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中国中药杂志 2011年第16期36卷 2240-2245页

作者：明磊国陈克明葛宝丰马慧萍周建兰州军区兰州总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区兰州总医院药材科甘肃兰州730050

目的:对比研究淫羊藿苷(icariin,I)与染料木黄酮(genistein,G)对体外培养大鼠成骨细胞(rat calvarial osteo-blasts,ROB)增殖与分化成熟的影响及其药理活性的强弱。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的ME... 详细信息

目的:对比研究淫羊藿苷(icariin,I)与染料木黄酮(genistein,G)对体外培养大鼠成骨细胞(rat calvarial osteo-blasts,ROB)增殖与分化成熟的影响及其药理活性的强弱。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;I与G的作用终浓度为1×10-5 mol.L-1,增殖分析采用96孔板,MTT法分析;分化成熟分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3,6,9,12天分别测碱性磷酸酶(alkaline phospha-tase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色、茜素红染色和钙化结节计数;于成骨性诱导培养0,6,12,24,48,72 h提取总RNA,Real-time RT-PCR法检测Runx-2,bFGF,IGF-Ⅰ,Osterix(OSX)等成骨性相关因子的表达情况。结果:终浓度为1×10-5 mol.L-1的I与G均不促进ROB的增殖,均能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量;同时上调Runx-2,bFGF,IGF-Ⅰ和Osterix等成骨性相关因子的表达量;在成骨细胞水平上I促进ROB矿化成熟的药理学活性明显强于G的活性。结论:1×10-5 mol.L-1的I与G均能促进ROB矿化成熟,均有抗骨质疏松的作用,但在成骨细胞水平上I促进ROB矿化成熟的药理学活性显著强于G。

关键词：成骨细胞淫羊藿苷染料木黄酮骨钙素碱性磷酸酶 Runx-2 bFGF IGF-Ⅰ Osterix

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淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化

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中国药理学通报 2011年第10期27卷 1451-1457页

作者：翟远坤陈克明葛宝丰马慧萍明磊国程国政兰州军区总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区总医院药材科甘肃兰州730050

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预... 详细信息

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预,比较ICSⅡ组、ICI组(ICI 182.78)、ICSⅡ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量。提取TotalRNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Westernblot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量。结果 ICSⅡ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制。结论 ICSⅡ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICSⅡ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的。

关键词：淫羊藿次苷Ⅱ 骨髓间充质干细胞成骨性分化 I型胶原雌激素信号通路雌激素受体α ICI182.780

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蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

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中国药理学通报 2010年第8期26卷 1098-1103页

作者：明磊国葛宝丰陈克明马慧萍翟远坤兰州军区兰州总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区兰州总医院药材科甘肃兰州730050

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传... 详细信息

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。

关键词：骨髓基质干细胞分化增殖蛇床子素 bFGF IGF-1 Osterix Runx-2

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西地那非促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化

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中国药理学通报 2010年第11期26卷 1489-1494页

作者：翟远坤陈克明李志锋明磊国马慧萍兰州军区总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区总医院药材科甘肃兰州730050

目的研究西地那非对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow stromal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,贴壁筛选法培养rBMSCs,每3天换液1次,9d后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、... 详细信息

目的研究西地那非对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow stromal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,贴壁筛选法培养rBMSCs,每3天换液1次,9d后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1的西地那非进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养后9d的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较西地那非组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取Total RNA,Real-Time PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果西地那非剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进成骨性分化,最佳药物浓度为1×10-5mol·L-1。该浓度下的西地那非可明显增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨相关的转录因子Runx-2与Osterix mRNA的表达,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌。结论浓度为1×10-5mol·L-1的西地那非可明显促进rBMSCs的成骨性分化,提示西地那非在具备其他药理作用的同时,也有较强的抗骨质疏松活性,具备开发为抗骨质疏松药物的潜力。

关键词：西地那非骨髓间充质干细胞增殖成骨性分化碱性磷酸酶 Runx-2 Osterix Ⅰ型胶原

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8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究

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中国药理学通报 2011年第1期27卷 107-113页

作者：明磊国陈克明葛宝丰马慧萍翟远坤兰州军区总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区总医院药材科甘肃兰州730050

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkali... 详细信息

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。

关键词：骨髓基质干细胞分化 8-异戊烯基柑橘素碱性磷酸酶碱性成纤维细胞生长因子胰岛素样生长因子骨形态发生蛋白 Ⅰ型胶原 Osterix Runx-2

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淫羊藿苷与其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究

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中药材 2010年第12期33卷 1896-1900页

作者：翟远坤葛宝丰陈克明马慧萍明磊国李志锋兰州军区总医院骨研所甘肃兰州73050

目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的... 详细信息

目的:研究淫羊藿苷与其主要代谢产物——淫羊藿次苷Ⅱ对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bonemarrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响。方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以5×10-5mol/L的淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿苷组、淫羊藿次苷Ⅱ组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况。结果:淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ均可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,但淫羊藿次苷Ⅱ的活性明显高于淫羊藿苷。结论:淫羊藿次苷Ⅱ促进rBMSCs成骨性分化的活性高于淫羊藿苷,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。

关键词：淫羊藿次苷Ⅱ 淫羊藿苷骨髓间充质干细胞成骨性分化

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异补骨脂素对体外培养骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化的研究

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中国中药杂志 2011年第15期36卷 2124-2128页

作者：明磊国葛宝丰陈克明马慧萍翟远坤兰州军区兰州总医院骨研所甘肃兰州730050 兰州军区兰州总医院药材科甘肃兰州730050

目的:研究异补骨脂素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓贴壁培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3 d后首次换... 详细信息

目的:研究异补骨脂素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓贴壁培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3 d后首次换液,9 d后成骨性诱导培养并用药物干预。异补骨脂素在培养基中终浓度分别为1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7 mol.L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养第4,8,12,16天测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,第15天进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取总RNA,Real-time RT-PCR法检测bFGF,IGF-1,Osterix与Runx-2等成骨性相关的基因表达情况。结果:异补骨脂素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能促进其成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF,IGF-1,Osterix,Runx-2 mRNA表达水平。结论:终浓度为1×10-5 mol.L-1异补骨脂素能显著促进BMSCs的成骨性分化,证明异补骨脂素是中药补骨脂中抗骨质疏松的有效成分。

关键词：骨髓基质干细胞分化增殖异补骨脂素 bFGF IGF-1 Osterix Runx-2

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50Hz1.8mT电磁场对成骨细胞增殖与分化成熟影响的波形比较研究

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生物化学与生物物理进展 2011年第10期38卷 967-974页

作者：周建马慧萍陈克明葛宝丰程国政王嘉琪韦哲兰州军区兰州总医院骨科研究所兰州730050 兰州军区兰州总医院药材科兰州730050 兰州军区兰州总医院医学工程科兰州730050

在50 Hz 1.8 mT的4种不同波形电磁场(electromagnetic fields,EMFs)中筛选促进体外培养大鼠成骨细胞(rat osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的最佳波形.体外分离培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为5组,分别用频率50 Hz,EMFs强度为0 mT(... 详细信息

在50 Hz 1.8 mT的4种不同波形电磁场(electromagnetic fields,EMFs)中筛选促进体外培养大鼠成骨细胞(rat osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的最佳波形.体外分离培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为5组,分别用频率50 Hz,EMFs强度为0 mT(对照组)和1.8 mT的正弦波、三角波、方波和锯齿波处理ROB,30 min/(次.天).在磁场处理后4～8天细胞呈现特征样分布.方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.三角波和正弦波增加ALP活性,其中ALP染色、茜素红钙化结节染色和胶原Ⅰ(collagen-Ⅰ)免疫组织化学检测结果与ALP活性一致.在EMFs处理后的24 h、96 h和72 h后EMFs分别提高Runx-2、Opg和Igf基因表达水平,其中尤以正弦波和三角波作用最为显著.上述结果表明:50 Hz 1.8 mT方波促进成骨细胞增殖,正弦波抑制成骨细胞增殖.50 Hz 1.8 mT EMFs能促进体外培养成骨细胞分化成熟,其中尤以正弦波和三角波促进成骨细胞分化成熟作用最为显著.

关键词：成骨细胞正弦波三角波锯齿波方波

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关节软骨缺损修复的研究现状

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中华骨科杂志 1998年第5期18卷 312-314页

作者：刘景堂葛宝丰兰州军区总医院骨研所

关节软骨缺损修复的研究现状刘景堂葛宝丰作者单位：７３００５０兰州，兰州军区总医院骨研所滑膜关节的软骨病损后，软骨的自我修复能力有限，将直接影响关节功能。假关节置换适合于老年患者，对年轻患者，由于假关节存在许多近、远期... 详细信息

关节软骨缺损修复的研究现状刘景堂葛宝丰作者单位：７３００５０兰州，兰州军区总医院骨研所滑膜关节的软骨病损后，软骨的自我修复能力有限，将直接影响关节功能。假关节置换适合于老年患者，对年轻患者，由于假关节存在许多近、远期并发症，被列为禁忌证［１］。设法在...

关键词：假关节关节软骨缺损修复关节功能年轻患者滑膜局部应用软骨形成生物学细胞移植

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骨形态发生蛋白复合纤维蛋白载体修复骨缺损的实验研究

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中华骨科杂志 1998年第2期18卷 68-70,I001页

作者：陈克明李旭升刘兴炎葛宝丰王艳宁白孟海王勇兰州军区总医院骨研所

目的：探讨以纤维蛋白作为骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）的载体修复节段性骨缺损。材料和方法：于３６只新西兰白兔两侧桡骨干处造成１．５ｃｍ缺损，采用四种方法进行处理：Ａ组，植入２５ｍｇＢＭＰ与人纤维蛋白制成的复合物；Ｂ组，植入... 详细信息

目的：探讨以纤维蛋白作为骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）的载体修复节段性骨缺损。材料和方法：于３６只新西兰白兔两侧桡骨干处造成１．５ｃｍ缺损，采用四种方法进行处理：Ａ组，植入２５ｍｇＢＭＰ与人纤维蛋白制成的复合物；Ｂ组，植入单纯２５ｍｇＢＭＰ；Ｃ组，植入单纯纤维蛋白；Ｄ组，留作空白对照。术后不同时间进行放射学、组织学和放射性核素显像检查。结果：Ａ组骨缺损区在成骨活跃程度、骨再生量和再生髓腔结构等方面均显著优于Ｂ组，使骨缺损得到了较彻底的修复。Ｃ、Ｄ两组均不能产生骨性愈合。结论：纤维蛋白是较理想的ＢＭＰ载体材料，以二者的复合物修复骨缺损可达到满意效果。

关键词：纤维蛋白载体蛋白质类骨缺损修复术 BMP

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