检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2011年第6期33卷 415-418页

作者：王帅王雪峰林跃智姜成刚吕晓玲赵立平周建华曲娟娟东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染... 详细信息

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照。免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染性贫血体征。通过RT-PCR方法检测病毒S2基因在感染马体内不同时期的基因序列,结果显示,免疫马体内EIAVDLV121 S2蛋白的突变主要发生在氨基酸第17位、22位、39位、41位、51位和55位。另外,#1马免疫后70 d以及#2马免疫后第14 d和第28 d检测疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121亲缘关系较近,而#1马免疫后第42 d、第112 d和第140 d的疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121的致病性亲本强毒株EIAVLN40亲缘关系最近。本研究结果有助于对EIAV及EIAV疫苗株在马体内感染进程的研究。

关键词：马传染性贫血病毒 S2基因变异分析

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副猪嗜血杆菌菌影的制备

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 11-14页

作者：胡明明常月红张艳禾司薇谢芳于申业刘慧芳刘思国沈楠王春来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学黑龙江哈尔滨150030

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂... 详细信息

为研制副猪嗜血杆菌(***)菌影疫苗,本实验通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将其连接到含有λPL/PR-cI857启动阻遏系统的pBV220载体中,使裂解基因E与λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建重组质粒pBV-E。并将含有E基因的裂解盒插入pMD18-T载体中,构建***打孔质粒(pMD-E)。采用电击穿孔法将其转入***β2155中,利用接合的方式将打孔质粒转入*** 5型菌株中。将含有打孔质粒的***在28℃培养至对数生长期,升温到42℃诱导E基因表达,制备***菌影。电镜观察菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。本实验为进一步研究菌影疫苗奠定了基础。

关键词：副猪嗜血杆菌菌影裂解基因

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马流感病毒NP单克隆抗体的制备及特性鉴定

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中国兽医科学 2011年第6期41卷 610-613页

作者：姬媛媛郭巍王征赵立平李红梅相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类... 详细信息

利用原核表达的马流感病毒(EIV)核蛋白(NP)为免疫原,经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经4次有限稀释法克隆和间接ELISA法筛选,获得了3株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株2G11、3E10和4A1,并对它们进行了亚类鉴定、间接ELISA检测和特性鉴定。结果显示,单抗2G11为IgG1亚型,3E10为IgG2a亚型,4A1为IgM亚型,轻链均为κ链。单抗2G11、3E10和4A1的细胞上清液及腹水效价分别为1∶640、1∶640、1∶320和1∶409 600、1∶204 800、0。这3株单抗均能特异性识别EIV NP重组蛋白,并且能够与天然EIV结合;获得的3株单抗与马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、马乙型脑炎病毒均不发生交叉反应。亲和力试验结果显示,单抗2G11和3E10与EIV的亲和力常数分别为4.39×106 M-1和2.20×106 M-1。

关键词：马流感病毒核蛋白单克隆抗体特性鉴定

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体结合抗原表位的鉴定

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 738-741页

作者：李亮林跃智那雷汤艳东吕晓玲周建华曲娟娟东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p2... 详细信息

为鉴定抗猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27单克隆抗体(MAb)p27-A5、p27-C7和p27-D2所识别的抗原表位,本研究通过间接ELISA法相加试验对这3株MAbs结合抗原表位进行初步分析,并利用部分重叠的短肽对MAbs的结合抗原表位进行鉴定。结果表明p27-C7和p27-A5的结合抗原表位位于p27蛋白的aa61～aa76(氨基酸序列为61SEGCTPYDINQMLNCV76);p27-D2的结合抗原表位则位于aa191～aa206(氨基酸序列为191EQTDAAVKNWMTQTLL206)。该结果为进一步深入了解p27的抗原特性和建立该蛋白的检测方法奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体表位鉴定

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表达小反刍兽疫病毒F基因重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性

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中国预防兽医学报 2011年第4期33卷 253-256页

作者：王芳周国辉曹丽艳李一经于力东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的... 详细信息

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRVF基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRVF蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F。经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达。该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低。间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答。

关键词：小反刍兽疫 F基因重组腺病毒表达免疫原性

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鸭β-防御素5基因的分离、鉴定及其生物学作用

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微生物学通报 2011年第11期38卷 1688-1697页

作者：张可心蔺利娟韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小... 详细信息

为克隆与表达鸭β-防御素5(AvBD5)基因及测定其生物学特性,采用RT-PCR方法从鸭肺脏组织中扩增到鸭AvBD5,将测得的序列与已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建进化树进行同源性分析。结果显示鸭AvBD5 cDNA大小为201 bp,编码66个氨基酸残基,内含6个位置保守的半胱氨酸残基,分别在分子内形成Cys1-Cys5、Cys2-Cys4和Cys3-Cys6共3对二硫键,与鸡AvBD5氨基酸同源性高达97%。进一步将其亚克隆到大肠杆菌pGEX-6p-1载体中进行原核表达。重组GST融合蛋白经纯化后,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性,盐离子浓度对其抗菌活性的影响,以及该重组GST融合蛋白对溶血活性的影响。鸭AvBD5重组蛋白分子量约为32 kD,具有良好的抗菌活性,对11种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响。此外,该重组蛋白对红细胞溶血活性极低。

关键词：鸭AvBD5 重组蛋白抗菌活性

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广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 32-36页

作者：孙迎廖晓萍王秀梅孙坚刘宝涛朱恒乾张悦王杨张美君刘雅红华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(***)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株***,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行... 详细信息

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(***)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株***,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株***中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中***主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。

关键词：大肠杆菌耐药性血清型毒力基因

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快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析方法的建立

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 718-722页

作者：李雪松符芳李海忠王伟陈欣郎越坤田华彬周艳君刘永刚蔡雪辉李曦中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 齐鲁动物保健品有限公司山东济南250100

为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(MAb)2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSV N蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠... 详细信息

为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(MAb)2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSV N蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13%和88.37%。两种方法的一致性Kappa值为0.882。建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性。该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析

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猪捷申病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2011年第9期33卷 704-708页

作者：刘杉杉赵亚荣胡峰吕超超胡泉博王贵华崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,... 详细信息

为建立同时检测猪捷申病毒(PTV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的多重RT-PCR(mRT-PCR)检测方法,本研究以PRRSV ORF6基因、CSFV Erns基因和PTV 5'-UTR基因为对象,建立检测3种病毒的mRT-PCR方法。特异性试验表明,该方法可以特异扩增3种病毒的基因,对大肠杆菌、猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒和猪流感病毒呈阴性反应;敏感性试验表明,PRRSV、CSFV和PTV的最低核酸检出量分别为7.11×102拷贝、7.81×103拷贝和8.43×102拷贝,略低于单一RT-PCR敏感性;应用该方法对69份送检样品进行检测,其中PRRSV、CSFV和PTV单纯感染检出率分别为28.99%、27.54%和56.52%,PRRSV和CSFV混合感染检出率为4.35%,PRRSV和PTV的混合感染检出率为11.59%,CSFV和PTV的混合感染检出率为13.04%,3种病毒的混合感染检出率为8.70%,与单一RT-PCR检测结果符合率为98.6%。本研究建立的检测方法快速简便,可以用于疾病的初步筛选,对临床早期诊断和流行病学调查具有重要意义。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒猪捷申病毒 mRT-PCR

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猪细小病毒抗体IPMA检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2011年第4期41卷 387-391页

作者：刘杉杉赵亚荣张超范吕超超胡泉博崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 大北农动物医学研究中心北京100097

建立了一种检测猪细小病毒(PPV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),对该方法的反应条件、特异性、敏感性和重复性进行了系统试验,并与HI和ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,PPV种毒按照1∶100的剂量接种后第48小时固定效... 详细信息

建立了一种检测猪细小病毒(PPV)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA),对该方法的反应条件、特异性、敏感性和重复性进行了系统试验,并与HI和ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,PPV种毒按照1∶100的剂量接种后第48小时固定效果最佳,辣根过氧化物酶-葡萄球菌A蛋白标记物的最适稀释度为1∶1 000,待检血清最适稀释度为1∶100。该IPMA方法与PCV2、PRV、PRRSV和CSFV的参考血清无交叉反应;PPV阳性血清稀释至1∶1 600时仍能检出;批内和批间重复性试验表明,该方法具有良好的重复性。符合性试验结果表明,该IPMA方法与HI和ELISA的符合率分别为96.0%与98.0%。用建立的IPMA方法检测PPV灭活疫苗免疫猪,结果免疫后第2周开始阳转,5周后全部阳转。对现地送检的400份猪血清样本进行检测,结果平均检出阳性率为86.5%。该IPMA方法的建立使PPV的血清学快速检测成为可能,可以用此方法开展PPV的抗体流行病学普查。

关键词：猪细小病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测

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