35±107. 33)和(616. 58±118. 48) ng·h·m L-1,AUC0-∞(平均值±SD)分别为(532. 62±112. 42)和(634. 99±122. 49)ng·h·m L-1,相对于参比制剂,受试制剂的相对生物利用度为(100. 17±13. 92)%。AUC0-t、ρmax90%置信区间分别为93. 8%~105. 1%和88. 3%~108. 4%。试验期间未发生严重不良事件。结论盐酸特拉唑嗪片受试制剂和参比制剂人体内具有生物等效性。

关键词：盐酸特拉唑嗪空腹生物等效性液相色谱串联质谱法药动学

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肝脏炎症及其防治专家共识

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中华肝脏病杂志 2014年第2期22卷 94-103页

作者：李兰娟王宇明浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室 310003 第三军医大学西南医院感染病研究所 400038

肝脏炎症不仅见于几乎所有原因所致肝病，而且常常贯穿病程始终。长期以来其有关防治研究特别是抗炎保肝方面进展不够理想，致使临床应用手段与方法有限，并存在诸多不同意见。在近一年的时间里，《肝脏炎症及其防治专家共识》（简称（... 详细信息

肝脏炎症不仅见于几乎所有原因所致肝病，而且常常贯穿病程始终。长期以来其有关防治研究特别是抗炎保肝方面进展不够理想，致使临床应用手段与方法有限，并存在诸多不同意见。在近一年的时间里，《肝脏炎症及其防治专家共识》（简称（《共识》）专家委员会收集相关文献、反复讨论和修改，加上广大临床医生的支持和参与，使得首部《共识》终于出台。其主要目的在于更新观念，突出实用性，将先进、科学的肝脏炎症防治文献与理念进行总结和归纳，并根据循证医学的原则，提出推荐意见，供临床医生参考，从而进一步规范临床医疗思维和防治方法。同时应当指出，万事开头难，这毕竟是国内外第一次尝试，达到目前水平已实属不易。希望藉此机会吸引更多的关注与讨论，并通过不断发展和更新，推动肝脏炎症及其防治研究，更好地服务于临床实践。

关键词：肝疾病炎症诊断治疗总结性报告【文献类型】

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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

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生物工程学报 2008年第10期24卷 1734-1739页

作者：孙元祁巧芬梁冰冰成丹李娜于墨洋王宇飞刘霓虹朱庆虎仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室哈尔滨150001

为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱... 详细信息

为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。

关键词：猪瘟病毒 E2基因重组腺病毒免疫原性家兔

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侵袭性超级真菌:耳假丝酵母菌感染现状与研究进展

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中华临床感染病杂志 2020年第6期13卷 460-466页

作者：马亦林浙江大学医学院附属第一医院感染病中心传染病诊治国家重点实验室国家感染性疾病临床医学研究中心杭州310003

耳假丝酵母菌(又名耳念珠菌)是2009年首次在日本发现的一种真菌病原新物种,因其感染具有多重耐药,深部组织侵袭性感染及病死率高的特征,故被称为"超级真菌"。耳假丝酵母菌可能存在基因组多样性,不同国家的分离株都有不同的克... 详细信息

耳假丝酵母菌(又名耳念珠菌)是2009年首次在日本发现的一种真菌病原新物种,因其感染具有多重耐药,深部组织侵袭性感染及病死率高的特征,故被称为"超级真菌"。耳假丝酵母菌可能存在基因组多样性,不同国家的分离株都有不同的克隆,因而需要进一步的研究来确定其转化为特定的侵袭性、毒性和耐药性的模式。中国大陆曾报道18例,发现首株(BJCA001)的亲缘关系与印度、巴基斯坦和法国等国家的分离株比较接近,与其他多个国家报道的多重耐药菌株不同。目前使用的传统微生物学鉴定方法难度高,常被误认为是其他酵母菌,特别是希木龙假丝酵母菌。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪及核糖体基因r DNA-ITS序列鉴定技术,可快速准确鉴定。耳假丝酵母菌感染主要有两种临床形式:定植与侵袭性深部感染。侵袭性深部感染则表现为多种形式,以血流感染(菌血症)最严重,病死率高(30%~72%)。本文就耳假丝酵母菌的特性、鉴定与分类、耐药性、流行与暴发等最新进展作一综述。

关键词：念珠菌属念珠菌病,侵袭性耳假丝酵母菌预防治疗

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猴空泡病毒40核酸序列检测法的优化研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 550-554页

作者：葛长勇李鸿钧谢忠平孙茂盛吴南屏浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州310003 中国医学科学院医学生物学研究所

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设... 详细信息

目的对通常使用的猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus40，SV40）核酸序列检测法进行优化，寻找敏感性高、特异性强、适用面广的SV40核酸序列检测引物。方法以21个SV40毒株完全基因组为基础数据，用Primer Premier5．00软件重新设计两对SV40 DNA检测引物，用Oligo 6．71软件和DNAMAN 6．0．40软件对引物参数进行分析，将分析结果与通常使用的检测引物进行比较。用不同稀释度SV40核酸序列作模板，比较4对引物检测的敏感性。分别用无菌水、Vero细胞DNA、SV40DNA作模板检测4对引物的特异性。结果对于21个SV40病毒株，优化引物对VP1和T的序列是保守的；对于接受号为J02400、NC_001669、AF316139和AF316141的4个病毒株，通常使用的引物对GCVP1和GCT的序列是保守的；用同一稀释度的SV40DNA作模板，引物对VP1和T的扩增效率明显高于引物对GCVP1和GCT；在特异性检测比较中，引物对VP1和T没有出现非特异性扩增条带，引物对GCVP1和GCT在100bp处出现非特异性扩增条带。结论优化的SV40核酸序列检测法具有敏感性高、特异性强、检测面广、引物及其PCR产物序列保守等特点。

关键词： SV40检测 PCR引物猴空泡病毒核酸序列检测法

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表达O型口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1的构建与鉴定

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微生物学报 2009年第5期49卷 677-682页

作者：任宪刚薛飞朱远茂童光志王延辉冯军科祖立闯李娇史鸿飞高欲燃中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的... 详细信息

【目的】为了构建表达口蹄疫病毒(O/China/99)VP1基因的牛疱疹病毒1型,将人工合成的口蹄疫病毒VP1基因插入到巨细胞病毒(CMV)启动子之下构建gE基因缺失转移载体。【方法】利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与亲本病毒BHV-1/gE-/LacZ+的基因组DNA共转染牛鼻甲细胞后收获增殖的病毒。通过筛选白色病毒蚀斑,得到重组病毒BHV-1/gE-/VP1。【结果】PCR检测结果表明VP1基因已经插入到了重组病毒BHV-1/gE-的基因组中,间接免疫荧光试验和Western blot证实了BHV-1/gE-/VP1中的VP1基因在感染的细胞中获得了表达。【结论】本研究成功地构建了表达口蹄疫病毒VP1基因的重组病毒BHV-1/gE-/VP1,为研制口蹄疫及其他重要牛传染病的BHV-1病毒载体疫苗奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 VP1基因牛疱疹病毒1型磷酸钙介导转染

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