检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2022年第8期44卷 823-830页

作者：王慧崔莹莹唐祎依吕明月党光辉崔子寅曹俊宋宁宁刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 潍坊医学院生命科学与技术学院山东潍坊261053

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv3616c启动子结合的影响因素,本研究利用PCR从MTB H37Ra株基因组DNA中扩增rv0827c基因后构建重组质粒pET-22b-rv0827c,经IPTG诱导表达和纯化后获得重组蛋白Rv0827c(rRv0827c),同时以MTB H37Ra株基因组为模板扩增23种基因的启动子。通过体外凝胶迁移试验(EMSA)和体内染色质免疫共沉淀试验(ChIP)对rRv0827c与这23种基因启动子的相互作用及其互作区域进行检测,结果显示,rRv0827c与23种启动子DNA均能结合,且rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA,并结合于其大沟区域;通过EMSA对影响rRv0827c和rv3616c启动子DNA结合的金属离子进行筛选显示,Ni^(2+)、Co^(2+)在体外抑制rRv0827c与rv3616c启动子的结合,而Cr^(3+)则促进二者的结合;表面等离子共振试验(SPR)也进一步验证rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA;利用MEME软件分析23种启动子DNA核苷酸序列的保守性,结果显示,4G和10G为rv3616c启动子DNA与rRv0827c互作的关键核苷酸位点。本研究首次揭示了rRv0827c与多基因启动子DNA结合的广泛性,且直接调控rv3616c的表达,进而可能影响MTB的毒力。这对完善Rv0827c的调控网络及深入解析Rv0827c的调控功能奠定了理论基础。

关键词：结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0827c rv3616c

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抗菌肽LL-37体外抗猪链球菌活性的研究

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中国预防兽医学报 2022年第4期44卷 423-427页

作者：金明洁张会会梁思宇张跃灵谢芳刘思国东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为探究抗菌肽LL-37对猪链球菌(SS)的体外抑菌作用,本研究通过化学合成法制备抗菌肽LL-37,测定其对猪链球菌2型(SS2)的最低抑菌浓度(MIC),结果显示LL-37对4株SS2临床分离株的MIC值为4μmol/L~8μmol/L,抑菌效果良好;绘制SS2在1μmol/L LL... 详细信息

为探究抗菌肽LL-37对猪链球菌(SS)的体外抑菌作用,本研究通过化学合成法制备抗菌肽LL-37,测定其对猪链球菌2型(SS2)的最低抑菌浓度(MIC),结果显示LL-37对4株SS2临床分离株的MIC值为4μmol/L~8μmol/L,抑菌效果良好;绘制SS2在1μmol/L LL-37条件下的生长曲线,结果显示1μmol/L LL-37即可对SS2的增殖有抑制作用;通过杀菌试验分析LL-37对SS2的杀菌活性,结果显示4μmol/L LL-37能完全杀灭SS2;借助激光共聚焦显微镜(CLSM)评价LL-37对SS2的杀伤作用,结果显示LL-37能够破坏和杀伤SS2的膜结构;使用透射电镜观察LL-37作用后SS2细胞形态的变化情况,结果显示LL-37能使SS2膜结构破坏、内容物流出;采用96孔板微量法检测LL-37对SS2生物被膜(BF)形成的抑制作用,结果显示LL-37能抑制SS2 BF的生成,抑制效果随剂量增加而增强。本研究明确了抗菌肽LL-37对SS2具有抑菌和杀菌作用,进一步利用激光共聚焦显微镜和透射电镜证实了抗菌肽LL-37通过作用于BF对SS2发挥抑菌和杀菌作用的方式,为抗链球菌感染和促进LL-37的临床应用提供了实验依据。

关键词： LL-37 猪链球菌抗菌

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B亚型禽偏肺病毒的分离鉴定及致病性研究

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畜牧兽医学报 2022年第10期53卷 3540-3549页

作者：于蒙蒙包媛玲王素艳辛子琪刘鹏冯笑艳孟令宅郭茹张艳萍刘长军祁小乐李俊平王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病创新团队哈尔滨150069 中国兽医药品监察所北京100081 扬州大学江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心扬州225009

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-... 详细信息

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒(aMPV)引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-PCR检测阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,然后利用G/F基因序列分析及间接免疫荧光试验(IFA)等鉴定病毒的亚型,最后将分离株感染SPF鸡进行致病性分析。结果显示:在采集的220份样品中,RT-PCR检测结果显示,有3份鼻甲骨样品在228bp左右出现特异性条带,将阳性病料接种Vero细胞盲传5代后,细胞出现变圆、聚集和融合等aMPV特征性细胞病变(CPE),表明成功分离到3株aMPV,将其分别命名为SD2001、SD2002和HLJ2101。G和F基因同源性分析显示,来自蛋鸡的SD2001、SD2002和来自肉鸡的HLJ2101分离株的G和F基因与其他B亚型aMPV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,核苷酸的相似性分别为93.4%~98.6%和95.6%~100.0%,氨基酸的相似性分别为88.7%~97.8%和97.6%~100.0%;而与A、C和D亚型的G和F基因同源性较低,核苷酸的相似性分别为27.1%~61.8%和66.8%~74.8%,氨基酸的相似性分别为16.1%~36.7%和72.5%~86.5%,这些结果表明,SD2001、SD2002和HLJ2101分离株属于B亚型aMPV。进一步利用B亚型aMPV特异性的阳性血清进行IFA检测,接种SD2001、SD2002和HLJ2101的Vero细胞均可以观察到特异性的绿色荧光信号,进一步证实3个分离株属于B亚型aMPV。选择SD2001感染3周龄SPF鸡进行了致病性研究,结果发现SPF鸡感染后3~6d出现精神萎靡、甩头和流鼻涕等症状,鼻甲骨、气管和肺也出现病理性损伤,其发病率为90%(18/20)。3株B亚型aMPV的分离不仅有助于明确我国部分养鸡场出现肿头综合征的发病原因,同时也证实B亚型aMPV流行毒株对鸡有明显的致病性,这些结果为我国家禽疫病的诊断和有效防控提供了重要理论依据。

关键词： B亚型禽偏肺病毒分离鉴定致病性

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提高表达分选酶A的猪链球菌突变株的构建及初步评价

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中国预防兽医学报 2021年第1期43卷 7-13页

作者：朱金鲁陈平黄萌萌刘冉卫东刘思国张跃灵中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为了提高猪链球菌(Streptococcus suis,SS)05ZYH33菌株中分选酶A(SrtA)的表达量,本研究利用同源重组技术,将强启动子Peno、SrtA基因与红霉素抗性基因融合并转化05ZYH33野生菌株(05ZYH33-WT),构建SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,并对05ZYH33-srtAe突变株和05ZYH33-WT进行生长特性分析和SrtA蛋白的western blot检测;进一步构建SS SrtA基因缺失株05ZYH33-srtA^(Δ)作为对照,通过检测05ZYH33-WT、05ZYH33-srtAe和05ZYH33-srtAΔ菌株表面蛋白SSU05_0630的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)的活性,初步评价SrtA的提高表达在SS表面蛋白锚定中的作用。Western blot结果显示,正确构建了SS SrtA提高表达的突变株05ZYH33-srtAe,且该菌株的生长速度和05ZYH33-WT基本相同,但SrtA的表达量却提高了2.4倍。菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性检测结果显示,05ZYH33-srtA^(Δ)菌株的NAG活性和本实验室前期构建的SSU05_0630基因缺失株ssu05_0630^(Δ)相同,检测不到SSU05_0630蛋白的NAG活性,表明SSU05_0630蛋白是SrtA的底物,通过SrtA锚定到SS的表面。05ZYH33-srtAe和05ZYH33-WT菌株表面蛋白SSU05_0630的NAG活性无明显差异,即SrtA表达量的提高并没有提高SSU05_0630蛋白在SS表面的锚定量。本研究首次构建了提高SS SrtA表达量的突变株,并对SrtA表达量的提高是否对SS表面蛋白锚定产生影响进行了初步探究,为进一步研究SrtA表达量的提高对SS其他表面蛋白锚定量的影响,以及优化SS表面蛋白展示系统奠定了基础。

关键词：猪链球菌分选酶A 提高表达强启动子胞壁锚定细菌表面展示

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鸡白痢沙门氏菌PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1178-1183页

作者：陆瑶丁仕豪曹俊刘思国于申业中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并... 详细信息

为建立鸡白痢沙门氏菌(***)的快速PCR检测方法,本研究通过比对*** ATCC 9120株和其他14株常见沙门氏菌及部分禽大肠杆菌的全基因组序列,在*** ATCC 9120株SEEP 011400~SEEP011405处缺失一段约10 kb碱基的区域,在此区域的侧翼序列设计并筛选了一对特异性引物,经反应条件的优化,建立了一种能够直接从鸡蛋样品中特异性检测***的PCR方法。并对该方法检测模拟鸡蛋样品的敏感性进行了评价,结果显示:该方法可以针对***特异性的扩增出576 bp的条带,而对其他常见致病性沙门氏菌血清型(31株)和非沙门氏菌(11株)均无扩增条带。该方法对***菌液检测的敏感性为10^(2)cfu/mL,利用本研究建立的方法直接检测污染***的鸡蛋样品时的最低检测限为10^(4)cfu/mL,且只需增菌8 h后,即可检测到10^(2)cfu/mL的***。利用该方法与其他PCR方法对模拟鸡蛋样品进行检测,对比检测结果,结果显示该方法敏感性为10^(4)cfu/mL,高于其他PCR方法。利用该方法对229份临床样品进行检测,结果显示阳性检出率为3.06%(7/229),与其他检测方法结果相符。本研究建立的***鉴别检测方法具有较高的特异性与敏感性,并且能够快速检测出鸡蛋中的***,为***的检测提供了一种快速、有效的方法。

关键词：鸡白痢沙门氏菌 PCR 快速检测

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B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫效果研究

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中国预防兽医学报 2022年第5期44卷 521-525页

作者：包媛玲宋守生于蒙蒙刘鹏任殿新孟令宅王素艳李欣翼张卓刘爱晶张艳萍刘长军祁小乐王笑梅高玉龙中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病创新团队黑龙江哈尔滨150069 内蒙古赤峰市敖汉旗农牧局内蒙古敖汉旗024300 国家禽类实验动物资源库黑龙江哈尔滨150069

为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采... 详细信息

为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采血,分离血清,采用ELISA检测及中和试验分别检测相应抗体,结果显示,初次免疫后6周,免疫组血清平均ELISA抗体效价达到1:73 522,平均中和抗体效价达到7.6log2。加强免疫后3周通过滴鼻的方式攻毒(aMPV/B LN16强毒滴鼻200μL,5 000 TCID50/只),观察攻毒后1 d~8 d蛋鸡的临床症状。结果显示,攻毒对照组蛋鸡发病率为92.3%,免疫组蛋鸡不发病;攻毒后1 d~8 d采集各组蛋鸡的鼻腔拭子,通过RT-qPCR方法检测病毒拷贝数,结果显示,免疫组蛋鸡鼻腔拭子中的病毒拷贝数较攻毒对照组下降约73.7%~95.0%;攻毒后9 d,采集各组蛋鸡的鼻甲、气管、肺脏制备病理切片后进行病理组织学观察,结果显示,攻毒对照组蛋鸡鼻甲、气管、肺脏出现不同程度的病理损伤,免疫组蛋鸡各组织器官未见明显病理变化。本研究结果首次表明,B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡具有良好的免疫保护效果。本研究为商品蛋鸡的B亚型禽偏肺病毒病的防控和免疫程序的制定提供了参考。

关键词： B亚型禽偏肺病毒灭活疫苗商品蛋鸡免疫保护

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结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 691-698页

作者：唐祎依崔莹莹吕明月王慧党光辉崔子寅刘思国宋宁宁中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队黑龙江哈尔滨150069 潍坊医学院生命科学与技术学院山东潍坊261053

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET... 详细信息

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET22b-rv0324重组表达载体,转化至*** BL21后经诱导表达获得蛋白Rv0324;同时以BCG(Tokyo-172)基因组为模板扩增获得rv3597c启动子(p/o rv3597c)。通过体外凝胶迁移实验(EMSA)和体内染色质免疫沉淀(Ch IP)实验对Rv0324与p/o rv3597c的相互作用进行检测,结果显示Rv0324可与p/o rv3597c结合,且Rv0324结合于p/o rv3597c的大沟;通过EMSA对影响Rv0324和p/o rv3597c结合的小分子进行筛选,结果显示二者的结合均能够被Trp、Fe^(3+)、Cu^(2+)、V_(B1)、V_(C)和贝达喹啉小分子抑制。在利用tr Rosetta软件对Rv0324蛋白结构分析的基础上,通过Rv0324和小分子的对接实验进一步分析它们间可能的互作模式,结果显示主要是位于Rv0324环区结构域的Asp203和Asp204氨基酸残基参与了与小分子的互作。综上所述,本研究首次证实MTB Rv0324通过直接调控rv3597c的表达,参与调控MTB的氧耗和代谢水平的变化,同时发现了影响Rv0324和rv3597c互作的小分子及其作用模式,为临床治疗的药物筛选提供了一定的参考依据。

关键词：结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324 rv3597c

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牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白的间接ELISA方法的建立

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中国预防兽医学报 2020年第3期42卷 252-257页

作者：陈瑞红林俊杨立新杨木娇朱远茂薛飞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150069

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白... 详细信息

为建立以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白p80为包被抗原的间接ELISA方法,本研究将重组质粒pET30a-p80转化至大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,将转化菌培养并诱导后,通过SDS-PAGE证实了p80蛋白以包涵体形式获得了表达,将纯化后的重组p80蛋白作为包被抗原,通过方阵滴定优化反应条件,建立了检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果显示,该方法与BVDV阳性血清反应呈阳性,而与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒等常见病原的阳性血清无交叉反应,特异性较强。敏感性试验结果显示本实验建立的间接ELISA方法在阳性血清11280倍稀释时检测结果仍呈阳性,而病毒中和试验结果显示该阳性血清稀释度在1512时检测结果就已为阴性,表明该方法的敏感性较高。重复性试验结果显示批内批间变异系数均小于10%,表明该方法重复性较好。采用本实验建立的方法与病毒中和试验同时检测90份牛血清,结果显示二者的符合率为95%。利用本研究建立的间接ELISA方法对188份采自国内两个不同地区的牛血清样品进行了检测,检出BVDV阳性血清162份,阳性血清检出率为86.2%。本研究建立的检测BVDV血清抗体的间接ELISA方法可用于国内BVDV的血清流行病学调查,为相关疫病的防控提供技术支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒重组p80蛋白间接ELISA

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中国西部和北部边境4省区牛支原体血清流行病学调查及分析

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 717-721页

作者：李媛闫磊刘桐辛九庆中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室/国家牛传染性胸膜肺炎指定检测实验室黑龙江哈尔滨150069 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130018

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计... 详细信息

为了解我国边境地区牛支原体的流行情况,本研究利用间接ELISA对2017年~2018年间收集自我国西部和北部4个省区的8 832份临床健康牛血清样品进行了牛支原体血清抗体的检测,并从地区、年份、季节、牛的品种及不同生长阶段牛对结果做了统计分析。结果显示,两年各地牛支原体血清抗体阳性率平均为8.37%(396/4 416,2017)、15.67%(760/4 416,2018),其中两年阳性率最高的省份均为云南(15.76%2017,36.32%2018),其次依次是内蒙古(9.15%2017,18.3%2018)、新疆(8.96%2017,12.22%2018)、西藏(1.99%2017,1.99%2018)。对检测数据按季节分析结果显示,春季牛支原体抗体阳性率最高,达18.31%(809/4 416),高于夏季的7.86%(347/4 416)。对检测数据从牛的品种因素分析显示,黄牛和奶牛血清抗体阳性率较高,分别为13.3%(183/1 375)和15.6%(159/1 021),显著高于水牛的3.85%(20/520)和牦牛的1.99%(22/1 104)(p<0.01)。从不同生长阶段牛的分析显示,与青年牛和成年牛相比较,犊牛牛支原体抗体的阳性率更高为19.90%(195/980)(p<0.01),犊牛对牛支原体更易感。本研究结果表明这几个地区均存在牛支原体抗体阳性牛,且2018年比2017年牛血清抗体阳性率大幅度增加(p<0.01)。本研究首次检测并分析了我国北部和西部边境地区牛支原体的血清流行病学状况,为明确牛支原体在我国的流行状况及制定有效防治措施提供了参考依据。

关键词：牛支原体抗体水平调查与分析 ELISA

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荧光定量PCR方法在鸡马立克氏病疫苗免疫监测中的应用分析

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中国预防兽医学报 2021年第7期43卷 727-733页

作者：兰兴鸽张艳萍于正浩王亚楠高玉龙祁小乐崔红玉高立李凯潘青王笑梅刘长军中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150069 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协调创新中心江苏扬州225009

鸡马立克氏病(MD)的防控主要依靠疫苗免疫,MD疫苗株在鸡体内的有效复制与最终的免疫效果直接相关,可通过这种相关性对MD疫苗进行免疫监测。为有效监测MD疫苗的免疫效果,本研究共采用两种血清1型MD疫苗免疫不同的鸡:(1)实验鸡分为两组:... 详细信息

鸡马立克氏病(MD)的防控主要依靠疫苗免疫,MD疫苗株在鸡体内的有效复制与最终的免疫效果直接相关,可通过这种相关性对MD疫苗进行免疫监测。为有效监测MD疫苗的免疫效果,本研究共采用两种血清1型MD疫苗免疫不同的鸡:(1)实验鸡分为两组:一组在1日龄时免疫血清1型MD疫苗814株,另一组为不免疫的对照组,选用双重荧光定量PCR方法分别对两组鸡免疫后7 d和14 d的脾脏和羽髓中的马立克氏病病毒(MDV)载量(log10 MDV拷贝数/106个细胞)进行检测;(2)商品鸡:选用上述双重荧光定量PCR方法分别对经血清1型MD疫苗CVI988/Rispens株免疫后7 d和14 d的商品蛋鸡脾脏和羽髓中的MDV载量进行检测。并针对荧光定量PCR的检测结果结合常规PCR检测和meq基因的序列比对分析各组鸡脾脏和羽髓样品是否被野毒感染;同时监测正常免疫商品鸡的产蛋率和死淘率等至8个月鸡龄。结果显示,实验鸡免疫后7 d,免疫组鸡脾脏和羽髓的MDV载量为3.39~4.69,对照组鸡相应样品的MDV载量为3.36~4.90;免疫后14 d,免疫组鸡MDV载量为3.77~4.86,对照组鸡相应样品的MDV载量为5.06~6.22,对照组显著高于免疫组(p<0.01)。PCR鉴定和meq基因序列分析证实,对照组鸡被MDV野毒感染,导致其体内MDV载量的显著上升。商品鸡免疫后7 d,脾脏和羽髓的MDV载量为3.75~4.59;免疫后14 d,MDV载量为3.71~4.92,并且在监测期内没有发生MD。以上结果表明,利用双重荧光定量PCR方法对血清1型MD疫苗进行免疫监测时,免疫后7 d~14 d鸡体内的病毒载量为3.39~4.86,载量过高则可能发生了免疫失败或者野毒感染。本研究结果表明双重荧光定量PCR方法可以用于MD疫苗免疫效果的监测,为临床鸡MD疫苗的免疫监测提供了参考数据。。

关键词：马立克氏病病毒载量双重荧光定量PCR 免疫监测

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