检索结果-内蒙古大学图书馆

东北农业大学学报 2015年第10期 49-56页

作者：马得莹徐杨李妍妍徐倩倩张婷婷韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室，哈尔滨 150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素12（AvBD12）的生物学特性，试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因，其cDNA大小为198 bp，编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上，进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳... 详细信息

为探讨鸡β-防御素12（AvBD12）的生物学特性，试验采用RT-PCR方法从鸡脾脏组织中扩增到鸡AvBD12基因，其cDNA大小为198 bp，编码65个氨基酸。将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProex HTa上，进行原核表达。Tricine-SDS-PAGE电泳表明，重组鸡AvBD12融合蛋白分子质量约为14 ku。对该重组蛋白进行纯化与体外抗菌活性的测定，结果显示，纯化后的重组鸡AvBD12融合蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波氏杆菌有较高抗菌活性，对猪霍乱沙门氏菌和乳酸菌的抗菌活性较弱。高盐浓度对其抗菌活性有显著影响。该重组蛋白对鸡红细胞无显著溶血活性。荧光定量PCR结果表明，AvBD12基因在所测定的15个鸡组织器官中均有表达。

关键词：鸡β-防御素12 重组蛋白抗菌活性组织分布

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肠炎沙门氏菌tu-fA基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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中国预防兽医学报 2015年第5期37卷 361-365页

作者：司微于申业陈利苹刘思国李广兴东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA... 详细信息

为构建肠炎沙门氏菌(***)tu-fA基因缺失株及鉴定其生物学特性,本实验利用Red重组系统,以pKD3中的FRT-氯霉素抗性(cat^r)基因-FRT序列为模板,利用含有tu-fA基因两端序列的引物,经PCR扩增同源重组DNA片段(tu-fA5'-FRT-cat^r-FRT-tu-fA3'),将该DNA片段电转化于含有质粒pKD46的*** SM6株中进行同源重组,通过氯霉素抗性筛选tu-fA基因缺失的SM6株(SM6△tu-f A::cat),再通过导入质粒pCP20于SM6△tu-fA::cat中敲除cat r基因,从而构建了tu-fA基因缺失株SM6△tu-fA。生物学特性鉴定结果表明,基因缺失株具有良好的遗传稳定性;与亲本株相比,细菌形态未发生明显改变,但基因缺失株体外生长速率略低,利用碳源的能力有所增强;缺失株侵袭Caco-2细胞的能力与亲本株相比有所降低,表明tu-f A基因编码的延伸因子(EF-Tu)在调控细菌侵袭细胞的过程中起着一定的作用。本研究通过构建tu-fA基因缺失的***株,为进一步研究tu-fA基因编码的EF-Tu的功能奠定基础。

关键词： Red同源重组系统 tu-fA基因缺失株

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肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

肠炎沙门菌延伸因子EF-Tu缺失株对环境压力的应答变化

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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：曹俊刘松艳周薇司微王曼宇张童利刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院吉林农业大学动物科学技术学院东北农业大学动物医学学院

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编... 详细信息

肠炎沙门菌(Salmonella enterica)是一种无宿主特异性的病原菌,不但引起畜禽疾病,而且是一种重要的人类食源性致病菌,具有重要的公共卫生意义。肠炎沙门菌的热不稳定延伸因子EF-Tu(Elongation factorthermo unstable,EF-Tu)由tufA基因编码,是细菌细胞中含量很丰富的一种蛋白质,其主要生物功能是在蛋白质合成过程

关键词：缺失株肠炎沙门菌 EF-Tu 延伸因子

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp9与宿主CALM2基因编码钙调蛋白的相互作用研究

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 674-678页

作者：胡亮郭东伟李江南尹曼曼黄丽翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与分子流行病学团队黑龙江哈尔滨150001

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白Nsp9为该病毒RNA依赖的RNA聚合酶(Rd Rp),在病毒的转录复制过程中发挥关键性作用。为筛选与Nsp9相互作用的宿主蛋白,本研究采用酵母双杂交方法,以PRRSV Nsp9为诱饵蛋白,从猪肺泡巨噬细胞(PAM)酵母表达c DNA文库中筛选到CALM2(Calmodulin 2)基因。酵母回返验证试验和免疫共沉淀(Co-IP)试验证明CALM2基因编码的钙调蛋白(Ca M)与Nsp9特异地相互作用。激光共聚焦试验表明Ca M与Nsp9共定位于HEK293细胞胞浆内。本研究筛选到一个与Nsp9相互作用的新宿主蛋白Ca M,但该蛋白是否直接参与PRRSV的复制过程还有待进一步研究。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9 酵母双杂交肺泡巨噬细胞钙调蛋白

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hilA基因两端51bp序列对示踪标记性绿色荧光蛋白在禽肠炎沙门氏菌中倍增表达效率的鉴定

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 409-413页

作者：王高玲李涛史冰田司微王斌刘恒贵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 福建农林大学动物科技学院福建福州350000

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插... 详细信息

为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)作为示踪标记的重组禽肠炎沙门氏菌(***)并鉴定其遗传稳定性,本研究通过重叠延伸PCR构建5'端含有T7启动子和核糖体结合位点(RBS),3'端含有T7终止子序列的增强型GFP(e GFP)表达盒,并将e GFP表达盒插入p MD18-T载体中构建p MD-e GFP原核表达重组质粒,将其转化于***。结果显示e GFP能够在***中持续表达。进一步将*** hil A基因两端的51 bp序列分别添加到p MD-e GFP中e GFP表达盒的两端,构建p MD-He GFP重组质粒。荧光显微镜观察和流式细胞仪分析与p MD-e GFP相比,p MD-He GFP转化***后,其e GFP的荧光强度提高约30倍。通过在无抗生素选择压力下连续传20代次,重组***中e GFP仍然能够稳定表达。本研究结果为进一步研究***在动物体内的分布和定植规律等提供了一种具有荧光示踪标记的目标菌,并为其他细菌的同类研究提供了借鉴。

关键词：肠炎沙门氏菌绿色荧光蛋白荧光标记 hilA基因

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猪脑心肌炎病毒HB10株cDNA感染性克隆的构建

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中国预防兽医学报 2015年第9期37卷 665-668页

作者：于会彬黄丽张元峰李江南蔡雪辉崔尚金翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将... 详细信息

为建立猪脑心肌炎病毒(EMCV)HB10株cDNA感染性克隆,本研究利用反向遗传操作技术,采用RT-PCR一次性扩增EMCV-HB10株全长基因组(包括5'和3'UTR)序列,并直接克隆于低拷贝载体pOK12中,构建了EMCV感染性重组质粒pOK12-EMCV-HB10。将重组质粒体外转录后转染BHK-21细胞进行病毒拯救。结果显示,转染细胞36 h后,出现典型的细胞病变。拯救病毒rEMCV-HB10全基因组经测序鉴定显示,与亲本病毒开放阅读框比较,其仅在1D基因出现两个核苷酸突变:即A37G(R13K)和G187C(M63I),该突变可以作为区别亲本病毒的标志。间接免疫荧光和生长曲线试验结果显示,这两个突变并不影响VP1蛋白的表达及病毒拯救,并且拯救病毒与亲本病毒具有相似的生长特性。本研究构建了感染性EMCV-HB10 cDNA克隆,为深入研究EMCV的致病分子机理提供了有效的反向遗传操作平台。

关键词：猪脑心肌炎病毒 cDNA感染性克隆转录转染病毒拯救

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猪伪狂犬病病毒HLJ8株的分离与鉴定

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中国兽医科学 2015年第1期45卷 20-24页

作者：姜成刚赵款叶超王淑杰郭金潮常晓博刘永刚田志军安同庆蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立... 详细信息

2013年黑龙江省某猪场发生仔猪死亡并且伴有神经症状,采集死亡猪脑组织,经PCR检测、病毒电镜观察,确诊为伪狂犬病病毒(PRV)感染,遂将该毒株命名为HLJ8。进一步对病毒gE基因的序列分析表明,该毒株与2012年的中国分离株在同一个相对独立的分支中,氨基酸序列的同源性在94%~100%之间;与2011年之前分离的毒株的亲缘关系较远。小鼠毒力试验结果表明,高剂量(1×103 PFU/mL)的HLJ8株可以引起小鼠死亡以及皮肤瘙痒等典型的PRV感染症状,但其毒力略低于经典强毒株PRV SC株。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定致病性

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一株自然重组的鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及分析

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 418-421页

作者：徐倩倩王秋玲张婷婷韩宗玺梁殊林赵妍马得莹刘胜旺东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽病研究室黑龙江哈尔滨150001

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%... 详细信息

本研究从吉林省德惠市某父母代蛋鸡场发生疑似呼吸道病毒感染的鸡群中分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),命名为ck/CH/LJL/130908。该病毒基因型鉴定为Massachusetts型,与H120疫苗株和Mass 41强毒株S1基因的同源性分别为96.4%和94.4%,与H120的亲缘关系更近。但基因组遗传进化分析显示,ck/CH/LJL/130908与Ark病毒遗传关系较近。推测该病毒在起源和进化过程中可能发生了重组。应用Sim Plot软件分析证实了这种推测,表明ck/CH/LJL/130908来源于IBV 4/91、Ark和H120之间的重组。重组位点分别位于基因组ORF1ab的Nsp2、Nsp3、Nsp16和S2编码区。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒全基因序列重组遗传进化分析

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重组鸡β-防御素2蛋白的表达与生物学活性鉴定

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东北农业大学学报 2015年第8期46卷 56-60,108页

作者：马得莹张婷婷徐杨高梦莹王秋玲徐倩倩韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001

为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tri... 详细信息

为探讨鸡β-防御素2(Av BD2)的生物学特性,研究将Av BD2基因克隆到原核表达载体p Pro EX HTa的Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒p Pro EX-Av BD2,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,用IPTG对其菌液进行诱导表达。Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,His-Av BD2重组蛋白分子质量约12 ku,与预期一致。将该重组蛋白纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗肠炎沙门氏菌、四联球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌等抑菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响及其溶血活性。结果显示,Av BD2重组蛋白对所测定的4株细菌有显著抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性。该重组蛋白溶血活性极低。

关键词：鸡 AvBD2 重组蛋白抗菌活性

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结核分枝杆菌rv3295基因的原核表达及单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2015年第2期45卷 172-176页

作者：崔莹莹宋宁宁党光辉曹俊李华芳于申业刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋... 详细信息

以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增了rv3295基因;将其克隆至表达载体pET-22b中,构建了重组质粒pET-22b-Rv3295;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达出了Rv3295蛋白。通过亲和层析纯化,以该重组蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合筛选制备抗该重组蛋白的单克隆抗体;采用Western-blot验证单克隆抗体的特异性;通过亚型鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型。结果显示,Rv3295蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为25ku。获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F7,其亚型为IgG1/κ;Western-blot结果显示,该抗体具有较好的特异性。本研究制备的Rv3295蛋白的单克隆抗体对于研究Rv3295蛋白的功能及其与DNA之间的互作奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 rv3295基因原核表达单克隆抗体

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