检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 157-159页

作者：郭纪珂戈曼张泽力马建申之义王晓钧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定... 详细信息

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定分泌抗Rev的杂交瘤细胞株。MAb亚型鉴定为IgG2a/κ。Western blot与间接免疫荧光试验结果显示,获得的MAb与真核表达的Rev呈阳性反应。本研究首次制备了抗EIAV Rev的MAb,为Rev的功能研究奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒 Rev 单克隆抗体

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结核分枝杆菌酯酶Rv1400c原核表达及表达产物的酶活性分析

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吉林农业大学学报 2014年第6期36卷 701-706页

作者：陶荣珊李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林省中韩动物科学研究院长春130600 吉林东丰药业股份有限公司东丰136300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室哈尔滨150001

为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组... 详细信息

为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组质粒转化到BL21（ DE3）表达菌株中，增菌后用IPTG进行诱导表达再用亲和层吸树脂法进行纯化，利用不同底物、不同pH、不同温度对纯化后的Rv1400c酯酶进行活性分析。结果表明：成功构建出pET28b－Rv1400c重组质粒；SDS－PAGE和Western blot显示，Rv1400c以包涵体形式表达，蛋白分子质量为39 ku；在对8种底物的筛选中发现Rv1400c在C2～C14中具有活性，其中以在C2中活性最好；在以C12为底物、pH 8？0、37℃条件下酯酶活性最高。

关键词：结核分枝杆菌酯酶Rv1400c pET28b-Rv1400c重组质粒包涵体酯酶活性

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猪脑心肌炎病毒2B蛋白与RACK1蛋白相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 339-342页

作者：王岩黄丽崔尚金李江南杨春梅于会彬郭东伟张元峰夏雪山翁长江昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV)2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明... 详细信息

为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV)2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质中。为定位RACK1与2B蛋白相互作用区域,本研究构建了RACK1截短表达重组质粒,并将其与pCAGGS-Flag-2B共转染HEK293细胞,利用免疫共沉淀试验验证其相互作用区域。结果显示2B蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用,并且证明相互作用区域位于RACK1蛋白的N端。

关键词：猪脑心肌炎病毒酵母双杂交 2B蛋白 RACK1蛋白相互作用

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口蹄疫病毒3C蛋白酶切割宿主蛋白PCBP2

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 419-422页

作者：杨春梅黄丽王海伟于会彬李一经蔡雪辉于力唐丽杰翁长江东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著降低。为鉴定FMDV 3Cpro是否具有切割PCBP2蛋白的功能,本研究采用免疫共沉淀试验和激光共聚焦检测显示,FMDV 3Cpro和PCBP2在细胞内存在相互作用,并且共定位于细胞质中。进一步研究显示,FMDV 3Cpro能够切割PCBP2,而且具有剂量依赖性。此外,FMDV 3Cpro活性位点突变(H46Y)试验结果表明,FMDV 3Cpro的蛋白酶活性是切割蛋白PCBP2所必需的。FMDV 3Cpro切割PCBP2靶位点序列的鉴定及FMDV 3Cpro切割PCBP2的生物学意义有待深入研究。

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶 PCBP2 切割

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鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性及受体研究现状

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中国家禽 2014年第20期36卷 2-5页

作者：张礼洲祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白... 详细信息

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白、热休克蛋白90(c Hsp90)、整合素α4β1、Toll样受体(TLR)。本文对IBDV细胞嗜性及细胞受体相关研究进行了综述。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性受体

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以结核分枝杆菌为研究模型的自噬免疫学效应

以结核分枝杆菌为研究模型的自噬免疫学效应

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第三届免疫学博士生论坛

作者：曹俊陈利苹鄢秋龙刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究团队

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）已造成全球超过10亿人的无症状感染,每年新增数百万的活动病例,病死率达到25%0%。***最重要的一个特点是:***能够阻断巨噬细胞中具有降解功能吞噬溶酶体的成熟,从而在感染的细胞内持续... 详细信息

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,***）已造成全球超过10亿人的无症状感染,每年新增数百万的活动病例,病死率达到25%0%。***最重要的一个特点是:***能够阻断巨噬细胞中具有降解功能吞噬溶酶体的成熟,从而在感染的细胞内持续存活。***的这一能力通常被归纳为三种效应结果,即抑制吞噬体和溶酶体的融合、阻断吞噬溶酶体成熟或抑制吞噬溶酶体的生成。事实上,潜伏感染是***的首选,因而在上十亿的病人体内呈现无症状的感染状态。免疫系统的各个成员,尤其是IFN-γ、TNF-α和T细胞的有效协作,控制感染水平,绝大部分病人不会表现出临床症状。参与其中的T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞和非常规T细胞。***对很多杀菌作用具有抵抗力,但自噬能有效清除胞内寄生的***。自噬是一个保守的生物过程,胞浆内的物质被双层膜结构包裹,形成自噬体;随后与溶酶体融合,形成自噬溶酶体,其中包裹的物质便会被降解。***等胞内寄生病原体已进化出自己独特的免疫逃避能力,成为生物机体内的漏网之鱼,而自噬可以被看做是机体进化出的查漏补缺之措施。因而,以自噬抵抗***感染为模型,无论是揭示自噬这一生物学过程,还是制定出结核病的有效防治措施都有着重要意义。有实验数据表明,在捕获胞内的泛素、泛素化蛋白或其聚集体之后,自噬通过水解蛋白的反应产生泛素片段,在自噬体发展成熟为自噬溶酶体的过程中,泛素片段直接或间接被运送至细胞内从而增强对***的杀灭作用。脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）一直被认为是***的重要毒力因子,Shui等对不同分枝杆菌来源LAM刺激宿主细胞后细胞器蛋白表达的差异进行了分析,发现唯有高毒力菌株来源的LAM会抑制自噬泡的形成与累积,表明LAM干扰自噬是***致病力的一个重要因素。在自噬系统进化的晚期,为了更有效控制胞内病原的感染,细胞因子网络也获得了调控自噬的能力。细胞因子对自噬的调控体现在以下两个方面,Th1型细胞因子正调控自噬,Th2型细胞因子负调控自噬,这与Th1型细胞因子抵抗胞内病原感染的免疫保护效应,以及Th2型细胞因子在抵抗胞内菌感染方面的负面效应相一致。综上所述,在自噬抵抗胞内病原体——***感染的相关领域,已经取得的研究结果和未来可以进一步获得的信息,定会丰富我们对自噬作为天然免疫反应这一生理过程的认识,对严重威胁全球公共卫生事业的结核病的防治提供新的思路和途径。

关键词：结核分枝杆菌自噬结核病

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割天然免疫分子NEMO抑制I型干扰素的产生

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 169-173页

作者：张利杰李江南胡亮张泉王岩于会彬黄丽李曦蔡雪辉翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 长江大学生命科学学院湖北荆州434023 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)导致宿主蛋白NEMO(NF-κB essential modulator)被切割,产生一条约40 ku的蛋白条带。通过检测PRRSV编码蛋白酶的切割功能,进一步表明其NSP4是切割NEMO的关键蛋白酶。免疫共沉淀试验表明NSP4与NEMO具有特异性相互作用;激光共聚焦试验结果表明两者在细胞浆中共定位。通过双荧光素酶报告基因试验显示,NSP4过表达可以显著抑制仙台病毒(SeV)和NEMO诱导的IFNβ启动子的激活,导致IFNβ表达量显著下降(p<0.01)。本研究结果表明,PRRSV NSP4可以切割宿主蛋白NEMO,从而显著抑制IFNβ启动子的激活,从分子水平解释了PRRSV NSP4抑制IFNβ产生的机理。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4蛋白 NEMO蛋白 IFNβ

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高致病性PRRSV、经典PRRSV感染后PAM细胞差异表达蛋白的鉴定

高致病性PRRSV、经典PRRSV感染后PAM细胞差异表达蛋白的鉴定

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：安同庆杨永倩宫大庆叶超彭金美蔡雪辉田志军童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物病原监测与流行病学研究创新团队中国农业科学院上海兽医研究所

2006年以来,我国大面积流行高致病性猪繁殖与呼吸综合征(highly pathogenic PRRS,HP-PRRS),使我国养猪业遭受了巨大的损失。当前,HP-PRRS仍是危害养猪业的重要疾病。与以往的经典PRRSV相比,HP-PRRSV的致病力显著增强。致病的过程是病毒... 详细信息

2006年以来,我国大面积流行高致病性猪繁殖与呼吸综合征(highly pathogenic PRRS,HP-PRRS),使我国养猪业遭受了巨大的损失。当前,HP-PRRS仍是危害养猪业的重要疾病。与以往的经典PRRSV相比,HP-PRRSV的致病力显著增强。致病的过程是病毒与机体相互斗争的过程,病毒的致病能力主要取决于两个方面:一是病毒自身结构和毒力的变化,二是机体对于病毒的应答。机体某些被选择性表达或抑制的基因有可能在致病过程中发挥着重要的作用。

关键词： PRRSV 高致病性差异表达蛋白 PAM

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基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：田秋丰于申业衣菲吕雪莲倪宏波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-p... 详细信息

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究成功构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.

关键词：单核细胞增生李斯特茵调控基因温控表达荧光蛋白载体构建

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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

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辽宁省畜牧兽医学会2014年学会年会

作者：姜莉莉祁小乐高玉龙邓小芸柴洪亮张礼洲贠炳岭秦立廷王永强高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨 150040 辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州 12 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨 150040

本研究利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测.阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2... 详细信息

本研究利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测.阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102.克隆两个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析.结果显示,两个分离株gp90基因氨基酸同源性为99.5％;DBYR1101gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.7％、94.2％和98.2％;DBYR1102gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.2％、93.7％和97.7％;与我国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列同源性分别为94.7％和94.2％;与我国北方分离株氨基酸序列同源性为99.2％～100％.核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成一个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株同源性较高.该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础.

关键词：野鸭禽网状内皮组织增生病病毒分离菌株鉴定

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