检索结果-内蒙古大学图书馆

南京农业大学学报 2019年第5期42卷 802-810页

作者：任海波刘同坤袁敬平吴小婷王惠玉侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心

[目的]本文旨在分析不结球白菜BcICE1基因的表达模式并探索其在冷胁迫中的功能。[方法]以不结球白菜品种‘NHCC001’为材料,采用同源克隆的方法获得BcICE1基因的全长序列,并进行生物信息学分析;对‘NHCC001’进行4℃低温和PEG-6000模拟... 详细信息

[目的]本文旨在分析不结球白菜BcICE1基因的表达模式并探索其在冷胁迫中的功能。[方法]以不结球白菜品种‘NHCC001’为材料,采用同源克隆的方法获得BcICE1基因的全长序列,并进行生物信息学分析;对‘NHCC001’进行4℃低温和PEG-6000模拟干旱处理,检测BcICE1基因对胁迫的响应;构建过表达载体pEarlyGate-BcICE1,利用注射法将载体农杆菌菌液导入烟草细胞进行BcICE1基因的瞬时表达并检测;构建酵母诱饵载体pGBKT7-BcICE1,转化AH109验证其转录激活活性;将pEarlyGate-BcICE1农杆菌菌液利用蘸花法进行BcICE1基因的遗传转化,并用RT-qPCR和Westernblot对阳性苗进行鉴定。通过RT-qPCR对BcICE1过表达拟南芥中冷胁迫相关基因的表达水平进行分析。[结果]克隆获得不结球白菜BcICE1基因,其含有1338bp的开放阅读框,编码466个氨基酸,相对分子质量为47.40×10^3,等电点为5.42;氨基酸的多序列比对和系统进化树结果表明,BcICE1蛋白与欧洲油菜、荠菜和拟南芥ICE1蛋白同源关系较近。亚细胞定位表明BcICE1蛋白定位在细胞核中,具有转录激活性且对冷胁迫与干旱胁迫有响应。BcICE1过表达株系能增强植株的抗寒性,同时在低温处理后BcICE1过表达植株中冷胁迫相关基因AtCBF3和COR15A的表达量显著高于野生型植株。[结论]克隆并获得BcICE1过表达拟南芥植株,功能分析表明BcICE1基因能增强植株抗寒性。

关键词：不结球白菜 BcICE1基因抗寒亚细胞定位过表达植株

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不结球白菜开花相关基因BcGI的克隆、亚细胞定位及基因沉默功能验证

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 648-656页

作者：王惠玉任海波李林刘同坤程奕秋侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心

[目的]本文旨在揭示不结球白菜 GIGANTEA(GI)基因的功能,验证其与CONSTANS(CO)、FLOWERING LOCUS T(FT)基因之间的调控关系以及其在植物抽薹开花中的作用。[方法]以不结球白菜品种‘苏州青’为材料,提取RNA并反转录成cDNA,同源克隆 BcGI... 详细信息

[目的]本文旨在揭示不结球白菜 GIGANTEA(GI)基因的功能,验证其与CONSTANS(CO)、FLOWERING LOCUS T(FT)基因之间的调控关系以及其在植物抽薹开花中的作用。[方法]以不结球白菜品种‘苏州青’为材料,提取RNA并反转录成cDNA,同源克隆 BcGI 基因,Gateway构建表达载体pEarleyGate101- BcGI -YFP,利用农杆菌介导法将表达载体注射入本氏烟草中,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。Gateway构建沉默载体 BcGI -RNAi,利用农杆菌介导法将沉默载体导入拟南芥中,观察野生型和转基因植株抽薹期的表型变化。采用RT-qPCR技术,检测 GI、CO、FT 基因在转基因和野生型拟南芥植株抽薹期的基因表达量。[结果]通过同源克隆,得到 BcGI 基因,其含有1个3 516 bp的开放阅读框(ORF),编码1 171个氨基酸。亚细胞定位结果显示,BcGI定位于细胞核中。RT-qPCR结果表明, BcGI 基因在沉默转基因植株中的相对表达量比野生型植株低;同时当 GI基因表达受到抑制时,CO、FT 基因在沉默转基因植株中的相对表达量也比野生型明显降低,沉默转基因植株与野生型相比表现为开花延迟且抽薹期莲座叶数明显增多。[结论] BcGI定位于细胞核,参与正向调控下游 CO、FT 基因的表达,进而影响不结球白菜光周期开花途径。

关键词：不结球白菜 BcGI基因亚细胞定位开花途径基因沉默

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不结球白菜(Brassica campestris ***)主要性状及育种技术的分子生物学研究新进展

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园艺学报 2020年第9期47卷 1663-1677页

作者：侯喜林李英黄菲艺南京农业大学/作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心南京210095

从不结球白菜(Brassica campestris ***)外观性状、品质性状、抗性性状和育种相关性状及技术等方面对近10年来国内的研究工作进行了回顾,并提出了不结球白菜的分子生物学研究存在的问题,以期为中国不结球白菜分子生物学的研究、创新与... 详细信息

从不结球白菜(Brassica campestris ***)外观性状、品质性状、抗性性状和育种相关性状及技术等方面对近10年来国内的研究工作进行了回顾,并提出了不结球白菜的分子生物学研究存在的问题,以期为中国不结球白菜分子生物学的研究、创新与利用提供科学依据。

关键词：不结球白菜分子生物学性状

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大白菜LEA家族基因的鉴定及其部分成员在低温胁迫下的表达分析

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园艺学报 2022年第2期49卷 304-318页

作者：王光鹏刘同坤徐新凤李竹帛高瞻远侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心南京210095

基于大白菜全基因组数据对LEA家族基因进行全基因组鉴定与生物信息学分析,研究其序列特征、基因结构、启动子顺式作用元件、染色体定位、进化关系以及在不同组织中和低温胁迫下的表达模式。从大白菜基因组中总共鉴定出65个LEA家族基因成... 详细信息

基于大白菜全基因组数据对LEA家族基因进行全基因组鉴定与生物信息学分析,研究其序列特征、基因结构、启动子顺式作用元件、染色体定位、进化关系以及在不同组织中和低温胁迫下的表达模式。从大白菜基因组中总共鉴定出65个LEA家族基因成员,根据系统发育与保守基序分析,其可分为8个组;内含子较少,且不均匀地分布在10条染色体上,另有3个成员位于Scaffold上。启动子顺式作用元件分析显示,有29个(44.6%)成员拥有低温响应元件,除此之外,光响应元件和激素响应元件占比较高。共线性分析显示,大白菜BrLEA与拟南芥AtLEA同源性较高,并在进化中较为保守。大白菜不同组织转录组数据表明,BrLEA基因在大白菜不同组织中的表达存在组织特异性。对筛选出的13个家族成员进行低温胁迫表达分析表明,受低温胁迫表达量都有所升高。

关键词：大白菜 LEA基因家族低温胁迫生物信息学

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不结球白菜BcMLPK基因在自交不亲和中的功能研究

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西北植物学报 2019年第6期39卷 974-981页

作者：高璐张昌伟汪进侯喜林作物遗传与种质创新国家重点实验室农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心

该研究以不结球白菜(Brassica campestris *** Makino)自交不亲和系品种‘矮脚黄’为实验材料,利用VIGS技术将BcMLPK基因构建到pTY载体,进行定量分析,研究其在自交不亲和中的功能。结果表明:(1)BcMLPK基因序列长为1 443 bp,编码480个氨... 详细信息

该研究以不结球白菜(Brassica campestris *** Makino)自交不亲和系品种‘矮脚黄’为实验材料,利用VIGS技术将BcMLPK基因构建到pTY载体,进行定量分析,研究其在自交不亲和中的功能。结果表明:(1)BcMLPK基因序列长为1 443 bp,编码480个氨基酸,将BcMLPK蛋白氨基酸序列与其他物种的MLPK氨基酸比较表明,BcMLPK基因与其他物种中该基因具有高度保守的结构域。(2)成功构建pTY-BcMLPK载体,采用基因枪法侵染‘矮脚黄’,其新生的真叶有明显的花叶症状,选取发病的叶片及花蕾进行实时定量qRT-PCR,发现侵染的植株中BcMLPK基因表达量约为对照组的50%。(3)花期对植株进行自交授粉,实验组有明显的结荚现象,而对照组则出现雌蕊未能明显伸长,显示受精异常的现象;统计结果表明实验组的自交不亲和指数和结实率均高于对照组。研究表明,不结球白菜MLPK基因的沉默能够抑制‘矮脚黄’自交不亲和相关基因BcMLPK的转录水平表达。

关键词： VIGS BcMLPK 不结球白菜自交不亲和

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不结球白菜抗坏血酸相关基因BcMDHAR2功能验证

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南京农业大学学报 2021年第4期44卷 628-636页

作者：周颖李燕陶瑜王建军侯喜林李英南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心/园艺学院江苏南京210095

[目的]本文旨在验证单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)多基因家族中MDHAR2基因的功能,以探索其对不结球白菜抗坏血酸(AsA)含量的影响。[方法]以不结球白菜‘苏州青’cDNA为模板,扩增BcMDHAR2基因的ORF全长,利用生物信息学分析其氨基酸序列;... 详细信息

[目的]本文旨在验证单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)多基因家族中MDHAR2基因的功能,以探索其对不结球白菜抗坏血酸(AsA)含量的影响。[方法]以不结球白菜‘苏州青’cDNA为模板,扩增BcMDHAR2基因的ORF全长,利用生物信息学分析其氨基酸序列;通过亚细胞定位研究BcMDHAR2在细胞中的表达位置,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测非生物胁迫和激素处理下BcMDHAR2基因的表达量;通过病毒诱导的基因沉默(VIGS)验证该基因对抗坏血酸含量的影响。[结果]BcMDHAR2基因包含1个1308 bp的开放式阅读框(ORF),编码435个氨基酸。进化树分析表明,BcMDHAR2蛋白与芜菁的进化关系最近。亚细胞定位显示,BcMDHAR2定位于细胞核和细胞质、细胞膜上。RT-qPCR表明,低温、盐胁迫、重金属离子以及外源激素处理下,在一定时间内BcMDHAR2表达量上调,随后下调。该基因对光周期有一定的响应,随着光照时间变长,表达量上调,黑暗后,BcMDHAR2表达量下调。BcMDHAR2基因沉默后植株中AsA含量降低,AsA循环中相关基因的表达量发生了一定变化,而植株中SOD活性升高。[结论]BcMDHAR2表达量随外界条件变化而变化,响应不同的激素诱导和胁迫,在不结球白菜中该基因正调控AsA含量。

关键词：不结球白菜抗坏血酸 BcMDHAR2 非生物胁迫病毒诱导基因沉默

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不结球白菜耐热相关基因BcNAC036的克隆、亚细胞定位及功能分析

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南京农业大学学报 2022年第4期45卷 647-655页

作者：刘路平刘高峰蒋程侯喜林南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心/南京苏曼等离子工程研究院江苏南京210095

[目的]本文旨在研究不结球白菜基因BcNAC 036的亚细胞定位及高温胁迫下的表达分析,并探索其功能及调控机制。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为试验材料,提取叶片总RNA并且反转录成cDNA,同源克隆BcNAC 036的全长基因序列,运用在线软件工... 详细信息

[目的]本文旨在研究不结球白菜基因BcNAC 036的亚细胞定位及高温胁迫下的表达分析,并探索其功能及调控机制。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为试验材料,提取叶片总RNA并且反转录成cDNA,同源克隆BcNAC 036的全长基因序列,运用在线软件工具对其进行生物信息学分析。采用同源重组的方法构建过表达载体pCAMBIA1302-BcNAC 036-GFP,农杆菌介导法将构建的过表达载体注射入本氏烟草叶片背面,通过激光共聚焦显微镜观察其亚细胞表达部位。采用RT-qPCR技术检测高温处理下不结球白菜耐高温品种‘苏州青’和热敏感品种‘矮脚黄’以及转基因拟南芥体内BcNAC 036基因的表达量。对转基因拟南芥进行高温处理并统计其成活率。[结果]同源克隆的方法获得BcNAC 036基因,其开放阅读框(ORF)为840 bp,编码279个氨基酸,相对分子质量为32154.83,等电点是8.96。氨基酸序列比对以及同源进化树分析结果显示,BcNAC036蛋白与芜菁、甘蓝型油菜NAC036蛋白同源关系较近。亚细胞定位结果显示,BcNAC036的亚细胞定位表达在细胞核。RT-qPCR表明,BcNAC 036在耐高温和热敏感品种中表达差异较大且表达量均呈明显下降趋势。转基因拟南芥与野生型相比,其成活率较低。[结论]BcNAC036蛋白在细胞核表达,BcNAC 036基因与不结球白菜耐高温性呈负相关。

关键词：不结球白菜 BcNAC036基因亚细胞定位耐高温过表达植株

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不结球白菜遗传育种与分子生物学研究进展

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南京农业大学学报 2022年第5期45卷 864-873页

作者：侯喜林李英刘同坤南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心江苏南京210095 南京苏曼等离子工程研究院江苏南京210095

不结球白菜起源于中国,其种质资源丰富,生长周期短,产量高,且富含丰富的营养物质,是中国长江中下游广泛种植的大众蔬菜。本文从不结球白菜的6个变种、优异种质资源、育种技术的发展及应用等方面入手,论述了不结球白菜遗传育种技术与分... 详细信息

不结球白菜起源于中国,其种质资源丰富,生长周期短,产量高,且富含丰富的营养物质,是中国长江中下游广泛种植的大众蔬菜。本文从不结球白菜的6个变种、优异种质资源、育种技术的发展及应用等方面入手,论述了不结球白菜遗传育种技术与分子生物学研究进展及存在的问题。针对这些问题,提出在种质资源方面,继续搜集不结球白菜原生境边缘种质资源,创制更多育种材料;在育种技术方面,加强基于基因组的分子设计育种技术研究;在分子生物学方面,急需建立高效的不结球白菜遗传转化和基因编辑技术体系。为不结球白菜新品种培育及分子生物学研究提供理论依据。

关键词：不结球白菜种质资源分子生物学育种技术

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高产、抗病同源四倍体不结球白菜黄心乌新材料的创制

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核农学报 2022年第7期36卷 1285-1292页

作者：宋莹张咪张昌伟李英侯喜林王建军刘照坤刘同坤南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心/南京苏曼等离子工程研究院江苏南京210095 苏州市农业科学院江苏苏州215000

不结球白菜黄心乌是长江中下游流域特别是安徽地区的主栽品种之一。为获得品质优良的黄心乌新材料,本研究使用0.2%(w/v)的秋水仙素溶液点滴处理二倍体黄心乌幼苗的子叶生长点,通过形态学和细胞学的方法筛选到同源四倍体黄心乌植株,并对... 详细信息

不结球白菜黄心乌是长江中下游流域特别是安徽地区的主栽品种之一。为获得品质优良的黄心乌新材料,本研究使用0.2%(w/v)的秋水仙素溶液点滴处理二倍体黄心乌幼苗的子叶生长点,通过形态学和细胞学的方法筛选到同源四倍体黄心乌植株,并对二、四倍体黄心乌的农艺性状以及品质进行分析。形态学研究结果表明,四倍体植株的株型、叶片、花、种荚表现出巨大型;四倍体叶片的气孔变大,气孔密度变小;花粉粒体积比二倍体变大且呈现出棒状。细胞学分析结果发现,四倍体植株的根尖染色体数目是二倍体的2倍。流式细胞仪分析结果表明,四倍体植株的荧光强度为二倍体的2倍。营养品质方面,与二倍体相比,四倍体纤维素、有机酸含量显著上升,叶绿素、硝态氮含量显著下降,可溶性糖及可溶性蛋白含量无显著变化。此外,结合光响应曲线分析结果发现,强光条件下,四倍体对光强的适应能力更强。在抗病性检测中发现,四倍体的灰霉菌抗性明显优于二倍体。本研究获得了高产、抗病的同源四倍体不结球白菜黄心乌新材料,为不结球白菜育种工作提供了新的种质资源。

关键词：不结球白菜黄心乌诱导鉴定光合特性灰霉病

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不结球白菜花青苷合成转录因子基因BcEGL3的克隆及沉默分析

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南京农业大学学报 2021年第2期44卷 249-258页

作者：刘丹周倩孔祥雨胡春梅侯喜林王建军南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室/农业农村部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室/园艺作物种质创新与利用教育部工程研究中心江苏南京210095 南京农业大学连云港新农村发展研究院江苏连云港222002

[目的]本文旨在探究BcEGL3基因在不结球白菜紫色材料和其绿色突变体中的特性及其调控功能。[方法]以不结球白菜紫色自交系NJZX1-3和其绿色突变体NJZX1-0为材料,克隆BcEGL3基因;构建表达载体pRI101-BcEGL3,进行亚细胞定位;构建沉默载体pT... 详细信息

[目的]本文旨在探究BcEGL3基因在不结球白菜紫色材料和其绿色突变体中的特性及其调控功能。[方法]以不结球白菜紫色自交系NJZX1-3和其绿色突变体NJZX1-0为材料,克隆BcEGL3基因;构建表达载体pRI101-BcEGL3,进行亚细胞定位;构建沉默载体pTY-BcEGL3,分析材料中花青苷含量变化,以及BcEGL3、BcDFR基因在NJZX1-3、NJZX1-0、pTY-S和pTY-BcEGL3植株的基因表达量;对NJZX1-3进行遮光处理,分析遮光后花青苷的积累以及BcEGL3基因的转录水平变化。[结果]从NJZX1-3和NJZX1-0中克隆所得EGL3基因序列完全相同,序列长1821 bp,含1个1818 bp的开放阅读框(ORF),编码606个氨基酸,将其命名为BcEGL3。蛋白结构分析表明,EGL3蛋白属于bHLH-MYC-N超家族,其蛋白结构较为简单。进化树结果表明,BcEGL3蛋白与大白菜BraEGL3关系最近,同源性高达99.9%。亚细胞定位结果显示,BcEGL3蛋白定位于细胞核中。基因沉默结果表明,与NJZX1-3相比,转pTY-BcEGL3或pTY-S植株叶片紫色变浅,且对应花青苷含量降低。RT-qPCR结果表明,BcEGL3和BcDFR基因在转pTY-BcEGL3植株中的相对表达量低于转pTY-S植株和NJZX1-3植株,同时植株叶片颜色由紫色转为绿色,花青苷含量明显降低,但总叶绿素含量及类胡萝卜素含量无明显变化。遮光处理5 d后不结球白菜叶片中花青苷的含量比对照下降68%,且11 d时叶片中花青苷含量降幅最大。另外,遮光后BcEGL3基因相对表达量呈下降趋势,与对照相比14 d时下降幅度最大。[结论]BcEGL3蛋白定位于细胞核,BcEGL3基因沉默可以抑制叶片中花青苷的合成,且与BcDFR基因的表达密切相关,因此在不结球白菜花青苷的合成过程中BcEGL3基因起重要作用。

关键词：不结球白菜 BcEGL3基因亚细胞定位花青苷基因沉默

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