检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2008年第6期30卷 415-419页

作者：张云耿宏伟郭东春胡奇林相文华刘明杨涛林巍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽病室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物流感参考实验室黑龙江哈尔滨150001

本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别... 详细信息

本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%～82.9%和89.5%～91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%～99.8%和96.8%～99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%～99.8%和98.6%～99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%～88.7%和85.5%～93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%～99.6%和91.5%～99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%～99.6%和97.1%～98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。

关键词：鹅细小病毒番鸭细小病毒 NS基因 vp1基因序列分析

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火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建

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微生物学报 2008年第6期48卷 811-817页

作者：兰德松石星明王云峰崔红玉刘长军王玫胡文玮童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 河北北方学院动物科技学院动物医学系张家口075131

火鸡疱疹病毒(HVT)为一种α疱疹病毒,因其与马立克氏病病毒(MDV)抗原相关性而被广泛用作预防马立克氏病(MD)的活疫苗。【目的】本研究的目的是构建HVT全基因组感染性细菌人工染色体(BAC)。【方法】利用Eco-gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移... 详细信息

火鸡疱疹病毒(HVT)为一种α疱疹病毒,因其与马立克氏病病毒(MDV)抗原相关性而被广泛用作预防马立克氏病(MD)的活疫苗。【目的】本研究的目的是构建HVT全基因组感染性细菌人工染色体(BAC)。【方法】利用Eco-gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因和BAC载体pBeloBAC11的基本功能序列,构建重组病毒转移载体pGAB-gpt-BAC11。通过将pGAB-gpt-BAC11与HVT感染细胞总DNA共转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),待出现病毒噬斑后,利用霉酚酸(MPA)阻断核酸代谢途径,经过筛选获得纯化的重组病毒purified-rHVT。提取purified-rHVT感染细胞总DNA电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,在氯霉素抗性平板上筛选阳性克隆,并用酶切和PCR方法对其进行鉴定。随机选取BAC克隆提取BACDNA转染次代CEF,完成HVT重组病毒的拯救。【结果】经过6轮筛选后获得纯化的重组病毒,并筛选到25个BAC分子克隆化病毒。其中BAC6、BAC8和BAC10再次启动病毒感染,产生与野生型HVT感染CEF相似的病毒噬斑形态,说明已经获得拯救出的HVT重组病毒。【结论】本研究构建了HVT全基因组感染性细菌人工染色体,建立了HVT反向遗传操作技术平台。

关键词：火鸡疱疹病毒病毒拯救细菌人工染色体 BAC分子克隆化病毒

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新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第8期30卷 584-586,591页

作者：郭巍闫妍王英原刘霓虹戴伶俐李雪峰赵立平张春生贺磊周建华相文华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830001

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马... 详细信息

2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为A/equine/XinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。

关键词：马流行性感冒流感病毒 H3N8

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尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白基因DNA免疫的研究

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病毒学报 2008年第1期24卷 47-52页

作者：王喜军葛金英王清华胡森林祥梅步志高中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 农业部青岛动物检疫所国家外来病诊断中心青岛266032 中国检验检疫科学研究院北京100025

构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G。细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性。真核表... 详细信息

构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G。细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性。真核表达质粒pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G和pCAGG-NiV-F+pCAGG-NiV-GDNA分别按100μg/只的剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠,间隔4周加强免疫,第二次加强免疫3周后采血,分离血清备用。分别以重组杆状病毒感染Sf9细胞表达的重组NiV融合蛋白(rNF)和受体结合蛋白(rNG)为包被抗原,应用间接ELISA检测上述质粒DNA免疫血清中的特异性抗体,具有较高的敏感性和特异性。另外,中和试验结果表明,DNA免疫小鼠产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性,并且受体结合蛋白G基因DNA诱导中和抗体的滴度高于融合蛋白F基因DNA。结果表明,DNA疫苗具有防制尼帕病毒性脑炎的潜力。

关键词：尼帕病毒DNA免疫 F蛋白 G蛋白

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猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 944-948,991页

作者：韦天超田志军安同庆周艳君肖燕姜一峰郝晓芳张善瑞彭金美仇华吉童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 中国农业科学院上海兽医研究所上海200232

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线... 详细信息

本研究设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的特异性引物和Taq Man荧光探针,建立了一种检测PRRSV的快速、敏感、特异和重复性好的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。该方法在检测101拷贝/μL～107拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,比常规RT-PCR更敏感,可分别检测?

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR 病毒含量

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重组鸡β-防御素10蛋白的原核表达及其抗菌活性的测定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 765-769,789页

作者：廖文艳马得莹韩宗玺刘胜旺东北农业大学动物营养研究所黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAG... 详细信息

鸡抗菌肽属β-防御素类,在鸡的先天性免疫中发挥重要作用。本研究将克隆得到的鸡β-防御素-10基因(AvBD10)亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中构建了重组表达质粒pGEX-AvBD10。将重组质粒转化至BL21,于37℃用IPTG诱导培养不同时间,SDS-PAGE电泳与灰度扫描显示该重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.3%。表达的AvBD10融合蛋白以包涵体的形式存在,分子量约为31ku。重组蛋白经纯化后,以对数生长中期的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌和猪霍乱沙门氏菌为检测菌,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组鸡AvBD10蛋白的抗菌活性。结果显示,重组鸡AvBD10蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性。此外,重组鸡AvBD10蛋白在-70℃～100℃及在pH4～pH10条件下仍具有抗菌活性。

关键词：鸡AvBD10 融合蛋白抗菌活性

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牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究

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畜牧兽医学报 2008年第4期39卷 466-471页

作者：宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室哈尔滨150001 新疆动物防疫监督总站乌鲁木齐830063 黑龙江省结核病防治所哈尔滨150500

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)... 详细信息

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。

关键词：牛分枝杆菌融合DNA疫苗多价DNA疫苗

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黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能的影响

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中国预防兽医学报 2008年第12期30卷 978-980页

作者：司昌德闵亚宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清... 详细信息

本实验研究了饲料中添加0.1%或0.3%黄芪多糖(APS)对肉仔鸡生产性能和免疫功能的作用。结果表明,饲料中添加APS对肉仔鸡增重无显著作用;但能够显著提高肉仔鸡C3,C4和IgM含量。另外,黄芪多糖能够显著提高接种新城疫(ND)疫苗后的肉仔鸡血清抗ND抗体水平与血清淋巴细胞转化率。本研究结果表明,黄芪多糖具有增强肉仔鸡免疫功能的作用。

关键词：黄芪多糖肉仔鸡生产性能免疫功能

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我国部分地区牛轮状病毒的病原学调查及一株G10P型牛轮状病毒的分离鉴定

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中国预防兽医学报 2008年第10期30卷 755-759页

作者：常继涛崔久辉李建军郭德瑞王治才于力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 海拉尔农垦集团有限责任公司内蒙古海拉尔021000 新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样... 详细信息

应用轮状病毒RNA电泳方法,对内蒙古、黑龙江、新疆、北京、安徽等地共90份犊牛腹泻粪便样品进行检测。在内蒙古和新疆采集的粪样中共检出11份轮状病毒阳性样品,平均阳性率为12%(11/90)。阳性样品经RT-PCR分型鉴定,新疆2份和内蒙古5份样品属于G10型,新疆另一牛场的4份样品属于G6型。对所有阳性样品进行病毒分离,获得1株能在MA104细胞上稳定传代的病毒株,经鉴定该分离株属于G10P[11]型轮状病毒,命名为HM26。G10型牛轮状病毒的分离在国内尚属首次。

关键词：牛轮状病毒检测分离鉴定

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PCV2 PPV PRV和PRRSV多重PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2008年第8期38卷 691-696页

作者：岳丰雄崔尚金冉多良张超范中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立... 详细信息

参照GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因序列,设计了4对引物分别用于扩增PCV2 ORF2、PPV NS1、PRV gB、PRRSV N基因的目的片段。通过对反应因素进行优化,建立了检测PCV2、PPV、PRV、PRRSV的多重PCR(mPCR)诊断方法。敏感性和特异性结果显示,该mPCR对4种病毒的最低核酸检测量分别为29.0 pg(PCV2)、17.3 pg(PPV)、36.8 pg(PRRSV)、38.4 pg(PRV),而对猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒1型、牛病毒性腹泻黏膜病病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。119份临床样品的多重PCR检测结果显示,有3份样品同时感染PPV和PCV2,68份样品同时感染PRRSV和PCV2,其余样品均为PCV2阳性。表明,建立的多重PCR方法能够对PCV2、PPV、PRV、PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病病毒猪生殖与呼吸综合征病毒多重PCR

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