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13 篇 牛支原体
13 篇 多克隆抗体
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12 篇 elisa
12 篇 间接elisa

机构

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58 篇 中国农业科学院哈...
53 篇 中国农业科学院哈...
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48 篇 吉林农业大学
46 篇 中国农业科学院哈...
45 篇 中国农业科学院哈...
41 篇 中国农业科学院哈...
38 篇 中国农业科学院哈...
29 篇 中国农业科学院哈...
28 篇 中国农业科学院哈...
27 篇 东北林业大学
25 篇 中国农业科学院哈...
21 篇 中国农业科学院哈...
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18 篇 中国农业科学院哈...
16 篇 内蒙古农业大学
12 篇 中国农业科学院上...
11 篇 中国农业科学院哈...
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作者

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50 篇 王笑梅
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42 篇 童光志
42 篇 周建华
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40 篇 高玉龙
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35 篇 司微
35 篇 辛九庆
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33 篇 祁小乐
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31 篇 李媛
31 篇 朱远茂
30 篇 崔红玉

语言

586 篇 中文

检索条件"机构=兽医生物技术国家重点实验室／中国农业科学院哈尔滨兽医研究所大动物病研究室"

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0d分别接种1640培养液1mL和PCV2细胞培养毒1mL(107TCID50/mL),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0d分别接种1640培养液1mL和PCV2细胞培养毒1mL(107TCID50/mL),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0d、7d、14d、28d、35d进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7d、14d、28d和42d迫杀,连续攻毒组在首次接种后42d迫杀。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在迫杀前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：谭斌刘长明危艳武张超范冉多良刘永刚陆月华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室新疆农业大学动物医学院

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法,研制成PRRSV-IPMA试剂盒。对试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等指标进行了试验,并与进口试剂盒进行了对比。用IPMA法检测PRRS... 详细信息

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法,研制成PRRSV-IPMA试剂盒。对试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等指标进行了试验,并与进口试剂盒进行了对比。用IPMA法检测PRRSV试验接种猪血清抗体,第一周抗体检出率为50%,于第二周起抗体检出率为100%,未接种病毒对照组猪血清抗体检测均呈阴性。组装的PRRSV-IPMA试剂盒与国外IDEXX-ELISA试剂盒对42份血清进行平行检测的符合率为83.3%。用本试剂盒对黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场520份血清和6个发病猪场送检的80份血清进行了PRRS抗体检测,8/13猪场抗体阳性率大于50%,2/13猪场为阴性;6个发病场抗体阳性率分布在57.1%～100%;PRRS对我国猪群危害严重。PRRSV-IPMA试剂盒可为流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供一种可靠的技术手段。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) 抗体检测试剂盒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：袁婧刘长明魏萍危艳武张朝霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室东北农业大学动物医学院

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),... 详细信息

以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA),用于病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中抗原检测。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16h检测到抗原阳性细胞,于60h～72h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,以腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR法检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。DIFA为PRRSV的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感和特异的检测方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光抗原检测

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不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

不同宿主源NDV毒株对SPF鸡致病性研究

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：刘怀然孙敏华葛鑫刘胜旺刘培欣孔宪刚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室东北农业大学动物医学院

为阐明不同宿主、不同基因型新城疫病毒(NDV)对鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的Ⅶd基因亚型NDV6株,基因Ⅲ型鸡源和基因Ⅵb型鸽源毒株各1株,以及我国标准强毒F48E9,共9株NDV毒株,在15日龄SPF鸡上进行致病性实验,并采取攻毒... 详细信息

为阐明不同宿主、不同基因型新城疫病毒(NDV)对鸡致病性,选择分离自鸡、番鸭、鹅、健康野鸟的Ⅶd基因亚型NDV6株,基因Ⅲ型鸡源和基因Ⅵb型鸽源毒株各1株,以及我国标准强毒F48E9,共9株NDV毒株,在15日龄SPF鸡上进行致病性实验,并采取攻毒后不同时间段组织样品,以Real-time PCR检测其中病毒载量。结果表明,基因Ⅶd亚型NDV均为对15日龄SPF鸡高致病性毒株,发病率100%,死亡率90%以上;基因Ⅲ、Ⅵb型为导致SPF鸡发病但不死亡的中等毒力毒株。根据攻毒鸡的病程综合判断,Ⅶd亚型毒株毒力并未高于F48E9株,攻毒后病理变化、组织嗜性及病毒载量与F48E9也没有显著差异,提示这些毒株的流行不是毒力增强的结果。健康野鸟携带高致病性NDV强毒具有重要的生态学意义,警示应该进一步加强对野鸟的流行病学监控及相关研究。

关键词：新城疫病毒基因型致病性病毒载量

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PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

PCV2感染SPF昆明小鼠动物模型的建立

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会

作者：苗岚飞崔尚金张超范胡守萍陈长木周盛华岳丰雄戚亭谢红玲张垚中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室东北农业大学动物医学学院

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于... 详细信息

本试验将27只六周龄SPF昆明小鼠随机分为三组:阴性对照组12只、一次性攻毒组12只、连续攻毒组3只。阴性对照组和连续攻毒组于第0天分别接种1640培养液1ml和PCV2细胞培养毒1ml(TCID=10～7/ml),连续攻毒组应用相同的接种剂量和接种方式于第0、7、14、28、35天进行PCV2接种。阴性对照组和一次性攻毒组分别在接种后7、14、28和42天处死,连续攻毒组在首次接种后42天处死。试验过程中每天观察、记录小鼠生活状态并在处死前进行体重测量。脱颈椎法分批处死小鼠并采集心、肝、脾、肺、肾、胸腺、淋巴、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、舌、脑等组织进行病理切片观察。用PCR方法对机体中PCV2病毒的分布和含量进行分析,用ELISA试剂盒检测血清中的抗PCV2抗体水平。通过试验发现:三组试验小鼠体重均有增加,其中阴性对照组小鼠体重增长比率大于一次性攻毒组和连续攻毒组,而一次性攻毒组又明显高于连续攻毒组。PCR检测结果显示一次性攻毒组和连续攻毒组体内存在病毒复制并有其特定的转归规律,对照组体内无病毒复制。ELISA方法证实一次性攻毒组和连续攻毒组均产生抗PCV2抗体,但连续攻毒组抗体水平要明显高于一次性攻毒组,整个实验过程中对照组未检测到抗PCV2抗体。将采集的病料进行组织切片观察发现一次性攻毒组和连续攻毒组有明显的微观病理损伤,损伤最严重的器官是淋巴结,对照组未发现明显病理损伤。据此,根据攻毒组小鼠体重增长比率的差异、淋巴结内持续的病毒复制、血清PCV2抗体阳性、明显的微观病理损伤得到小鼠已经感染了PCV2的结论,并初步探讨了小鼠感染PCV2的检测标准。本试验成功建立了PCV2感染SPF昆明小鼠的动物模型,为PCV2的致病机理研究、疫苗研究等奠定了理论基础。

关键词： SPF昆明小鼠 PCV2 微观病理损伤动物模型

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猪圆环病毒2型与多病原混合感染的致病性研究进展

猪圆环病毒2型与多病原混合感染的致病性研究进展

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：袁婧刘长明魏萍东北农业大学动物医学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)于1997年首先被发现,并被确认为是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的重要病原。各国学者相继对PCV2病原学进行深入研究发

关键词：混合感染 PRRSV PCVAD 猪圆环病毒

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EIAV驴白细胞弱毒疫苗株减毒过程第61代毒前病毒全基因组DNA的克隆与分析

EIAV驴白细胞弱毒疫苗株减毒过程第61代毒前病毒全基因组DNA的克...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：赵薇薇王雪峰马建吕晓玲赵玉军周建华中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳 110161 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室，黑龙江哈尔滨 150001 沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳 110161

马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒株EIAVDLV是EIAV驴强毒株EIAVDV在驴白细胞传120余代减毒而成。为阐明EIAV疫苗的致弱机理，本研究选取减毒过程中兼有强毒株和弱毒株生物学特性的中间代次毒株EIAVDLV61(体外61代毒株)，采用LA-PCR(Long accu... 详细信息

马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒株EIAVDLV是EIAV驴强毒株EIAVDV在驴白细胞传120余代减毒而成。为阐明EIAV疫苗的致弱机理，本研究选取减毒过程中兼有强毒株和弱毒株生物学特性的中间代次毒株EIAVDLV61(体外61代毒株)，采用LA-PCR(Long accurate PCR)技术扩增几乎全长的前病毒基因组，获得了7941bp的片段。经T-A克隆和核苷酸序列测定，共得到16个EIAVDLV61的几乎全长的基因组克隆。测序结果显示，EIAVDLV61序列平均长为8234bp，16个克隆的核苷酸同源率为98.1±0.4％，与已发表的我国EIAV强毒辽宁株DIAVLV和疫苗株EIAVDLV的核苷酸同源率分别为98.0％和97.9％。本研究比较和分析了EIAVDLV61与EIAV强毒株和疫苗株基因组差异，为进一步探讨马传贫疫苗的致弱机理及免疫保护机制提供了有益的参考数据。

关键词：序列分析马贫血病毒减毒过程驴白细胞致弱机理生物学特性 EIAV疫苗

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猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华东北农业大学哈药集团中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室/慢病毒及马病课题组

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量... 详细信息

利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1:12800、1:25600、1:819200、1:51200和1:409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性。该研究为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：猴免疫缺陷病毒 p27蛋白单克隆抗体

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共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答

共表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白和猪瘟病毒E2蛋白的“自杀...

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室延边大学农学院动物医学系

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载... 详细信息

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。这表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。

关键词： "自杀性"DNA疫苗猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒泛DR表位 VP22转导蛋白共表达

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以BAC为基础的疱疹病毒反向遗传技术研究进展

以BAC为基础的疱疹病毒反向遗传技术研究进展

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会

作者：崔红玉王云峰石星明童光志中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室河北北方学院动物科技学院动物医学系

近年来,BAC分子克隆化病毒在现代疫苗的研究和应用仍处于活跃的探索阶段,其表现出来的优势令人鼓舞。BAC系统以其容量大(可至数Mb),能够稳定遗传且易于操作的载体系统巨大优势,成为众多分子生物学工作者实现对大基因组病毒进行