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饲料研究 2024年第14期47卷 128-133页

作者：张寒蒋永嘉刘为王志强肖霞扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室江苏扬州225009

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法,采用乙酸乙酯为提取剂,亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂,提取样品中的苯甲酸,流动相为甲醇∶0.02%磷酸水;水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马尿酸,... 详细信息

试验为建立猪小肠内容物中苯甲酸及其代谢物马尿酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法,采用乙酸乙酯为提取剂,亚铁氰化钾-乙酸锌为蛋白沉淀剂,提取样品中的苯甲酸,流动相为甲醇∶0.02%磷酸水;水、亚铁氰化钾-乙酸锌共同提取样品中的马尿酸,流动相为甲醇∶20 mmol/L乙酸铵溶液,紫外检测波长230 nm。结果显示:在猪小肠内容物中苯甲酸添加浓度为0.10~10.00μg/g内线性关系良好(R^(2)=0.9994);检测限为0.05μg/g,定量限为0.10μg/g;添加浓度在0.10、0.50、1.00、5.00、10.00μg/g时,回收率为(101.62±4.49)%,批内和批间变异系数分别低于4.80%和9.96%。猪小肠内容物中马尿酸添加浓度在0.30~10.00μg/g内线性关系良好(R^(2)=1.0000);检测限和定量限分别为0.10μg/g和0.30μg/g;马尿酸添加浓度在0.50、1.00、5.00、20.00μg/g时,回收率为(90.3±4.00)%,批内和批间变异系数分别低于5.93%和5.26%。研究表明,此方法苯甲酸及马尿酸预处理方法简单省时,无须固相萃取及使用有毒有害溶剂,节约成本,为猪小肠内容物中苯甲酸及马尿酸的检测提供参考。

关键词：猪苯甲酸马尿酸 HPLC 小肠内容物

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马度米星铵对成肌细胞转录组和超微结构的影响

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中国兽药杂志 2024年第6期58卷 40-46页

作者：陈新刘畅张雨梅扬州大学兽医学院兽医药理与毒理学实验室江苏扬州225009

探究马度米星铵对成肌细胞基因表达和超微结构的影响。马度米星铵处理C2C12细胞后,于细胞实时分析仪中记录细胞生长情况;利用Illumina HiSeq平台进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行基因本体富集分析;显微镜下观察细胞空泡情况并拍照... 详细信息

探究马度米星铵对成肌细胞基因表达和超微结构的影响。马度米星铵处理C2C12细胞后,于细胞实时分析仪中记录细胞生长情况;利用Illumina HiSeq平台进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行基因本体富集分析;显微镜下观察细胞空泡情况并拍照;透射电镜下观察拍照细胞超微结构。结果表明,马度米星铵抑制C2C12细胞生长,呈浓度和时间相关性;1μM马度米星铵处理细胞8 h后,差异表达基因共2450个,其中下调基因为1411个,上调基因1039个;基因本体分析发现,差异表达基因显著富集到空泡、DNA修复、转移酶活性正调控等;细胞内空泡显著增加;1μM马度米星铵处理细胞24 h后,细胞器明显肿胀、线粒体嵴结构髓样变、粗面内质网表面附着核糖体脱颗粒。由此可知,马度米星铵体外可诱导C2C12细胞空泡化,破坏细胞器结构,抑制细胞生长,从而导致其骨骼肌成肌细胞毒性作用,干预细胞空泡化是预防和治疗马度米星铵中毒的重要途径。

关键词：马度米星铵转录组空泡超微结构成肌细胞

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动物园大肠杆菌中mcr-1和blaNDM基因的流行特征及传播机制

动物园大肠杆菌中mcr-1和blaNDM基因的流行特征及传播机制

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：高艳云李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的耐药基因mcr-1、bla可介导粘菌素和碳青霉烯耐药,本研究主要分析了扬州某动物园大肠杆菌中mcr-1和bla耐药基因的流行情况及传播机制。材料与方法本研究于2022年9月从江苏省扬州市某动物园采集188份样品,其中包括动物（虎、豹、狼等...

目的耐药基因mcr-1、bla可介导粘菌素和碳青霉烯耐药,本研究主要分析了扬州某动物园大肠杆菌中mcr-1和bla耐药基因的流行情况及传播机制。材料与方法本研究于2022年9月从江苏省扬州市某动物园采集188份样品,其中包括动物（虎、豹、狼等）粪便及动物园环境样品,分别用含1μg/mL粘菌素的LB培养基和含2μg/mL美罗培南的麦康凯培养基筛选耐药菌;耐药菌分离纯化后通过MALDI-TOF MS鉴定细菌种属,并采用PCR技术检测mcr-1和bla基因

关键词：

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粪肥中耐药基因在生食果蔬生产环境中的流行特点与风险评估

粪肥中耐药基因在生食果蔬生产环境中的流行特点与风险评估

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：孙新然彭凯李岩李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的基于宏基因组学技术研究生食果蔬生产链中微生物群落、耐药基因及核心和辅助基因的组成,从而更加全面真实地反映畜禽养殖产生的粪肥中耐药基因对生食果蔬生产链的影响。材料与方法本研究于2022年10月在青岛、武汉和西安的果蔬生产...

目的基于宏基因组学技术研究生食果蔬生产链中微生物群落、耐药基因及核心和辅助基因的组成,从而更加全面真实地反映畜禽养殖产生的粪肥中耐药基因对生食果蔬生产链的影响。材料与方法本研究于2022年10月在青岛、武汉和西安的果蔬生产基地采集了283份样品,包括土壤、有机肥、果蔬和灌溉水样品。通过在含有替加环素(2μg/mL)、美罗培南(0.5μg/mL)和多粘菌素(1μg/mL)的培养基上进行耐药菌株筛选,并进行菌属鉴定。

关键词：

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同时携带mcr-8、blaNDM-1以及tmexCD1-toprJ1的肺炎克雷伯菌株特征分析

同时携带mcr-8、blaNDM-1以及tmexCD1-toprJ1的肺炎克雷伯菌株特...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：杨彭斌高艳云李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的肺炎克雷伯菌,是一种革兰氏阴性杆菌,是重要的人畜共患病原。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要包括产生耐药酶、形成生物被膜、外膜孔蛋白突变、外排泵等,耐药基因的水平传播是多重耐药菌株临床加剧的重要原因。本研究拟对禽养殖环境中...

目的肺炎克雷伯菌,是一种革兰氏阴性杆菌,是重要的人畜共患病原。肺炎克雷伯菌的耐药机制主要包括产生耐药酶、形成生物被膜、外膜孔蛋白突变、外排泵等,耐药基因的水平传播是多重耐药菌株临床加剧的重要原因。本研究拟对禽养殖环境中的耐药肺炎克雷伯菌流行以及基因组特征进行分析。

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鸭疫里默氏杆菌诱导突变株中tet(X)拷贝数异质性及调控替加环素耐药机制研究

鸭疫里默氏杆菌诱导突变株中tet(X)拷贝数异质性及调控替加环素耐...

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：王巧俊蒋永嘉桑雯菁王志强李瑞超扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

引言/目的动物源黄杆菌科中的鸭疫里默氏杆菌是替加环素耐药基因tet(X)的天然储库和潜在来源,并且其染色体上可携带多个拷贝的tet(X)。但携带tet(X)的鸭疫里默氏杆菌对替加环素的耐药表型较为复杂多样,部分菌株表现为敏感或低水平耐药...

引言/目的动物源黄杆菌科中的鸭疫里默氏杆菌是替加环素耐药基因tet(X)的天然储库和潜在来源,并且其染色体上可携带多个拷贝的tet(X)。但携带tet(X)的鸭疫里默氏杆菌对替加环素的耐药表型较为复杂多样,部分菌株表现为敏感或低水平耐药。因此,本研究通过体外诱导鸭疫里默氏杆菌替加环素耐药株的形成,并构建鸭疫里默氏杆菌tet(X)基因的缺失株与回复株,探究tet(X)对鸭疫里默氏杆菌替加环素耐药性的调控作用。

关键词：

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人类、动物和环境中tet(X)阳性大肠杆菌的全球分布和基因组特征

人类、动物和环境中tet(X)阳性大肠杆菌的全球分布和基因组特征

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：李岩李瑞超王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

目的替加环素被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌引起感染的最后一道防线。最近,在肠杆菌和不动杆菌中发现了质粒介导的替加环素耐药基因tet（X3）和tet（X4）,给人类健康和食品安全带来严重威胁。然而,关于tet（X）阳性大肠杆菌全球分...

目的替加环素被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌引起感染的最后一道防线。最近,在肠杆菌和不动杆菌中发现了质粒介导的替加环素耐药基因tet（X3）和tet（X4）,给人类健康和食品安全带来严重威胁。然而,关于tet（X）阳性大肠杆菌全球分布的系统研究仍然很少。材料与方法于2023年2月8日使用搜索条件"AMRenotypes:tet（X）"和"species_taxid:562"从国家生物技术信息中心（NCBI）的公共信息库中检索大肠杆菌。利用生物信息学软件分析tet（X）阳性大肠杆菌分离株中的耐药基因、毒力基因、插入序列以及质粒复制子。

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猪食欲肽受体2激动剂细胞筛选模型的建立及对天然中药提取物受体激动剂的筛选

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中国畜牧兽医 2020年第2期47卷 407-415页

作者：崔子鹤张海洁蔺帅姜军娜肖霞刘源王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室扬州225009 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

本研究旨在构建猪食欲肽受体2(pOX2R)的真核表达载体,探究其对天然中药提取物的药理学活性。将成功构建的pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和报告质粒PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]分别瞬时转染HEK293T细胞,利用萤火虫荧光素酶报告基因检测法测定阳性... 详细信息

本研究旨在构建猪食欲肽受体2(pOX2R)的真核表达载体,探究其对天然中药提取物的药理学活性。将成功构建的pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和报告质粒PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]分别瞬时转染HEK293T细胞,利用萤火虫荧光素酶报告基因检测法测定阳性细胞株在不同浓度激动剂Orexin A和Orexin B以及颉颃剂TCS作用下胞内cAMP水平。将目的质粒与报告质粒稳定共转染CHO-K1细胞,利用G418和潮霉素B进行抗性筛选,获得6株阳性细胞株和5株阴性细胞株。对具有促进食欲作用的18种天然中药材的36种提取物进行筛选,并用瞬时共转染了pcDNA3.1(+)-myc/pOX2R和PGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]的HEK293T细胞作为研究对象,对阳性提取物进行剂量效应分析。结果显示,Orexin A与Orexin B单独作用细胞时,可以使萤火虫荧光素酶的活性提高,呈明显的剂量效应关系,当与颉颃剂TCS联合作用时,TCS可以颉颃激动剂对受体的激活作用。通过优化药物刺激时间和二甲亚砜(DMSO)用量后,建立了以pOX2R为靶点的稳定、可靠的激动剂细胞筛选模型。经过初筛和复筛,得到了甘草水提物、白莲子和山药醇提物3种可以使阳性细胞荧光素酶表达量升高的提取物。提取物在一定浓度范围内可以刺激胞内荧光素酶的表达,呈剂量效应关系。以上结果为筛选出可以提高猪生产效率的先导化合物及相关药物研究提供参考依据。

关键词：猪食欲肽受体2(pOX2R) 萤火虫荧光素酶天然中药材筛选

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鸡可食性组织中尼卡巴嗪残留的测定高效液相色谱法

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中国动物传染病学报 2020年第3期28卷 73-79页

作者：蒋永嘉肖霞蓝玮璇江礼捷谢恺舟卜仕金王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理教研室扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

为建立鸡可食性组织(皮脂、肌肉、肝脏、肾脏)中尼卡巴嗪的高效液相色谱(HPLC)检测方法,本研究采用乙腈提取组织样品中尼卡巴嗪,正己烷除脂;流动相为乙腈:超纯水(55:45,v/v);紫外检测波长347 nm.结果显示:各组织中尼卡巴嗪浓度在50~1000... 详细信息

为建立鸡可食性组织(皮脂、肌肉、肝脏、肾脏)中尼卡巴嗪的高效液相色谱(HPLC)检测方法,本研究采用乙腈提取组织样品中尼卡巴嗪,正己烷除脂;流动相为乙腈:超纯水(55:45,v/v);紫外检测波长347 nm.结果显示:各组织中尼卡巴嗪浓度在50~1000μg/kg范围内呈良好线性关系(R^2≥0.9992);各组织中检测限和定量限均分别为10μg/kg和50μg/kg;组织中尼卡巴嗪添加浓度为50、200、400μg/kg时,皮脂中药物平均回收率为(87.18±3.85)%,肌肉中药物平均回收率为(93.33±3.76)%,肝脏中药物平均回收率为(80.77±3.63)%,肾脏中药物平均回收率为(85.27±6.58)%;日内和日间变异系数分别小于4.20%和4.30%.该方法前处理简单省时,无需使用固相萃取,节约了试验成本与时间,为尼卡巴嗪的检测提供了方法学基础.

关键词：鸡尼卡巴嗪 HPLC 可食性组织

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氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效同步模型研究

氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效同步模型研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：蒋永嘉肖霞江礼捷李聪聪卞玲张惠茹王志强扬州大学兽医学院兽医药理毒理研究室

[目的]本研究旨在建立氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型,确定最佳PK/PD参数值,为临床合理使用氟苯尼考,提高疗效,减缓耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌临床分离株r-... 详细信息

[目的]本研究旨在建立氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型,确定最佳PK/PD参数值,为临床合理使用氟苯尼考,提高疗效,减缓耐药性的产生或富集提供理论支持。[方法]测定氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌临床分离株r-3株的最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）,预防突变浓度（MPC）。以7日龄雏鸭为对象,建立鸭疫里默氏杆菌感染模型。对感染鸭口服不同剂量氟苯尼考（10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg）,高效液相色谱（HPLC）法测定雏鸭血清中的氟苯尼考浓度,研究氟苯尼考在感染鸭中的药动学特征。60只感染雏鸭,随机选取6只测定血液、肺脏和肝脏中的载菌量。其余54只随机分为9组,分别口服60、50、40、35、30、20、15、10、0mg/kg氟苯尼考,一天给药2次,连续3天。最后一次给药12h后处死雏鸭,测定血液、肺脏和肝脏中的载菌量。利用Inhibitory Effect Imax模型拟合PK/PD参数与抗菌效果之间的相关性。[结果]氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌r-3株的MIC、MBC、MPC值分别为0.5μg/mL、1μg/mL、1.6μg/mL。通过腹腔注射10～8cfu/mL的菌液感染雏鸭血液、肝脏和肝脏载菌量分别稳定在105cfu/mL、10～7cfu/g和10～7cfu/g,死亡率为20%。药动学结果显示,在10～60mg/kg范围内,氟苯尼考的C,AUC与给药剂量有良好的线性关系,相关系数分别大于0.9884和0.9988。将PK/PD参数AUC/MIC分别与血液、脏器中细菌减少量用Inhibitory Effect Imax模型进行拟合,拟合相关系数良好,R为0.9483、0.9327、0.9341 （血、肝、肺）,说明AUC/MIC是最佳PK/PD相关参数。体内药效学研究中,氟苯尼考给药后,细菌减少的log值随着药物浓度的增加而呈现梯度的变化。以不同的器官作为靶组织,氟苯尼考PK/PD参数AUC/MIC与体内药物抗菌效应拟合良好（R分别为0.9483、0.9327、0.9341）。在血液中,当AUC/MIC的值分别为14.00、34.29和53.75时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用,即鸭疫里默氏杆菌载菌量分别下降0、3和4 Logcfu/mL;在肝脏中,当AUC/MIC的值分别为10.54、35.07和49.76时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用;在肺脏中,当AUC/MIC的值分别为7.64、26.09和37.67时,氟苯尼考在体内呈现抑菌、杀菌和清除作用。[结论]氟苯尼考对鸭疫里默氏杆菌在鸭中的体内药动药效（PK/PD）同步模型的最佳PK/PD参数值为AUC/MIC,当药物作用于血液和肝脏时,达到抑菌、杀菌和清除作用的PK/PD参数仅较小差异,而药物作用于肝脏时,则差异显著,这可能与靶器官的特异性有关。

关键词：氟苯尼考鸭疫里默氏杆菌体内药动药效同步模型雏鸭

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